一、银杏叶制剂对低氧肺动脉平滑肌蛋白激酶Cα表达的影响（论文文献综述）
施熠炜,蒋蕊,秦小江,曾超[1]（2021）在《低氧对小鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及经典型蛋白激酶C表达的影响》文中进行了进一步梳理目的原代培养小鼠远端肺动脉平滑肌细胞（PASMC）, 探讨低氧对PASMC增殖及经典型蛋白激酶C（cPKC）各亚型表达的影响。方法原代培养小鼠远端PASMC, 实验用4～8代传代细胞。采用免疫印迹、免疫荧光技术检测PASMC中cPKC各亚型的表达情况。将PASMC分为常氧组和低氧组, 分别置于普通培养箱（5% CO2）和低氧培养箱（3% O2、5% CO2）中培养。常氧和低氧培养24 h、48 h、72 h后, Brdu法检测两组细胞增殖能力变化, 免疫印迹技术、流式细胞术检测PASMC中cPKC各亚型蛋白的表达变化。结果免疫印迹、免疫荧光技术检测显示小鼠PASMC存在cPKCα、cPKCβⅠ和cPKCβⅡ的表达, 而无cPKCγ表达。免疫荧光检测显示, 与常氧组相比, 低氧24 h、48 h、72 h后低氧组PASMC的Brdu阳性细胞与DAPI阳性细胞比值均显着增高（均P<0.05）, 其中低氧72 h时最明显。免疫印迹技术、流式细胞术检测结果显示, 与常氧组比较, 低氧24 h、48 h、72 h后低氧组PASMC中cPKCα、cPKCβⅠ、cPKCβⅡ蛋白表达均增高（均P<0.05）。结论低氧可能通过调控cPKCα、βⅠ和βⅡ信号通路诱导小鼠远端PASMC异常增殖。
朱晋生[2]（2021）在《低氧诱导的DNA甲基转移酶3A的上调在肺动脉高压中的作用研究》文中研究表明肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension,PAH）是一种进行性血管病变,以肺动脉内侧肥大、增生,平滑肌向非肌化的小动脉、细小毛细血管前小动脉延伸为特点,最终形成复杂的肺动脉闭塞病变、进行性肺动脉压力升高和右心衰竭的致命性疾病。临床上肺高压（pulmonary hypertension,PH）分为五大类,而PAH特指第一类PH,属于动脉性肺动脉高压。在畜牧生产中,高原地区牦牛在海拔差异地区进行迁移时,极易造成牛肺动脉高压。在肉鸡养殖业中,肉鸡缺氧而致肺动脉压升高,右心衰竭,称之为肉鸡腹水综合征（Ascites syndrome in broilers,ASB）。然而面对这种致命的疾病,目前还没有能够有效治愈它的药物。所以无论在人类医学还是在畜牧兽医中研究PAH都有重要的意义。内皮功能障碍被认为是促成这种血管病变的一种重要原因。内皮细胞凋亡抵抗以至细胞过度增殖导致肺动脉内皮细胞聚集形成严重的丛状病变以及由结构的改变造成肺动脉内皮细胞（pulmonary arterial endothelial cell,PAEC）紊乱,渗透性改变、一氧化氮合成能力降低等都是内皮功能障碍的诱因。PH患者肺小动脉狭窄乃至闭塞会引起氧气供应能力下降,陷入缺氧状态。慢性低氧会导致低氧诱导因子（hypoxia-inducible factors,HIFs）的累积,进而驱动内皮细胞增殖、血管再生、内皮间充质转换、氧化还原状态破坏等生理过程对PAH的发生、发展具有重要作用。已有研究表明PH的发生会导致超氧化物歧化酶SOD2启动子DNA甲基化升高,抑制其基因表达,从而影响ROS的产生。而低氧是否会引起全基因组水平广泛的DNA甲基化改变,还没有充分的研究。从低氧诱导因子HIF2α出发,分析了HIF2α对PAH鉴别能力,研究了低氧与DNA甲基化的关系,筛选出DNA甲基转移酶3A（DNA methyltransferase 3A,DNMT3A）作为一个低氧诱导因子的靶基因,并进一步研究了DNMT3A对内皮细胞功能的影响。【研究目的】为了探究低氧、低氧诱导因子在PAH发生发展过程中对DNA甲基化的作用,揭示DNMT3A对肺动脉内皮细胞功能的影响。【研究方法】利用GEO转录组数据,首先挖掘了野生型（WT）和Hif2a敲低（Hif2a-KD）cc RCC细胞株之间基因表达谱的差异。通过分析PAH患者的肺组织转录组数据,研究了HIF2α在PAH发病机制中的调控网络,以进一步评估HIF2α介导的基因集在人类PAH受试者中的识别能力。另一方面,利用来自PAH患者和健康对照的外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）转录组数据,进一步验证了HIF2α介导的PBMCs基因集作为PAH可能的诊断工具的潜力。为了验证HIF2α介导的基因对PAH的鉴定能力,用Phd2内皮细胞特异性敲除的自发性肺动脉高压小鼠进行了反向实验验证。通过对特发性肺动脉高压（idiopathic pulmonary arterial hypertension,IPAH）患者hPAECs和肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs）、的DNA甲基化检测,转录组表达分析,寻找候选DNA甲基转移酶目标。通过SuHx-PH（Hypoxia/SU5416-PH）、HPH（Hypoxia-PH）大鼠模研究了DNMT3A的表达与定位,并在大鼠肺动脉内皮细胞（rPAECs）、人肺动脉内皮细胞（hPAECs）中研究低氧、低氧诱导因子对DNMT3A表达的调控方式。利用siRNA干扰,研究了Dnmt3a-KD对rPAECs细胞增殖、凋亡、自噬、内皮间充质转化（endothelial to mesenchymal transition,Endo-MT）、NO、ROS产生等重要生理过程的影响,也探究了低氧对ROS调控因子NRF2表达的影响。【研究结果】第二章:（1）在GEO数据库获得的包含WT和Hif2a-KD Vhl缺陷人cc RCC细胞株基因表达丰度的数据集分析表明,在Hif2a-KD细胞中,19个GO项与基因下调显着相关。其中包括“血管发育”、“血管新生”、“对氧气水平下降的反应”、“红细胞稳态”等,所有这些GO项都与PAH的发病机制密切相关。（2）对GEO数据库PAH患者的肺组织转录组数据集分析表明,在Hif2a-KD cc RCC细胞中,19个显着下调的GO基因集中有14个与PAH患者肺组织中上调的GO基因集重叠。这些GO项的基因集评分热图显示了对照组和PAH患者之间存在明显分离,我们认为这14个重叠的GO项是由HIF2α介导的。（3）对14个HIF2α介导的GO项在两个已公布的肺组织转录组的数据集中进行测试,主成分分析（principal component analysis,PCA）、采用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve,ROC）以及曲线下面积（area under curve,AUC）等指标都表明HIF2α介导的GO项对PAH有很强的鉴别能力。（4）PAH患者的PBMCs转录组数据集分析表明,在PBMCs中存在的差异的HIF2α介导的GO项基因集可以作为PAH的生物标志以识别高危人群。（5）缺氧/常氧小鼠和Phd2EC-/-/WT小鼠之间肺组织的基因表达倍数变化（log2FC）的相关性分析表明,两组基因集的倍数变化呈显着正相关。Phd2EC-/-小鼠的TGFβ信号通路基因集评分明显高于WT小鼠,提示Phd2缺失小鼠内皮细胞中HIF2α和TGFβ信号通路的激活可能导致严重的肺动脉高压。在Hif2a-KD细胞中,19个显着下调的GO项中有7个与在Phd2EC-/-小鼠中上调基因集重叠,这表明了,在实验性自发性PH模型中,HIF2α介导的基因集对PH也具有很强的识别能力。第三章:（1）对PAH患者与非PAH对照者的hPAECs、hPASMCs的全基因组DNA甲基化进行检测,分析基因启动子甲基化水平。主成分分析表明,hPAECs和hPASMCs整体DNA甲基化模式存在差异,hPAECs启动子甲基化的平均水平显着高于hPASMCs,GOBP/KEGG基因集富集分析表明,PAH患者hPAECs中甲基化异常的基因与PH发病机制中的几个基因集显着相关,如“血管发育”和“细胞粘附的正调控”。类似地,一些PH相关的GOBP/KEGG项,如“钙信号通路”和“参与炎症反应的白细胞迁移”,也出现在PAH hPASMCs中的异常甲基化的基因集中。（2）PAH患者的hPAECs、hPASMCs的转录组数据显示,与对照组相比,在PAH hPAECs中Dnmt1和Dnmt3b显着下调,而Dnmt3a在PAH hPAECs中显着上调（FDR<5%）。相比之下,对照组和PAH组的hPASMCs中Dnmts基因的表达无显着差异。低氧条件下WT和Hif2a-KO小鼠肺内皮细胞DNA甲基转移酶基因的转录组数据表明,Dnmt1和Dnmt3b在Hif2a-KO细胞中显着上调,而Dnmt3a显着下调,预示着HIF2α对Dnmt3a存在潜在的转录调控作用。（3）蛋白印迹分析表明,与对照相比,DNMT3A在SuHx-PH大鼠肺组织中高表达,HPH大鼠肺组织分离的原代内皮细胞中高表达。（4）蛋白印迹分析表明,在rPAECs中低氧或、DMOG上调DNMT3A的表达;在hPAECs中低氧也促进了DNMT3A的表达。双荧光素酶报告试验则表明HIF1α/HIF2α通过低氧响应元件（hypoxia response element,HRE）结合Dnmt3a启动子,促进转录。第四章:（1）CCK、EdU、流式细胞周期分析表明,Dnmt3a-KD降低rPAECs的细胞活力、增殖能力并使细胞周期阻滞在G1期;早期凋亡标志物Annexin V的检测发现,Dnmt3a-KD促进rPAECs细胞的早期凋亡,免疫印迹分析、免疫细胞荧光表明,Dnmt3a-KD通过上调LC3B II和下调p62促进rPAECs的自噬。（2）TGFβ诱导rPAECs的Endo-MT试验表明,Dnmt3a-KD降低了rPAECs Endo-MT过程中α-SMA,SM22等生物标志物表达。（3）NO检测结果表明,Dnmt3a-KD增强了hPAECs的NO的产生,蛋白印迹结果表明Dnmt3a-KD下调p-e NOST495的表达,解除了对e NOS的抑制作用。（4）ROS检测结果表明,Dnmt3a-KD降低了rPAECs的ROS产生。蛋白印迹结果表明Dnmt3a-KD使NRF2下游基因NQO1/HOMX1上调,可能发挥潜在的清除ROS作用。（5）蛋白印迹结果分析表明,低氧降低了NRF2的表达,Hif2a-KD使NRF2表达下调,Nrf2-KD也同样使HIF2α在低氧条件下表达下调。双荧光素酶报告试验结果表明,NRF2与HIF2α之间没有通过启动子发生转录调控。【结论】HIF2α介导的基因集对PAH具有良好的区别能力。PAH使hPAECs、hPASMC启动子发生差异性甲基化,这种差异性甲基化是通过低氧诱导因子介导的DNMT3A表达水平改变而部分引起的。在肺动脉内皮细胞中,Dnmt3a-KD具有促进凋亡与自噬,促进NO产生,抑制由低氧引起的增殖,降低ROS生成,抑制由TGFβ诱导的Endo-MT过程等作用。提示了在PAH疾病进程中,Dnmt3a-KD对内皮细胞具有一定保护作用。
伊力亚尔·尼加提[3]（2021）在《基于多组学在慢性高原病机制的探索及厄贝沙坦的干预研究》文中提出背景:慢性高原病（CMS）被定义为发于生活在高海拔地区（>2500米）居民的临床综合征,其特征是红细胞增多和严重的低氧血症。通常,该病与中度或重度肺动脉高压有关,可能发展为高原肺心病并导致充血性心力衰竭。低压缺氧释放血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）等血管收缩物质,并通过诱导活性氧等细胞炎性因子的提高血管壁炎性和体内氧化应激水平,导致多组织的损伤。临床中对于CMS的治疗多使用血管扩张的靶向药物或钙通道阻断药,但这些药物不能扭转CMS的肺血管重塑过程,且有较多不良反应。厄贝沙坦（irbesartan）作为AngⅡ受体阻断剂,已在原发性高血压及糖尿病肾病得到广泛应用。因此,我们从“老药新用”的角度出发,将厄贝沙坦作为一种潜在候选药物,初步探索在CMS预防和治疗方面的可能性。目的:在成功建立CMS大鼠模型的基础上进行厄贝沙坦药物干预,通过多种现代生物技术,应用病理学、药理学和细胞生物学等研究方法,探讨CMS发生发展机制,及厄贝沙坦在对CMS大鼠心脏、肺等组织器官的保护作用。进一步从蛋白质组、血清代谢组和微生物组等角度深入探讨在高原的低压低氧环境中,机体所发生的改变及药物作用效果,为寻找针对CMS有效的防治措施提供理论依据。方法:1)模拟海拔5000米高原环境建立简单、有效的CMS动物模型,为厄贝沙坦防治CMS奠定实验基础。2)通过厄贝沙坦的干预明确CMS大鼠心肌损伤的发病机制,评价厄贝沙坦的改善作用。3)在体外建立心肌细胞缺氧损伤模型,应用细胞和分子生物学方法评价厄贝沙坦的有效性。4)以病理学为基础,研究厄贝沙坦对CMS大鼠模型肺的保护作用,探讨厄贝沙坦防治CMS的基础作用机制。5)基于蛋白组学方法,研究CMS的疾病发生发展规律及厄贝沙坦对CMS的保护机制,探讨CMS的潜在蛋白标志物。6)研究厄贝沙坦对CMS大鼠血清代谢组学的影响,探讨CMS小分子表达差异谱和潜在生物标志物,以及在该病发生发展过程中涉及的代谢通路。7)从CMS引发的出发,深入研究肠道微生物群落的组成和结构,寻找导致CMS肠道应激损伤的微环境和差异菌群,阐释CMS的发病机制。结果:1)与平原对照组（CG）相比,慢性高原病组（MG）的体重虽有下降但差异不明显;血氧分压（PaO2）、血氧饱和度（SaO2）和心肌丙二醛（MDA）均显着降低;平均肺动脉压（mPAP）、血红蛋白（Hb）、红细胞压积（Hct）、促红细胞生成素（EPO）、心肌SOD、心肌GSH-Px和右心肥厚指数（RVHI）升高。经过厄贝沙坦干预后发现,各剂量组均能改善以上检测指标,尤其以高剂量组（IB.H）的效果最为明显。2)心脏超声结果显示,与CG组相比,MG组左心房内径、右心房内径（横径）都有明显增加的趋势（P<0.05）,肺动脉内径、左心室的收缩期、右心室内径和舒张期上下径均明显缩小,右室前壁明显增厚,心脏射血分数降低。而经厄贝沙坦干预后,低剂量组（IB.L）左心室舒张期内径稍增大,肺动脉内径、左心室收缩期内径和右室前壁厚度无明显变化（P>0.05）,中剂量（IB.M）和高剂量（IB.H）肺动脉内径、左心室收缩期和舒张期内径均增大,射血分数提高（P<0.05）。3)心肌HE染色和透射电镜结果显示,MG组可见心肌间质血管和心外膜下血管轻度充血,心肌肌节模糊,横纹消失,肌原纤维排列错乱;脂滴增多;线粒体增生、呈梭型、嵴断裂,线粒体局部嵴溶解成絮状。IB.L和IB.M组可见近心外膜处血管充血,偶见嗜酸性病变,间质存在炎细胞,少见颗粒样变,心肌肌原纤维排列整齐,Z线轻微不齐;内质网轻度扩张;线粒体嵴排列整齐、规则,部分线粒体周边有轻微水肿。IB.H组可见心肌结构正常,偶见轻度充血;未见嗜酸性病变细胞和炎细胞浸润。4)厄贝沙坦可抑制低氧诱导的细胞损伤。MTT结果表明,在不同时间处理后,厄贝沙坦对低氧处理48h的H9C2细胞有明显的增殖作用,且在0-100 μM浓度范围内对心肌H9C2细胞具有一定程度的保护作用,厄贝沙坦对低氧损伤48h后的H9C2细胞的IC50为50.14 μM。细胞凋亡结果表明,低氧损伤48h后的的H9C2细胞明显诱导了细胞凋亡（P<0.05）,5 μM浓度IB、25 μM浓度IB和50 μM对H9C2细胞低氧损伤诱导的细胞凋亡有保护作用（P<0.05）,其中50 μM具有最有效的损伤修复作用。流式细胞术和荧光显微成像结果显示,低氧损伤组（hypoxia）的活性氧（Reactive oxygen species,ROS）含量与正常细胞组相比显着增加（P<0.05）,厄贝沙坦低剂量组（IB 5 μM）的ROS含量与hypoxia组相比,无统计学差异（P>0.05）,中高浓度厄贝沙坦剂量组（IB 25 μM和IB 50 μM）的ROS含量都有所降低,且都有统计学差异和剂量关系（P<0.05）。5)肺动脉的HE染色和透射电镜结果显示,CMS大鼠的肺动脉壁弹力纤维明显增厚,肺动脉壁丛状病变,中层增生,内膜增生严重,外膜成纤维细胞层肌化。IB.L组可见肺动脉管壁厚度较一致,内膜轻微增生,肺动脉壁纤维细胞连续性较好,管壁中膜轻度增生,外膜轻度纤维化。IB.M组可见肺动脉轻度增生,内膜平滑,中膜平滑肌细胞轻度增生,外膜成纤维细胞轻度增生,可见丛状病变。IB.H组可见肺动脉内膜平滑,轻度增厚,肺动脉壁细胞数目增多,弹力纤维层可见丛状病变,外膜成纤维细胞肌化。6)肺的HE染色和透射电镜结果显示,MG组大鼠肺组织在显微镜下观察,发现肺泡间隔增生明显,存在塌陷和代偿性扩张现象,肺泡壁毛细血管扩张、充血,肺泡腔水肿并有大量炎细胞浸润。IB.L组肺泡间隔增厚、塌陷和代偿性扩张,肺间质毛细血管扩张充血。IB.M组肺泡腔明显,肺泡壁薄,毛细血管轻度出血,但未见炎细胞浸润。IB.H组肺泡间隔增厚明显,部分肺泡代偿性扩张或塌陷,肺间质毛细血管扩张充血,病变程度比中剂量组略轻。7)蛋白质组学鉴定得到550个蛋白,其中MG组与CG组相比,共有94个蛋白发生了改变,厄贝沙坦组（IB）与MG组相比共有154个蛋白发生了变化,在这两个对比组中有40种差异表达蛋白,聚类分析后发现有27个蛋白显着改变。GO和KEGG通路分析揭示了胆固醇代谢通路在慢性高原病的发生中是至关重要,ELISA和免疫组化验证差异蛋白（Apo-A1、Apo-C1、Apo-E、IGF-1、Profilin1 和 Colla1）,发现这6中蛋白在MG组中表达量升高,在IB组中表达量降低。8)NMR代谢组学检测结果显示,与CG组比较,MG组大鼠血清中有20种差异代谢物（脂类、异亮氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、柠檬酸、缬氨酸、肌酸、3-羟基丁酸、乳酸、乙酸、丙氨酸、胆碱、糖蛋白、乙酰乙酸、丙酮酸、牛磺酸、脯氨酸、甘氨酸、瓜氨酸、α-葡萄糖）,且这20种代谢物在厄贝沙坦干预后被逆转,差异有统计学意义。代谢通路富集分析后发现有10条代谢通路,主要是:酮体合成和分解、丙酮酸代谢、牛磺酸代谢等。9)肠道菌群多样性分析结果表明:OTU分析结果表明本研究的各组样本量数量足够;三个组（CG、MG、IB）共有OTU数量为981个;在大鼠肠道内容物的菌群进行门组成的分析,MG组中厚壁菌的比例明显高于CG组和IB组,而拟杆菌的比例则低于其他两组。厄贝沙坦干预可使厚壁菌和拟杆菌门的细菌恢复到与CG相似的水平。MG组F/B 比值是CG组大鼠的3倍,并且通过厄贝沙坦的作用,该比值恢复到正常值。在科水平上,lactobacillaceae、peptostreptococcaceae、erysipelotrichaceae、bacteroidales＿s24-7在慢性高原病组的丰度下降,给予厄贝沙坦后丰度又上升至正常水平;lachnospiraceae、prevotellaceae等菌的丰度在慢性高原病组上升,厄贝沙坦干预后这些菌的丰度又接近正常水平。在慢性高原病组中shannon指数升高而simpson指数下降,厄贝沙坦的干预后shannon和simpson又接近正常组水平。表示高原低氧暴露会导致肠道菌群的多样性增加,厄贝沙坦能使菌群的多样性回归正常状态。PCA分析的前2个主成分解释了总变异的32.52%和20.91%,表明慢性高原病大鼠与正常大鼠存在着明显的差异,给予厄贝沙坦后的菌群结构趋向于正常组。PLS-DA结果表明慢性高原病大鼠和平原对照组存在明显的差异,以及给予厄贝沙坦后的菌群结构与正常大鼠也存在着明显的差异。功能预测分析结果显示,测序菌群相关的主要生物学功能集中:氨基酸转运和代谢;转录;复制;重组和修复;碳水化合物运输和代谢;翻译;核糖体结构等。结论:本研究初步结论如下:1)厄贝沙坦对CMS相关指标均有明显改善,可纠正CMS大鼠右心肥厚和右心舒张收缩功能,且能通过改善氧化应激水平和组织结构对心肌起到保护作用。在细胞水平上发现,厄贝沙坦可通过减少胞内ROS含量减少低氧损伤的心肌细胞凋亡率。2)慢性缺氧后厄贝沙坦通过抑制AngⅡ的受体活性,从而抑制IGF-1来达到缓解血管内皮细胞的损伤和血管重构,同时通过改变胆固醇代谢相关蛋白（Apo-A1、Apo-C1和Apo-E）浓度,抑制胆固醇代谢对血管内皮的损伤,最终达到缓解慢性高原缺氧造成的肺动脉高压、炎症反应以及心脏损伤的效果。3)厄贝沙坦可纠正慢性高原病大鼠的能量代谢、氨基酸代谢等多条途径,显着影响体内炎性水平和一氧化氮（NO）的合成代谢,改善肺动脉的收缩和重构过程,对厄贝沙坦干预慢性高原病提供了可靠的理论依据。4)CMS大鼠体内菌群的多样性水平显着上升,其菌群结构组成方面与正常大鼠也有着显着的差异,出现具有明显的“致病特征”,这些组成和丰度的异常均能被厄贝沙坦改善。通过对CMS大鼠肠道微生物多样性的研究,丰富了我们对高原缺氧环境对肠道微生物群落改变的理解,对于今后深入研究CMS的发病机制和治疗药物都有着重要的启示作用。
蒋蕊[4]（2018）在《新奇型蛋白激酶C在低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用和机制研究》文中研究表明第一部分:磁性分离法分离培养小鼠肺动脉平滑肌细胞目的:通过磁性分离法分离小鼠原代肺动脉平滑肌细胞,提高细胞分离的成功率,为体外培养原代肺动脉平滑肌细胞并构建低氧模型打下良好的实验基础,同时对小鼠原代肺动脉平滑肌细胞的分离方法提出新思路和新参考。方法:1.选取体重20g左右的健康成年C57BL/6J小鼠,在无菌条件下采用腹腔注射4%水合氯醛（0.01ml/g）对小鼠进行麻醉。2.麻醉后,解剖小鼠使其暴露肾脏并切断肾动脉除血,之后暴露胸腔,自右室向肺动脉方向缓慢注入灭菌的PBS液3-5ml,直到肺变白,用钝性分离器分离暴露气管。3.向肺右室内缓慢注入PA agarose 3-5ml,直到肺变成灰色。将Lung agarose 2-3ml注入气管内,直到凝胶充满肺组织。取走心肺,置入冰冷PBS液约5分钟,使凝胶凝固。4.弃掉肺动脉主干及左右肺动脉分支,切碎肺组织,移入50ml灭菌离心管中,连接磁铁,此时含铁组织会移至靠近磁铁的离心管管壁上,吸出PBS液,用灭菌的PBS液5ml清洗肺组织3次。5.向离心管中加入6ml胶原酶溶液,倒入培养皿,37℃消化1小时。1小时后,用20ml注射器反复抽吸肺组织与胶原酶,移入灭菌50ml离心管,连接磁铁,吸走上层液,用5ml完全培养液清洗3次,灭活胶原酶,最后加完全培养液,倒入培养皿,放入培养箱内过夜（5%CO2,37℃）。6.第2天,将培养皿内组织碎片倒入50ml离心管,弃掉培养皿,连接磁铁,完全培养液清洗3次,再倒入新的无菌培养皿内,置于5%CO2,37℃培养箱继续培养,3-5天更换培养液。在培养过程中,据细胞生长情况可再次磁性分离培养皿内组织碎片,倒入新的培养皿内,收集细胞。7.通过调整培养基的方法,使肺动脉平滑肌细胞成为所收集细胞中的优势细胞。8.在第一次传代中,将细胞悬液靠近磁铁,含铁颗粒受磁力吸引被分离,从而获得较纯的细胞。进而进行传代和稳定培养。9.通过普通光学显微镜以及激光共聚焦显微镜对所分离的细胞进行鉴定。结果:1.在首次分离肺动脉平滑肌细胞后,通过普通光学显微镜可见呈黑色且含有铁颗粒的小血管组织碎片。表明铁粉与凝胶混合液经右室向肺动脉内注射成功,铁粉通过凝胶充满肺动脉内。3天后可见细胞从含铁小血管周围爬出,细胞形态表现为长梭形放射状。经过传代,在7-10天后血管平滑肌细胞呈“峰-谷”状生长。由此,从形态学初步鉴定为肺动脉平滑肌细胞。2.在激光共聚焦显微镜下观察免疫荧光染色的小鼠肺动脉平滑肌细胞,蓝色为细胞核,绿色荧光为平滑肌蛋白阳性表达,红色荧光表示平滑肌肌球蛋白重链阳性。通过免疫荧光中两种平滑肌细胞相关的特异性蛋白的阳性表达,说明磁性分离法所分离的细胞为肺动脉平滑肌细胞。结论:采用磁性分离法分离培养小鼠肺动脉平滑肌细胞的方法切实可行,分离出的肺动脉平滑肌细胞状态良好,为后续实验的进行奠定了良好的基础。第二部分:低氧对肺动脉平滑肌细胞增殖和新奇型蛋白激酶C表达的影响目的:1.明确低氧对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。2.明确低氧对肺动脉平滑肌细胞中新奇型蛋白激酶C表达的影响。方法:1.磁性分离法分离健康成年的C57BL/6J小鼠的原代肺动脉平滑肌细胞,经体外培养传代至细胞稳定生长。2.选取生长状态良好的小鼠肺动脉平滑肌细胞,按照不同的低氧处理时间,将细胞分为低氧24h组、48h组、72h组并且每组均设置常氧对照组。CCK-8法、Brdu法检测各组细胞的增殖率。3.选取生长状态良好的小鼠肺动脉平滑肌细胞,按照不同低氧处理时间,将细胞分为低氧0h组、24h组、48h组、72h组,流式细胞术、Western blot检测不同低氧诱导时间下PKCδ、PKCε、PKCε、PKCζ四种不同的PKC的表达情况。4.对各组实验结果进行数据整理和统计学分析。结果:1.低氧可以促进肺动脉平滑肌细胞增殖。由CCK-8检测结果可知,低氧24h组与常氧24h组的细胞存活率无明显差别（P>0.05）,同样低氧48h组与常氧48h组的细胞存活率也无明显差别（P>0.05）。但是低氧72h组相比于常氧72h组的细胞存活率有明显的提高（P<0.05）。由Brdu检测细胞增殖结果可知,低氧24h组与常氧24h组相比无明显差别（P>0.05）,低氧48h组与常氧48h组的细胞存活率有提高（P<0.05）。低氧72h组相比于常氧72h组的细胞存活率有明显的提高（P<0.05）。CCK-8与Brdu的结果一致,可见低氧可以促进肺动脉平滑肌细胞的增殖且低氧诱导72h时肺动脉平滑肌细胞的增殖效果显着增加,所以选取低氧诱导72h作为后续实验条件。2.低氧可以诱导肺动脉平滑肌细胞中PKCδ、PKCε表达的上调。由流式细胞术检测结果可知,PKCδ、PKCε在低氧72h时的表达情况显着提高（P<0.05）而PKCε、PKCζ在低氧72h时的表达无显着差异（P>0.05）。Western blot检测结果同样显示PKCδ、PKCε在低氧72h时的表达情况显着提高（P<0.05）而PKCε、PKCζ在低氧72h时的表达无显着差异（P>0.05）。由以上两种结果可知,在肺动脉平滑肌细胞中,低氧可以诱导肺动脉平滑肌细胞中PKCδ、PKCε表达的上调而PKCε、PKCζ的表达无明显变化。结论:1.低氧条件可以诱导小鼠肺动脉平滑肌细胞的增殖且在低氧处理72h时增殖效果最显着。2.低氧可以诱导小鼠肺动脉平滑肌细胞中PKCδ、PKCε表达的上调。第三部分:低氧通过上调PKCδ和PKCε而促进肺动脉平滑肌细胞的增殖目的:1.明确低氧诱导PKCδ、PKCε上调与肺动脉平滑肌细胞增殖间的关系。2.明确低氧诱导PKCδ、PKCε上调后影响肺动脉平滑肌细胞增殖的可能机制。方法:1.采用磁性分离法分离健康成年的C57BL/6J小鼠的原代肺动脉平滑肌细胞,经体外培养传代至细胞稳定生长。2.选取生长状态良好的肺动脉平滑肌细胞,根据不同的干预处理将其分为以下几组。常氧对照组（Normoxia）、常氧+PKCδ激动剂组（Normoxia+PMA）、低氧组（Hypoxia）、低氧+PKCδ抑制剂组（Hypoxia+Rottlerin）。常氧对照组（Normoxia）、常氧+PKCε激动剂组（Normoxia+PMA）、低氧组（Hypoxia）、低氧+PKCε抑制剂组（Hypoxia+PKCεinhibitor pepitide）。3.构建含有sh RNA片段分别抑制PKCδ和PKCε的慢病毒载体,并设置空载慢病毒载体对照组。按照不同干预进行分组:不转染慢病毒组（Normal）、转染空载慢病毒组（Scramble）、转染PKCδ敲低的慢病毒组（PKCδknockdown）、转染PKCε敲低的慢病毒组（PKCεknockdown）。4.Western blot检测各组中PKCδ、PKCε、P-AKT、AKT、P-ERK、ERK的表达情况。5.Brdu检测各组细胞增殖情况。6.对各组实验结果进行数据整理和统计学分析。结果:1.低氧上调PKCδ、PKCε导致肺动脉平滑肌细胞增殖。由Brdu检测结果可知,与各自低氧组相比,常氧+PKCδ激动剂组和常氧+PKCε激动剂组的细胞增殖无明显差异（P>0.05）;与各自常氧组相比,低氧+PKCδ抑制剂组和低氧+PKCε抑制剂组的细胞增殖情况无统计学差异（P>0.05）。与各自常氧组相比,常氧+PKCδ激动剂组和常氧+PKCε激动剂组的细胞增殖明显提高（P<0.05）,说明单纯上调PKCδ和PKCε可以诱导肺动脉平滑肌细胞的增殖。与各自低氧组相比,低氧+PKCδ抑制剂组和低氧+PKCε抑制剂组的细胞增殖情况明显降低,说明在低氧条件下抑制蛋白激酶C使得肺动脉平滑肌细胞的增殖被抑制。2.低氧通过上调PKCδ和PKCε而诱导AKT、ERK的磷酸化。由Western blot结果可知,与各自常氧组相比,常氧+PKCδ激动剂组和常氧+PKCε激动剂组的PKCδ和PKCε的表达明显升高（P<0.05）;与各自低氧组相比,低氧+PKCδ抑制剂组和低氧+PKCε抑制剂组的PKCδ和PKCε的表达明显降低（P<0.05）,说明PKCδ和PKCε的激动剂和抑制剂的激动效果和抑制效果符合实验要求。与各自常氧组相比,常氧+PKCδ激动剂组和常氧+PKCε激动剂组的AKT和ERK的磷酸化显着增加（P<0.05）;与各自低氧组相比,低氧+PKCδ抑制剂组和低氧+PKCε抑制剂组的AKT和ERK的磷酸化被显着抑制（P<0.05）而常氧+PKCδ激动剂组和常氧+PKCε激动剂组的AKT和ERK的磷酸化无明显变化（P>0.05）。说明低氧可以通过诱导PKCδ和PKCε的上调而增加AKT和ERK的磷酸化。3.低氧通过上调PKCδ和PKCε诱导AKT、ERK的磷酸化增加而诱导肺动脉平滑肌细胞增殖。慢病毒转染后,低氧培养72h,由Western blot结果可知,PKCδ和PKCε的敲除成功,与正常低氧组相比,PKCδ和PKCε的敲除组AKT和ERK的磷酸化明显被抑制（P<0.05）,且由Brdu检测结果可知,与正常低氧组相比,PKCδ和PKCε的敲除组的细胞增殖被明显抑制。说明蛋白激酶C被敲除而导致AKT和ERK的磷酸化下降,从而导致肺动脉平滑肌细胞的增殖被抑制。结论:在肺动平滑肌细胞中,低氧可以通过诱导PKCδ和PKCε的上调,进而诱导AKT和ERK的磷酸化增加,从而促进细胞增殖。
王雪芹[5]（2015）在《银杏叶提取物对机体及运动能力影响》文中提出银杏叶提取物（EGB）是一种作用广泛、不良反应较少的天然药物。其有效成分主要为银杏黄酮和内菇类,具有清除氧自由基、增强中枢神经系统功能、改善血液流变学状态、抗炎、抗过敏等作用;另外,还具有增强机体运动能力、延长运动时间和延缓运动疲劳产生等作用。现将近年来相关研究进行综述。1 EGB对运动神经元和脑组织的影响薛锋等〔1〕发现与对照组相比,EGB组乙酰胆碱酯酶、酸性磷酸酶活性、损伤侧前角运动神经元数目及前角运动神经元超
李锦春[6]（2006）在《间歇光照、呋喃苯胺酸、维生素C对肉鸡PHS的预防及其机理研究》文中提出尽管国内外已对肉鸡肺动脉高压综合征（pulmonary hypertension syndrome，PHS）又称肉鸡腹水综合征（ascites）进行了多年研究，但它仍然是使世界养禽业遭受重大经济损失的一个疾病。全世界每年约有4％的肉鸡死于PHS，造成高达10亿美元的损失。由于肉鸡PHS是一个多因性疾病，药物防治有局限性并且存在残留的问题。早期限饲可以降低PHS发病率，但会引起应激。控制光照能降低肉鸡PHS发病率和应激，并且方便、省电，但公认效果显着的1小时明：3小时暗的措施在国内难以执行和推广。寻求一种易行的控光措施更具有实际意义。由于对控制光照防治肉鸡PHS的机理尚不完全明了，方案的选择存在很大盲目性，因此，首先要清楚控制光照防治PHS的作用机制。关于控制光照防治肉鸡PHS的报道主要是观察对生产性能和PHS发病率的影响，而对其机理仅从缺氧状况、红细胞比容、血液中甲状腺素、生长激素和糖皮质激素方面进行了研究。肺血管重构导致肺动脉高压（pulmonary hypertension，PH）持续发展并难以逆转，是哺乳动物PH的重要病理基础。PHS肉鸡也发生了肺动脉重构，但是其在肉鸡PHS的发生过程中是否占据与哺乳动物肺血管重构同等重要的地位，机制如何?控制光照降低PHS发病率的作用机理是否与肺血管形态改变有关，尚不清楚。因此，本文从氧自由基、血小板源生长因子-β受体（PDGF-βR）、蛋白激酶C-α（PKCα）及增殖细胞核抗原（PCNA）等变化入手，在体内和体外两个层次上探讨间歇光照对肉鸡肺血管重构的影响及其分子生物学机制，为指导生产实践提供理论依据。试验Ⅰ间歇光照对肉鸡肺动脉高压综合征发病率及肺血管重构的影响。观察在低温环境下间歇光照对肉鸡PHS的防治效果及其对肉鸡肺血管重构的影响。320羽肉鸡随机分为4组：常温组按常规饲养；低温三个组采用低温诱发PHS，并于9d～30d分别在夜间停止光照0、3、5h，以后恢复连续光照。记录PHS发病数、体重和耗料量，测定肺动脉的管壁面积与血管总面积之比（WA／TA）、平均中膜厚度（mMTPA）等指标。结果环境低温使PHS发病率升高，反映血管重构指标的WA／TA和mMTPA值也显着升高，而间歇光照能够有效地降低寒冷诱发的PHS发病率和上述各项值。控制光照期间间歇光照组肉鸡体重低于低温对照组，但最终体重和料重比与之无显着差异。在肉鸡生长早期实施间歇光照制度能够有效降低低温诱发的PHS发病率，抑制肺小动脉重构可能是其重要机理之一。试验Ⅱ间歇光照对肉鸡肺动脉高压综合征发病率及体内脂质过氧化作用和抗氧化酶活性的影响。观察控制光照对低温诱导的肉鸡PHS发病率及体内脂质过氧化作用和抗氧化酶活性的影响。320羽肉鸡随机分为四个组。常温组按常规饲养；低温三个组采用低温诱发PHS，并于9d～30d分别在夜间停止光照0、3、5h，以后恢复连续光照。低温显着升高了PHS发病率、右心全心比（RV／TV）、肺厚壁末稍血管百分率（TWPV％）和丙二醛（MDA），而使血浆超氧化物歧化酶（SOD）活性降低。控制光照使SOD活性升高而显着降低了PHS发病率、RV／TV、TWPV％和MDA。减轻体内脂质过氧化作用，提高机体抗氧化酶的活性和减轻以非肌型肺动脉肌型化为特征肺血管重构，可能是间歇光照降低肉鸡PHS发病率的部分机制。试验Ⅲ间歇光照对低温诱导的肉鸡肺细小动脉血管重构及其PKCα表达的影响。观察在低温环境下间歇光照对肉鸡肺细小动脉蛋白激酶Cα（PKCα）表达的影响及其与肺血管重构的关系。320羽肉鸡随机分为四个组。常温组按常规饲养；低温三个组采用低温诱发PHS，并于9d～30d分别在夜间停止光照0、3、5h，以后恢复连续光照。测定RV／TV、MDA、SOD、WA／TA、mMTPA、红细胞压积（PCV）；采用免疫组化方法标记肺动脉PKCα，以OD值代表PKCα的表达。结果环境低温使肉鸡PHS发病率升高，RV／TV、WA／TA、mMTPA、MDA值和肺细小动脉PKCα的OD值显着升高，而间歇光照能够有效地降低寒冷诱发的PHS发病率和上述指标。肺小动脉PKCα的表达从23日龄起与mMTPA和WA／TA呈正相关，并且具有显着性。寒冷诱使肉鸡肺小动脉PKCα表达的上调可能参与了肺血管重构的形成过程，间歇光照抑制肺血管重构可能与PKCα下调有关。试验Ⅳ间歇光照对低温诱导的肉鸡肺细小动脉血管重构及其PDGF-β受体表达的影响。观察在低温环境下间歇光照对肉鸡肺细小动脉PDGF-β受体表达的影响，及其与肺血管重构的关系。320羽肉鸡随机分为四个组，常温组按常规饲养；低温三个组采用低温诱发PHS，并于9d～30d分别在夜间停止光照0、3、5h，以后恢复连续光照。测定PCV、WA／TA和mMTPA等指标；采用免疫组化方法标记肺动脉PDGF-β受体，以OD值代表PDGF-β受体的表达。结果环境低温使PDGF-β受体表达上调，WA／TA和mMTPA值也显着升高，而间歇光照明显抑制血管重构，并且使肺动脉PDGF-D受体的OD值降低。PDGF-β受体的表达从23日龄开始与mMTPA和WA／TA呈正相关，并且具有显着性。PDGF-β受体表达上调可能与低温所致肺小动脉重构有密切关系，而间歇光照减轻肉鸡肺血管重构可能与抑制PDGF-β受体表达有关。试验Ⅴ间歇光照对低温诱导的肉鸡肺细小动脉血管重构及其PCNA表达的影响。观察在低温环境下间歇光照对肉鸡肺细小动脉增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响，并探讨PCNA与肺血管重构的关系。320羽肉鸡随机分为四个组，常温组按常规饲养；低温三个组采用低温诱发PHS，并于9 d～30 d分别在夜间停止光照0、3、5 h，以后恢复连续光照。测定WA／TA和mMTPA等指标；采用免疫组化方法标记PCNA，图像分析软件分别计数每条血管中膜PCNA阳性细胞数和细胞总数，求出百分数即为增殖指数（PI）。结果环境低温使肺动脉的WA／TA和mMTPA值和PCNA值显着升高，而间歇光照能够有效地减轻寒冷诱发的肺动脉重构和PCNA值。在肉鸡快速生长的早期采用间歇光照能够抑制寒冷所致的肺血管重构可能与抑制肺动脉平滑肌细胞增殖有关。试验Ⅵ添加呋喃苯胺酸对低温诱导的肉鸡肺动脉高压综合征的发病率及肺血管重构的影响。观察在低温环境下呋喃苯胺酸对肉鸡PHS的防治效果及其对肺血管重构的影响。240羽肉鸡于14 d时随机分为A、B和C三组分置于两个鸡舍。A组按常规饲养，B组和C组采取低温诱发PHS，并从30 d至44 d B组不添加药物而C组于日粮中添加0.015％的呋喃苯胺酸。记录每周PHS发病数、体重。定期测定RV／TV、PCV、WA／TA和mMTPA等各项值。结果饲料中添加呋喃苯胺酸降低了寒冷诱发的PHS发病率。B组RV／TV、WA／TA和mMTPA值显着升高，而C组使之降低，并在44 d差异显着；C组体重显着低于B组。降低肺动脉压，抑制以肺动脉壁肥厚为特征的血管重构可能是呋喃苯胺酸有效降低低温所致PHS发病率的部分机制。试验Ⅶ维生素C对常温下肉鸡肺动脉高压综合征发病率及肺血管重构的影响。观察在常温环境下维生素C对肉鸡PHS的防治效果及其对肺血管重构的影响。150羽肉鸡于21 d时随机分为C、T1和T2组，按常规饲养，C组不添加药物，T1组和T2组分别从21 d至37 d在饲料中添加维生素C 200 mg／kg和500 mg／kg。统计PHS的死亡数并定期称重。测定RV／TV、PCV、MDA、SOD、WA／TA和mMTPA等指标。结果与对照组相比，T1组PHS死亡率和RV／TV值显着降低，80-200微米肺动脉WA／TA和mMTPA值显着降低，PCV和MDA值极显着降低。T2组PHS死亡率与对照组相同，PCV值显着降低，50-80微米肺动脉的WA／TA和mMTPA值极显着高于对照组，MDA水平极显着高于对照组而SOD值显着降低。降低PCV值、清除体内过多的氧自由基及减轻肺血管重构可能是低剂量维生素C有效防治PHS的部分机制，而使氧自由基产生增多，导致肺血管重构可能是高剂量VC防治PHS失败的部分原因试验Ⅷ蛋白激酶C抑制剂Calphostin C对PDGF-BB诱导的肉鸡肺动脉血管平滑肌细胞增殖的影响．探讨蛋白激酶C抑制剂Calphostin C对血小板源生长因子（PDGF-BB）诱导的肉鸡肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖的影响。肉鸡肺动脉平滑肌细胞体外培养，用PDGF-BB刺激PASMC，采用细胞记数法和流式细胞仪测定Calphostin C对PASMC增殖的影响．结果Calphostin C显着地抑制PDGF-BB诱使的PASMC增殖，使细胞生长停滞于G0／G1期。蛋白激酶C抑制剂Calphostin C抑制了PASMC增殖，提示PDGF-BB刺激血管平滑肌细胞增殖与PKC信号传导通道有关，Calphostin C可能作为防治肺血管重构的一种药物。试验ⅨX／X0体系作用的肺动脉内皮细胞条件培养液对内鸡肺动脉平滑肌细胞的促增殖作用及褪黑激素对其的影响。观察黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶（xanthine-xanthineoxidase，X-XO）条件培养液对肉鸡肺血管平滑肌细胞是否有促增殖作用，及褪黑激素能否抑制其增殖。肉鸡肺动脉平滑肌细胞与X／XO内皮细胞条件培养液共培养刺激PASMC，采用流式细胞仪测定X／XO条件培养液和褪黑激素对PASMC增殖的影响，并检测培养液中的丙二醛（MDA）含量。与正常内皮细胞条件培养基相比，X／XO条件培养基促使PASMC发生增殖，并从G0／G1期进入S和G2／M期，其培养液中MDA含量显着高于对照组；当预先加入褪黑激素时，抑制了X／XO条件培养液的促平滑肌细胞增殖作用，G0／G1期细胞比例提高，而S期、G2／M期细胞减少。褪黑激素组细胞培养液中MDA含量显着低于X／XO模型组。清除培养液中的氧自由基可能是褪黑激素抑制X／XO条件培养液诱导肉鸡肺动脉平滑肌细胞增殖的机制之一。
唐以军[7]（2006）在《银杏叶制剂对哮喘T淋巴细胞及其与PKC关系影响的研究》文中认为前言在众多的发病机制中，有T淋巴细胞参与的慢性气道炎症是公认的哮喘重要的发病机制之一。T淋巴细胞（主要是Th2细胞）的活化、增殖和分泌大量的细胞因子（如：IL-4、IL-5等）在哮喘的发生、发展中起着重要作用。而在T淋巴细胞活化、增殖和分泌细胞因子促进炎性介质释放的过程中，细胞信号转导通路的作用十分重要，其中尤以蛋白激酶C（Protein Kinase C，PKC）信号转导通路的作用最引人注目。PKC是一个具有广泛生物学活性的酶，先前的研究表明PKC家族的重要成员PKCα活性的变化在T淋巴细胞活化、增殖和分泌细胞因子的过程中起着重要作用。糖皮质激素是目前治疗哮喘气道炎症的最强大最有效的药物，但临床应用显示其也有缺点和局限性，寻找新的有效治疗气道炎症的药物对提高哮喘的总体治疗效果具有一定的临床意义。银杏叶提取物的化学成分复杂，其主要活性成分银杏黄酮和萜内酯现已广泛应用于心脑血管系统疾病的治疗；在呼吸系统方面的治疗作用，特别是在哮喘的治疗方面早有记载。迄今为止，较多的临床研究证实银杏制剂对哮喘有确切的疗效，其对哮喘患者T淋巴细胞功能及其与PKCα关系的影响如何目前尚无报道。因此，将银杏叶制剂对哮喘T淋巴细胞功能及其与PKCα关系的影响进行系统地的研究，对银杏叶制剂治疗哮喘的临床效果和部分作用机理进行深入的探讨，明确其对哮喘的疗效及部分可能的作用机理，对于改善哮喘疗效和预防复发有一定的临床意义。第一部分银杏叶制剂对哮喘外周血T淋巴细胞PKC表达及Th1／Th2类细胞因子分泌影响的研究分题一银杏叶制剂对哮喘大鼠T淋巴细胞体外增殖和凋亡的影响目的检测不同银杏叶制剂在体外对T淋巴细胞增殖和凋亡的影响，探讨银杏叶制剂治疗哮喘的部分机理。方法将14只大鼠分成2组（健康对照组7只；哮喘组7只），分别采集外周血，并分离出T淋巴细胞，体外分组培养（分空白组、银杏叶制剂BN-52021组、银杏叶制剂EGb761组），各组分别以不同浓度的BN-52021和EGb761干预不同时间。之后，用MTT法分别测定各组细胞的增殖情况；用Annexin V／PI双染法流式细胞仪测定BN-52021不同浓度组的细胞凋亡情况。结果与空白组比较，EGb761在低浓度时促进T淋巴细胞增殖，而高浓度时则起抑制作用（均P＜0.05）；BN-52021对体外培养的哮喘和健康大鼠T淋巴细胞的增殖均有抑制作用，其作用强度（在一定的范围内）随剂量的增加和时间的延长而加强（组间比较均P＜0.05）；但对哮喘大鼠的抑制作用要明显强于健康大鼠（P＜0.05）；T淋巴细胞的凋亡率随BN-52021浓度的增加而增加（P＜0.01）。结论银杏叶制剂因其成分和干预浓度的不同而对体外培养的大鼠T淋巴细胞增殖活性的影响不同，对哮喘与健康大鼠T淋巴细胞的作用也有差异，银杏内酯B可能是抑制T淋巴细胞增殖的主要活性成分，其不仅可抑制T淋巴细胞的体外增殖，而且还可增加T淋巴细胞的凋亡率。分题二哮喘大鼠外周血T淋巴细胞Th1／Th2细胞因子和PKCα的表达及银杏叶制剂对它们的影响目的探讨银杏叶制剂对在哮喘大鼠免疫学发病机制中起关键作用的T淋巴细胞部分生物学功能的影响情况。方法将14只SD大鼠随机分成哮喘和正常两组，每组7只。从每只大鼠外周血分离出T淋巴细胞，分组培养72小时后，分别用逆转录—聚合酶链式反应（Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）检测各组IL-2、IL-4、IL-5 mRNA的表达量和Western Blot检测各组细胞膜与细胞浆PKCα的表达比率。结果IL-2、4、5 mRNA表达量在哮喘组均明显高于正常组，各因子两组间比较差异有显着性（P＜0.01）；哮喘组T淋巴细胞给予BN-52021干预后IL-2、4、5mRNA的表达量明显下降；正常组IL-2／IL-4mRNA的比值较哮喘组高，两组比较有显着差异（P＜0.01），其中哮喘组给予BN-52021干预后比值有所增大，与未干预组比较有明显变化（P＜0.01）。哮喘PMA+BN-52021干预组IL-2、4、5mRNA表达量，明显低于哮喘PMA干预组（P＜0.05），但高于PMA+Ro31-8220组（P＜0.05），而PMA+Ro31-8220组与PMA+Ro31-8220+BN-52021干预组比较无明显差异（P＞0.05）。哮喘空白组PKCα在T淋巴细胞胞膜与胞浆的表达量比率显着高于正常对照组（P＜0.01），BN-52021干预后哮喘组比率较未干预组明显下降（P＜0.05），PMA+BN-52021干预组PKCα比率为较PMA干预组1.28±0.28低（P＜0.05）；哮喘各组T淋巴细胞胞膜与胞浆PKCα表达量的比率与IL-4mRNA表达量的相关性分析显示呈明显正相关（n=42，r=0.845，P＜0.01）。结论银杏叶制剂对体外培养的哮喘大鼠T淋巴细胞因子IL-2、4、5的分泌均具有抑制作用，而对IL-2分泌的抑制作用相对较弱；银杏叶制剂对哮喘大鼠T淋巴细胞胞膜与胞浆PKCα的表达量比率具有明显的下调作用；其对T淋巴细胞因子及Th1／Th2细胞因子平衡的影响，可能是通过影响PKC信号转导途径起作用。分题三PKCα对哮喘患者外周血T淋巴细胞IL-2、IL-4、IL-5mRNA表达的调节以及银杏叶提取物对其的影响目的了解银杏叶制剂对哮喘患者免疫学发病机制中起关键作用的T淋巴细胞部分生物学功能的影响情况，探讨其治疗哮喘的可能机制。方法从12位哮喘患者和10位健康对照者静脉采取外周血10ml，分离出T淋巴细胞并进行分组培养（A组：空白组，B组：PMA干预组，C组：BN-52021干预组，D组：PMA+BN-52021干预组，E组：PMA+PKC抑制剂（Ro31-8220）干预组，F组：PMA+Ro31-8220+BN-52021干预组）。体外培养72小时后分别用Western Blot检测各组细胞膜与细胞浆PKCα表达比率和RT-PCR检测各组细胞IL-2、4、5mRNA的表达量。结果哮喘组IL-2、4、5mRNA表达量明显高于正常组，各因子两组间比较差异有显着性（P＜0.01）；哮喘组T淋巴细胞给予BN-52021干预后IL-2、4、5mRNA的表达量明显下降（均P＜0.05）；正常组IL-2／IL-4mRNA的比值高于哮喘组，两组比较有显着差异（P＜0.01），给予BN-52021干预后哮喘组比值有所增大，与干预前比较有明显变化（P＜0.01）。哮喘PMA+BN-52021组IL-2、4、5mRNA表达量明显低于PMA干预组（P＜0.05），高于PMA+Ro31-8220组（P＜0.05），而PMA+Ro31-8220组与PMA+Ro31-8220+BN-52021干预组比较无明显差异（P＞0.05）。哮喘空白组PKCα在T淋巴细胞胞膜与胞浆表达量的比率显着高于正常对照组（P＜0.01），BN-52021干预后哮喘组比率较干预前明显下降（P＜0.05），PMA+BN-52021干预组PKCα比率较PMA干预组低（P＜0.05）；哮喘组T淋巴细胞胞膜与胞浆PKCα表达量的比率与IL-4、5mRNA表达量的相关性分析呈明显正相关（分别r=0.885；r=0.938，均n=132，P＜0.01）。结论银杏叶制剂对体外培养的哮喘患者T淋巴细胞因子IL-2、4、5的分泌均具有抑制作用，而对IL-2分泌的抑制作用相对较弱；银杏叶制剂对哮喘患者T淋巴细胞胞膜与胞浆PKCα表达比率具有明显的下调作用；其可能通过影响PKC信号转导途径而进一步影响IL-4、5等Th2细胞因子的分泌及Th1／Th2细胞因子的平衡。第二部分银杏叶制剂对PKC在哮喘气道炎性细胞中的表达及其对气道中部分Th2类细胞因子浓度影响的研究分题一银杏叶制剂对哮喘大鼠气道炎性细胞蛋白激酶Cα表达及白细胞介素-4分泌的影响目的探讨银杏叶提取物（Extract of Ginkgo biloba，EGb）对哮喘大鼠气道炎症的治疗效果及可能机制。方法48只SD大鼠按数字随机法均分成8组：正常对照组、哮喘组（此组再分为：未处理组、激素1周组、激素2周组、激素4周组、EGb1周组、EGb2周组、EGb4周组）。采用Wright’s染色法分类计数肺泡灌洗液中各类炎性细胞的相对数，免疫组化（SP法）测定PKCα在各组大鼠肺泡灌洗液炎性细胞中的表达情况，ELISA法测定肺泡灌洗液上清中IL-4的含量。结果哮喘未处理组大鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞相对计数百分比、PKCα在淋巴细胞和总的细胞中的阳性表达率以及上清液中IL-4含量均显着高于正常对照组（P＜0.05）。激素处理不同时间组与未处理组间比较前述各指标明显下降（均P＜0.05）。EGb处理1、2周组相应指标明显高于激素处理组（P＜0.05）；EGb处理4周组与激素处理组比较无明显差异。EGb处理1周组与哮喘未处理组比较相应检测指标无明显差异（P＜0.05），EGb处理2周组相关检测指标明显低于EGb处理1周组（P＜0.05），但明显高于EGb处理4周组（P＜0.05）。EGb处理组炎性细胞PKCα阳性表达率与上清液中IL-4、嗜酸性粒细胞及淋巴细胞的相对计数百分比明显相关（n=18，r值分别为0.641、0.699、0.625，均P＜0.01）。结论EGb可减轻气道EOS和淋巴细胞等炎性细胞的浸润以及气道炎性细胞PKCα的阳性表达率和IL-4的分泌量，其作用弱于糖皮质激素，但随着药物治疗时间的延长其药理作用逐渐明显。其治疗哮喘的作用可能与其减少炎性细胞PKCα的表达进而降低EOS和淋巴细胞在气道的浸润以及IL-4的浓度有关。分题二吸入激素对哮喘患者诱导痰炎性细胞中PKCα表达及IL-5浓度的影响目的了解哮喘患者气道炎性细胞中PKCα的表达及TL-5的分泌情况，探讨它们与气道炎症的关系以及吸入激素对它们的影响。方法29例哮喘患者分2组：激素2周组（14例）、激素4周组（15例），治疗并随访，在治疗前后行诱导痰和肺功能检查，另选14名健康者为对照组。采用免疫组化（SP法）测定PKCα在诱导痰炎性细胞中的表达，ELISA法测定诱导痰上清中IL-5的含量。结果治疗前哮喘患者诱导痰中嗜酸性粒细胞和淋巴细胞相对计数、炎性细胞中PKCα阳性表达率和IL-5含量均高于健康组（P＜0.05），治疗后同组比较均明显下降（P＜0.01），FEV1占预计值的百分比的变化与它们的变化呈明显负相关（P＜0.05）；嗜酸性粒细胞和淋巴细胞的相对百分比与IL-5和炎性细胞PKCα阳性表达率显着相关（P＜0.01）。结论吸入激素可明显降低气道IL-5的含量，其机制可能是通过抑制PKCα的表达来发挥作用。分题三银杏叶提取物对哮喘患者诱导痰炎性细胞中PKCα表达及IL-5浓度的影响目的探讨银杏叶提取物对哮喘患者的疗效及可能机制。方法75例哮喘患者随机分4组：激素2周组20例、激素4周组20例、激素+银杏叶制剂2周组18例、激素+银杏叶制剂4周组17例，治疗并随访，在治疗前后行诱导痰及肺功能检查，另选15名健康者为对照。采用瑞氏染色法对诱导痰中细胞进行分类计数，SP法测定PKCα在诱导痰炎性细胞中的表达，ELISA法测定诱导痰上清中IL-5的含量。结果治疗前哮喘患者诱导痰中EOS和淋巴细胞相对计数百分比、炎性细胞PKCα总阳性表达率和IL-5含量均显着高于健康组，FEV1占预计值的百分比显着低于健康对照组（均P＜0.05）。治疗后除FEV1占预计值的百分比较治疗前增加外，哮喘组其它相应指标较治疗前明显下降（P＜0.05），但仍高于健康对照组（P＜0.05）。与激素治疗2周组比较，银杏叶制剂+激素治疗2周组EOS、淋巴细胞、诱导痰上清中IL-5浓度及各类炎性细胞PKCα阳性表达率均无明显降低（P＞0.05）；但银杏叶制剂+激素治疗4周组与激素治疗2、4周组比较相应指标有明显降低（P＜0.05）。IL-5与诱导痰中炎性细胞PKCα总阳性表达率和EOS的相对百分比明显正相关（分别r=0.83，r=0.76，均n=150，P＜0.01）；FEV1占预计值的百分比与诱导痰炎性细胞PKCα总阳性表达率及IL-5的含量呈明显负相关（分别r=-0.77，r=-0.64，均n=150，P＜0.01）。结论银杏叶制剂可明显降低气道EOS、淋巴细胞等炎性细胞在气道的浸润，对哮喘气道炎症具有明显的改善作用；其部分机制可能通过影响气道炎性细胞PKCα的活性进而降低气道IL-5等细胞因子的浓度而发挥作用；其药理作用与糖皮质激素可能具有一定的互补性，但作用效果相对缓慢。
刘旻[8]（2005）在《中药干预缺氧性肺血管重建的实验研究和作用机制探讨》文中研究指明
谭勋[9]（2004）在《肉鸡肺动脉高压综合征发病机理及防治的研究 ——肺动脉高压肉鸡肺动脉PKCα、NOS和细胞凋亡的变化》文中认为肉鸡肺动脉高压综合征（pulmonary hypertension syndrome，PHS），又称肉鸡腹水综合征（ascites syndrome，AS），是发生于快速生长的商品代肉鸡的一种营养代谢性疾病。全世界每年约有4％的肉鸡死于PHS，造成高达10亿美元的经济损失：我国PHS发病率平均为4.5％，每年造成的经济损失约为4.68亿美元。在多数情况下，快速生长和环境低温是引起商品肉鸡发生PHS的主要原因，这两种因素均能造成机体代谢需氧增加，并促使心输出量增多。当PHS易感鸡相对缺乏弹性的肺血管不能容纳快速增多的心输出量，或肺血管病理性收缩造成血液通过肺血管的阻力升高时，则导致肺动脉压升高。持续的肺动脉高压引起机体发生一系列病理生理改变，包括全身性组织低氧、肺血管重构、右心衰竭、肝门脉高压和腹水，最终形成PHS，但其发生机制尚不完全明了。本研究从肺动脉高压肉鸡肺动脉蛋白激酶Cα（PKCα）、一氧化氮合酶（NOS）活性及细胞凋亡等变化入手，进一步研究PHS的发病机制，并寻求不同的防治手段和方法。 试验Ⅰ 蛋白激酶Ca（PKCα）与肺血管重构。采用环境低温复制肉鸡PHS模型，观察肺动脉高压肉鸡肺动脉蛋白激酶Cα（PKCα）的表达及其与肺血管重构的关系。160羽艾维茵-2000商品代肉鸡，按常规方法育雏，于14d时随机分为常温对照组（NT组）和低温组（LT组），每组各80羽。自14d起，LT组舍内温度从28℃以每天1～2℃的速度下降，至21d降至14～12℃，并维持到试验结束。NT组仍继续按常规饲养（21d起舍温控制在20℃）。记录肺动脉高压综合征（PHS）发病率，并分别于24、32、39和45d从各组随机抽样，测定右心室／全心室（RV／TV）、红细胞压积（PCV）和血红蛋白（Hb）；采用计算机病理图像分析手段，检测肺动脉管壁面积／管总面积（WA／TA）、平均中膜厚度（mMTPA）；采用免疫组化方法结合微机图像分析技术，检测肺小动脉光密度值（OD），以OD值代表PKCα的表达。结果表明：LT组肉鸡PHS发病率较NT组显着升高（P＜0.05），RV／TV值在45d时升高（P＜0.05），PCV和Hb值在32d后升高（P＜0.05），mMTPA值和WA／TA值显着升高（P＜0.05），PKCα表达增强，且PKCα表达与mMTPA值和WA／TA之间呈显着正相关。博士学位论文:肺动脉高压肉鸡肺动脉PKCa、NOS和细胞凋亡变化的研究 试验nL一精氨酸（L一Arg）对肺动脉一氧化氮合酶（NOS）活性的影响.240羽艾维菌一2000商品代肉鸡，按常规方法育雏，于14d时随机分为常温对照组（NT组），低温组（LT组）和低温加L一Arg组（LA组），每组各80羽.自14d起，LT和LA组舍内温度从28℃以每天l一2℃的速度下降，至Zld降至14一12℃，并维持到试验结束.NT组仍继续按常规饲养（Zld起舍温控制在20℃）。此外，LA组自14d起在饲料中按109·kg一，剂量添加L一Arg，直至试验结束.记录肺动脉高压综合征（PHS）发病率，并分别于24、32、39和45d从各组随机抽样，测定右心室/全心室（RV/TV）和血浆一氧化氮（NO）水平.肺组织切片经卜NADPH一d组织化学染色后，采用病理图像分析软件检测直径在100一200拼m的肺小动脉光密度（oD）值，以OD值代表肺动脉NOS活性.结果显示:LT组肉鸡PHS发病率较NT组显着升高（P<0.05），LA组与NT组相比无显着差异（尸>0.05），但显着低于LT组（P<0.05）;LT组肉鸡RV/TV在45d时较NT组显着升高（P<0.05），而LA组肉鸡RV汀v值与NT组和LT组相比均无显着差异（尸>0.05）;LT组肉鸡血浆NO浓度总体上与NT组差异不显着（尸>0.05），仅在39d时降低（P<0.05），而LA组血装NO浓度自32d时起较NT和LT组显着升高（P<0.05）;LT组肉鸡肺动脉OD值显着低于NT组（P<0.05），而LA组肺动脉OD值在32和39d时较LT组显着升高（P<0.05），并自32d时起达到NT组水平（P>0 .05）0 试验mL一精氛酸（L一Arg）对肺血管重构的影响.240羽艾维菌一2000商品代肉鸡，按常规方法育雏，于14d时随机分为常温对照组（NT组），低温组（LT组）和低温加L一Arg组（LA），每组各80羽。自14d起，LT和LA组舍内温度从28℃以每天1一2℃的速度下降，至Zld降至14一12℃，并维持到试验结束.NT组仍继续按常规饲养（Zld起舍温控制在20℃）.此外，LA组自14d起在饲料中按109·kg一，剂量添加L一Arg，直至试验结束.记录肺动脉高压综合征（PHS）发病率，并分别于24、32、39和45d从各组随机抽样，测定右心室/全心室（RV厅V）和血浆一氧化氮（NO）水平。采用计算机病理图像分析软件测定肺动脉管壁面积/管总面积认叭/TA和平均中膜厚度（mMT队），并用原位缺口末端标记法（T uNEL法）对肺动脉凋亡平滑肌细胞进行染色和计数，计算凋亡细胞百分率;采用免疫组化方法和病理图像分析软件，检测肺小动脉光密度值（OD），以oD值代表蛋白激酶ca（PKca）的表达。结果:LT组肉鸡PHS发病率升高（P<0.05），其Rv/Tv值在45d时升高（P<0.05），而LA组PHS发病率和RV汀V值与NT组相比均无显着差异（尸>0.05）;LT组肉鸡肺血管mMTPA值和场叭/TA值较NT组升高（P<0.05），而LA组mMT队与NT组相比差异不显着（P>O刃5），其场叭/TA值仅在45d时升高（P<0.05）; LA组mMTPA值和场叭八人值与摘要LT组相比呈下降趋势，并在32d时显着降低（P<0.05）;LT组血浆NO浓度总体上与NT组差异不显着（尸>0.05），仅在39d时降低（P<0.05）; LA组血装NO浓度?
张焕萍,徐永健,张珍祥,倪望,陈仕新[10]（2004）在《核因子-κB抑制剂在蛋白激酶C对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉环反应性影响中的作用》文中提出目的 :探讨核因子 -κB抑制剂在蛋白激酶C对低氧性肺动脉高压大鼠离体肺动脉环反应性影响中的作用。方法 :复制低氧性肺动脉高压大鼠模型 ,测定肺动脉平均压 （mPAP）、右心室重 /（左心室 +室间隔 ）重 [RV/（LV +S） ]。取低氧模型组和常氧组大鼠的去内皮肺动脉环 ,观察PKC激活剂PMA 0 5 μmol/L对肺动脉环的时间 -效应曲线以及NF -κB抑制剂PDTC 0 - 10 0 0 μmol/L时对PMA诱导肺动脉环反应性改变的浓度 -效应曲线。以血管环对 10 μmol/L盐酸苯肾上腺素的最大反应值为P0 ,对PMA和PDTC的反应值以占P0 的百分值表示 （%P0 ） ,记录达最大反应值一半时对应的时间t1/ 2 （min）、峰值持续时间T（min）。结果 :低氧组的mPAP及RV/（LV +S）均高于常氧组 （P <0 0 5 ）。PMA 0 5 μmol/L作用于血管环 :低氧组各时点的张力 %P0 均高于常氧组 （P <0 0 5 ） ;低氧组t1/ 2 小于常氧组 （P <0 0 5 ） ;低氧组T大于常氧组 （P <0 0 5 ）。PDTC 0 - 10 0 μmol/L血管环相对张力低氧组均高于常氧组 （P<0 0 5 ） ;大于 5 0 0 μmol/L两组血管张力均下降 （P <0 0 5 ）。 结论 :低氧可导致去内皮肺动脉环对PMA的反应性增强 ;PDTC呈剂量依赖性地降低去内皮肺动脉环对PMA的反应性。提示肺动脉平滑肌细胞内PKC -NF -κB生物信号转导途径?
二、银杏叶制剂对低氧肺动脉平滑肌蛋白激酶Cα表达的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、银杏叶制剂对低氧肺动脉平滑肌蛋白激酶Cα表达的影响（论文提纲范文）
（2）低氧诱导的DNA甲基转移酶3A的上调在肺动脉高压中的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 引言 |
| 1.1 肺动脉高压中低氧与低氧诱导因子的研究进展 |
| 1.1.1 低氧诱导因子与肺动脉高压 |
| 1.1.2 低氧性肺血管收缩与血管平滑肌细胞内钙离子浓度 |
| 1.1.3 低氧或肺部疾病相关的肺动脉高压 |
| 1.1.4 低氧与内皮间充质转换 |
| 1.2 DNA甲基化相关研究进展 |
| 1.2.1 DNA甲基化简介 |
| 1.2.2 DNMT3A的促增殖作用 |
| 1.2.3 DNA甲基化与肺动脉高压 |
| 第二章 HIF2α介导的基因集对肺动脉高压患者早期诊断研究 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.2 试验结果 |
| 2.2.1 Hif2a-KD细胞中下调的基因集 |
| 2.2.2 HIF2α介导的基因集在对照组和PAH患者肺组织之间的差异 |
| 2.2.3 PBMCs表达谱中HIF2α介导的基因集对肺动脉高压患者的鉴别能力 |
| 2.2.4 HIF2α介导的分子信号事件参与了Phd2敲除引发的PH的发展 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 低氧对DNA甲基转移酶DNMT3A的调控研究 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 试验结果 |
| 3.2.1 对照组和 PAH患者之间hPAECs和hPASMCs的DNA甲基化差异 |
| 3.2.2 DNMTs基因在对照和PAH hPAECs之间的mRNA表达差异 |
| 3.2.3 Hif2a敲除在小鼠肺内皮细胞中引起Dnmts基因差异表达 |
| 3.2.4 SuHx-PH大鼠肺组织中DNMT3A表达上调 |
| 3.2.5 HPH大鼠肺内皮细胞中DNMT3A表达上调 |
| 3.2.6 在hPAEC以及rPAEC中低氧导致DNMT3A表达上调 |
| 3.2.7 HIF1α/HIF2α通过启动子HRE序列促进DNMT3A的表达 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 在PAH进展中DNMT3A对PAECs的保护作用研究 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.2 试验结果 |
| 4.2.1 Dnmt3a干扰削弱rPAEC在低氧中的增殖 |
| 4.2.2 Dnmt3a干扰诱导rPAECs早期凋亡并引起G1期阻滞 |
| 4.2.3 Dnmt3a干扰促进rPAEC自噬 |
| 4.2.4 Dnmt3a干扰缓解由TGFβ诱导的Endo-MT |
| 4.2.5 Dnmt3a干扰通过抑制p-eNOS~(T495)磷酸化增强NO生成 |
| 4.2.6 Dnmt3a干扰降低rPAECs ROS的产生并加强NRF2/NQO1通路 |
| 4.2.7 Nrf2干扰削弱HIF2α在低氧条件下的激活能力 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）基于多组学在慢性高原病机制的探索及厄贝沙坦的干预研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 模拟高原慢性低氧大鼠模型的建立及厄贝沙坦对CMS大鼠心肌的保护作用 |
| 实验一 慢性高原病大鼠模型的建立 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验二 厄贝沙坦对CMS大鼠心肌损伤的影响研究 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 实验三 厄贝沙坦对大鼠心肌低氧损伤的保护研究 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 基于血清蛋白组学的厄贝沙坦对CMS肺部保护作用 |
| 实验一 厄贝沙坦对CMS大鼠肺部损伤的影响研究 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验二 基于iTRAQ的血清蛋白组学研究厄贝沙坦对CMS的保护作用 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 基于1H-NMR的代谢组学研究厄贝沙坦对CMS的作用机制 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 数据预处理 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四部分 基于肠道微生物多样性研究厄贝沙坦对CMS的作用及机制 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 创新和展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 低氧性肺动脉高压中的炎症机制 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 新疆医科大学博士研究生学位论文导师评阅表 |
（4）新奇型蛋白激酶C在低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用和机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 磁性分离法分离培养小鼠肺动脉平滑肌细胞 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 实验试剂的配置 |
| 1.4 实验对象 |
| 1.5 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 普通光学显微镜观察 |
| 2.2 免疫荧光鉴定 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 低氧对肺动脉平滑肌细胞增殖和新奇型蛋白激酶C表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 实验对象 |
| 1.4 主要试剂的配置 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 低氧可以促进肺动脉平滑肌细胞增殖 |
| 2.2 低氧可以诱导肺动脉平滑肌细胞中PKCδ、PKCε表达的上调 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 低氧通过上调PKCδ和PKCε而促进肺动脉平滑肌细胞的增殖 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 实验对象 |
| 1.4 主要试剂的配置 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 低氧上调PKCδ和PKCε的表达导致肺动脉平滑肌细胞增殖 |
| 2.2 低氧通过上调PKCδ和PKCε而诱导AKT、ERK的磷酸化 |
| 2.3 低氧通过上调PKCδ和PKCε诱导AKT、ERK的磷酸化增加而诱导肺动脉平滑肌细胞增殖 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果 |
| 个人简历 |
（5）银杏叶提取物对机体及运动能力影响（论文提纲范文）
| 1 EGB对运动神经元和脑组织的影响 |
| 2 EGB对血管的影响 |
| 3 EGB对免疫系统的影响 |
| 4 EGB对运动中自由基的影响 |
| 5 EGB对运动系统的影响 |
（6）间歇光照、呋喃苯胺酸、维生素C对肉鸡PHS的预防及其机理研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号及缩略语 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 肉鸡PHS发病机制和防治的研究进展 |
| 1 肉鸡PHS发病机制的研究进展 |
| 1.1 心输出量增加 |
| 1.2 血液流过肺脏阻力增加 |
| 1.2.1 血液粘滞度增加 |
| 1.2.2 红细胞变形能力降低 |
| 1.2.3 肺血管容量不足 |
| 1.2.4 肺血管重构和肺血管收缩 |
| 1.2.4.1 肺血管重构 |
| 1.2.4.2 肺血管收缩 |
| 2 肉鸡PHS防治的研究进展 |
| 2.1 早期限饲防治肉鸡PHS的研究进展 |
| 2.2 肉鸡PHS抗病育种的研究进展 |
| 2.3 肉鸡PHS的药物防治 |
| 2.3.1 L-精氨酸(L-arginine,L-Arg) |
| 2.3.2 抗氧化剂 |
| 2.3.2.1 维生素E和维生素C |
| 2.3.2.2 补硒 |
| 2.3.3 碳酸氢钠(NaHCO3) |
| 2.3.4 脲酶抑制剂 |
| 2.3.5 利尿剂 |
| 2.3.6 β-肾上腺素受体激动剂(Beta-adrenergicagonists) |
| 2.3.7 中草药 |
| 2.3.8 内皮素-1受体拮抗剂 |
| 2.3.9 其它药物 |
| 2.4 综合管理 |
| 参考文献 |
| 第二章 控制光照和早期限饲防治肉鸡PHS的研究进展 |
| 1 控制光照防治肉鸡PHS的研究进展 |
| 1.1 控制光照对肉鸡PHS的发病率和生产性能的影响 |
| 1.2 控制光照与免疫的关系 |
| 1.3 控制光照防治肉鸡PHS机理的研究进展 |
| 1.4 光照制度与褪黑激素 |
| 1.4.1 褪黑激素分泌及其功能 |
| 1.4.1.1 褪黑激素的抗氧化和清除自由基的功能 |
| 1.4.1.2 褪黑激素的调节免疫功能 |
| 1.4.1.3 褪黑激素的抗应激作用 |
| 1.4.1.4 褪黑激素对血管的作用 |
| 1.4.2 褪黑激素受体分布及功能 |
| 1.4.3 褪黑激素与PKC传导通道 |
| 2 早期限饲防治肉鸡PHS的研究进展 |
| 2.1 早期限饲对肉鸡PHS防治及生产性能影响的研究进展 |
| 2.1.1 早期限饲对肉鸡PHS的发病率和其他代谢性疾病发病率的影响 |
| 2.1.2 早期限饲对肉鸡生产性能和胴体品质的影响 |
| 2.2 限饲的方法和手段 |
| 2.3 限饲调控生长速度的机理 |
| 2.3.1 激素调节的作用 |
| 2.3.2 消化器官发育增强 |
| 2.4 限饲与免疫的关系 |
| 2.5 限饲降低肉鸡PHS发病率的机理 |
| 参考文献 |
| 第三章 哺乳动物肺动脉高压肺血管重构的病理机制和治疗的研究进展 |
| 1 肺循环和肺血管构型的特点 |
| 2 血管重构的概念 |
| 3 肺血管重构的病理特征 |
| 3.1 肺血管平滑肌细胞的变化 |
| 3.1.1 肺血管中膜平滑肌肥大与增殖 |
| 3.1.2 评价肺血管平滑肌增殖的手段——增殖细胞核抗原 |
| 3.1.3 肺细小动脉肌型化 |
| 3.1.4 肺小动脉内膜下出现纵行肌 |
| 3.2 肺小动脉内皮细胞(EC)的变化 |
| 3.3 肺血管结缔组织的变化 |
| 3.4 血管丛病变 |
| 3.5 肺血管密度 |
| 3.6 肺血管重构的其它病理变化 |
| 4 评定血管重构的方法和手段 |
| 5 肺血管重构的病理生理机制 |
| 5.1 异常血流动力学因素在肺血管重构中的作用 |
| 5.2 生长因子在肺血管重构中的作用 |
| 5.2.1 VEGF |
| 5.2.2 bFGF |
| 5.2.3 PDGF |
| 5.2.4 IGF-1 |
| 5.2.5 TGF-β |
| 5.3 血管活性物质与肺血管重构 |
| 5.3.1 内皮素-1(endothelin-1,ET-1) |
| 5.3.2 血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AT-Ⅱ) |
| 5.3.3 5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT) |
| 5.3.4 一氧化氮(NO) |
| 5.4 活性氧自由基(ROS)与肺血管重构 |
| 5.4.1 血管平滑肌细胞生长 |
| 5.4.2 血管平滑肌细胞移行 |
| 5.4.3 基质的调节 |
| 5.5 炎性介质与肺血管重构 |
| 5.6 低氧对肺血管重构的影响 |
| 5.7 血管内皮细胞在肺血管重构中的作用 |
| 5.8 原癌基因表达与肺血管重构 |
| 5.8.1 c-myc |
| 5.8.2 c-fos |
| 5.8.3 c-jun |
| 5.8.4 sis |
| 5.9 细胞凋亡与血管重构 |
| 5.10 血管重构的信号转导机制 |
| 6 抑制肺血管重构的药物治疗 |
| 6.1 血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素受体拮抗剂 |
| 6.2 内皮素拮抗剂和内皮素转换酶抑制剂 |
| 6.3 L-精氨酸/NO |
| 6.4 磷酸二酯酶抑制剂 |
| 6.5 Ca2+通道拮抗剂 |
| 6.6 肝素 |
| 6.7 前列环素 |
| 6.8 PKC拮抗剂和抑制剂 |
| 7 结语 |
| 参考文献 |
| 第四章 血小板源生长因子与血管重构 |
| 1 血小板源生长因子的生物学特性 |
| 2 血小板源生长因子受体的生物学特性 |
| 3 影响血小板源生长因子分泌及其受体表达的因素 |
| 3.1 缺氧 |
| 3.1.1 缺氧对血管内皮细胞PDGF分泌及其受体表达的影响 |
| 3.1.2 缺氧对血管平滑肌细胞PDGF分泌及其受体表达的影响 |
| 3.2 自由基对血小板源生长因子分泌及其受体表达的影响 |
| 3.3 作用于血管壁的机械压力对血小板源生长因子分泌及其受体表达的影响 |
| 4 血小板源生长因子在血管重构中的作用 |
| 4.1 PDGF的促细胞增殖作用 |
| 4.2 PDGF促细胞增殖作用的调控 |
| 参考文献 |
| 第五章 蛋白激酶C与低氧性肺动脉高压 |
| 1 PKC的类型、结构特点及激活过程 |
| 1.1 PKC的类型 |
| 1.2 PKC的结构特点 |
| 1.3 PKC的激活 |
| 2 PKC与低氧性肺血管收缩 |
| 2.1 PKC与离子通道介导的肺血管收缩 |
| 2.2 PKC与血管活性介质介导的血管收缩 |
| 3 PKC与低氧性肺血管重构 |
| 3.1 PKC对肺动脉平滑肌细胞增殖的调控 |
| 3.1.1 PKC与不同表型的肺动脉平滑肌细胞增殖 |
| 3.1.2 PKC调控肺动脉平滑肌增殖的机制 |
| 3.1.2.1 PKC在低氧性肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用 |
| 3.1.2.2 PKC在氧自由基促进肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用 |
| 3.1.2.3 PKC在切变力/机械张力引起平滑肌细胞增殖中的作用 |
| 3.1.2.4 PKC对肺动脉平滑肌细胞增殖的直接调节作用 |
| 3.1.2.5 PKC介导某些生长因子刺激肺动脉平滑肌增殖 |
| 3.2 PKC与凋亡在平滑肌细胞增殖中的作用 |
| 3.3 PKC对肺动脉成纤维细胞增殖和胶原表达的调控 |
| 3.3.1 PKC与成纤维细胞增殖 |
| 3.3.2 PKC对胶原表达的调控 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 第六章 氧自由基代谢与肉鸡PHS |
| 1 氧自由基、抗氧化剂和脂质过氧化作用 |
| 1.1 氧自由基 |
| 1.2 脂质过氧化作用 |
| 1.3 抗氧化剂 |
| 1.3.1 酶系抗氧化剂 |
| 1.3.1.1 超氧化物歧化酶 |
| 1.3.1.2 过氧化氢酶 |
| 1.3.1.3 谷胱甘肽过氧化物酶 |
| 1.3.2 非酶系抗氧化剂 |
| 2 促使脂质过氧化反应和诱导机体氧自由基产生的因素 |
| 2.1 缺氧 |
| 2.2 炎性细胞激活 |
| 2.3 甲状腺机能亢进 |
| 2.4 血管来源的氧自由基 |
| 3 氧自由基对肺血管的损伤作用 |
| 3.1 氧自由基对血管内皮细胞的作用 |
| 3.1.1 诱发血管内皮细胞释放血管活性物质和生长因子 |
| 3.1.2 诱导内皮细胞凋亡 |
| 3.1.3 诱发内皮细胞黏附分子表达 |
| 3.1.4 促进血管生成 |
| 3.2 氧自由基对血管平滑肌细胞的作用 |
| 3.2.1 氧自由基在动脉平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用 |
| 3.2.2 氧自由基与血管收缩 |
| 3.2.3 氧自由基与平滑肌细胞的信号传导 |
| 3.3 氧自由基对细胞外基质的影响 |
| 4 氧自由基与肉鸡PHS |
| 参考文献 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第七章 间歇光照对肉鸡肺动脉高压综合征发病率及肺血管重构的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 测定指标 |
| 1.3 数据处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 间歇光照对肉鸡PHS发病率和心脏指数(RV/TV)的影响 |
| 2.2 间歇光照对血液红细胞压积(PCV)的影响 |
| 2.3 间歇光照对肉鸡体重和饲料利用效率的影响 |
| 2.4 间歇光照对肺血管管壁面积与血管总面积比(WA/TA)以及平均中膜厚度(mMTPA)的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 间歇光照对肉鸡PHS发病率的影响 |
| 3.2 间歇光照对肉鸡肺血管形态学的影响 |
| 3.3 间歇光照对肉鸡体重和饲料利用效率的影响 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第八章 间歇光照对肉鸡体内脂质过氧化作用和抗氧化酶活性的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 测定指标 |
| 1.3 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 PHS发病率、RV/TV和体重的结果 |
| 2.2 血浆丙二醛和SOD值 |
| 2.3 肺厚壁末稍血管百分率(%TWPV) |
| 2.4 肉鸡SOD、MDA、TWPV之间及与RV/TV的相关性 |
| 3 讨论 |
| 3.1 间歇光照对肉鸡PHS发病率和体重的影响 |
| 3.2 间歇光照对肉鸡体内脂质过氧化作用和抗氧化酶活性的影响 |
| 3.3 间歇光照与肺小动脉肌型化 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第九章 间歇光照对低温诱导的肉鸡肺细小动脉血管重构及其PKCα表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 测定指标 |
| 1.3 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 WA/TA、mMTPA、MDA、SOD和RV/TV的结果 |
| 2.2 PKCα表达的变化 |
| 2.3 PKCα表达与mMTPA和WA/TA之间的相关性分析 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第十章 间歇光照对低温诱导的肉鸡肺细小动脉血管重构及其PDGF-β受体表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 测定指标 |
| 1.3 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 MDA、SOD、PCV、WA/TA和mMTPA等结果 |
| 2.2 间歇光照对肉鸡肺动脉壁PDGF-β受体表达的影响 |
| 2.3 PDGF-β受体表达与mMTPA和WA/TA之间的相关性分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 缓解缺氧 |
| 3.2 降低氧自由基水平 |
| 参考文献 |
| 第十一章 间歇光照对低温诱导的肉鸡肺细小动脉血管重构及其PCNA表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 测定指标 |
| 1.3 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 MDA、SOD、PCV、WA/TA和mMTPA等结果 |
| 2.2 直径50-200μm肺小动脉PCNA表达的变化 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第十二章 添加呋喃苯胺酸对低温诱导的肉鸡肺动脉高压综合征的发病率及肺血管重构的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 测定指标 |
| 1.3 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 呋喃苯胺酸对肉鸡PHS发病率的影响 |
| 2.2 呋喃苯胺酸对肉鸡体重的影响 |
| 2.3 呋喃苯胺酸对肉鸡RV/TV值的影响 |
| 2.4 呋喃苯胺酸对肉鸡血液红细胞压积(PCV)的影响 |
| 2.5 呋喃苯胺酸对肉鸡肺血管管壁面积与血管总面积比(WA/TA)以及平均中膜厚度(mMTPA)的影响 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第十三章 维生素C对肉鸡肺动脉高压综合征发病率及肺血管重构的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 测定指标 |
| 1.3 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组肉鸡PHS死亡率的比较 |
| 2.2 各组肉鸡体重的比较 |
| 2.3 各组肉鸡RV/TV值的比较 |
| 2.4 各组肉鸡血液红细胞压积(PCV)的比较 |
| 2.5 各组肉鸡肺血管管壁面积与血管总面积比(WA/TA)以及平均中膜厚度(mMTPA)的比较 |
| 2.6 各组肉鸡血浆丙二醛和SOD值的比较 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第十四章 Calphostin C对PDGF-BB诱导的肉鸡肺动脉血管平滑肌细胞增殖的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要设备 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 肺动脉平滑肌细胞的培养及分组 |
| 1.4 测定指标 |
| 1.5 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 细胞计数 |
| 2.2 细胞周期 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第十五章 X/XO体系作用的肺动脉内皮细胞条件培养液对肉鸡肺动脉平滑肌细胞的促增殖作用及褪黑激素对其的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要设备 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 肉鸡正常内皮细胞培养液和X/XO条件培养液的采集及细胞形态观察 |
| 1.4 实验分组 |
| 1.5 检测指标 |
| 1.6 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 氧自由基对肉鸡肺血管内皮细胞损伤的形态学观察 |
| 2.2 各组细胞培养液中MDA含量 |
| 2.3 褪黑激素对X/XO条件培养液诱导的PASMC细胞周期时相分布的影响 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 本文创新点 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表和完成的学术论文 |
（7）银杏叶制剂对哮喘T淋巴细胞及其与PKC关系影响的研究（论文提纲范文）
| 一、论文摘要 |
| 1.中文摘要 |
| 2.英文摘要 |
| 二、论文正文 |
| (一) 第一部分:银杏叶制剂对哮喘外周血T淋巴细胞PKC表达及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响 |
| 分题1 银杏叶制剂对哮喘大鼠T淋巴细胞体外增殖和凋亡的影响 |
| 分题2 哮喘大鼠外周血T淋巴细胞Th1/Th2细胞因子分泌和PKCα的表达及银杏叶制剂对它们的影响 |
| 分题3 PKCα对哮喘患者外周血T淋巴细胞IL-2、IL-4、IL-5 mRNA的表达的调节以及银杏叶提取物对其的影响 |
| (二) 第二部分:银杏叶制剂对支气管哮喘气道T淋巴细胞PKC及Th2类细胞因子表达的影响 |
| 分题1 银杏叶制剂对哮喘鼠气道T淋巴细胞PKCα及Th2类细胞因子表达的影响 |
| 分题2 吸入激素对哮喘患者诱导痰炎性细胞中PKCα表达及IL-5浓度的影响 |
| 分题3 银杏叶提取物对哮喘患者诱导痰炎性细胞中PKCα表达及IL-5浓度的影响 |
| 三、综述 |
| 综述一 |
| 综述二 |
| 四、致谢 |
（9）肉鸡肺动脉高压综合征发病机理及防治的研究 ——肺动脉高压肉鸡肺动脉PKCα、NOS和细胞凋亡的变化（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号及缩略语说明 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 肉鸡低氧性肺动脉高压综合征发病机制和防治的研究进展 |
| 1 低氧性PHS的发病机制 |
| 2 低氧性PHS防治的研究 |
| 3 结语 |
| 参考文献 |
| 第二章 肺动脉高压血管重构的病理机制及治疗的研究进展 |
| 1 血管重构的概念 |
| 2 血管重构的特征 |
| 3 评定血管重构的方法和手段 |
| 4 血管重构的病理生理机制 |
| 5 抑制血管重构的药物 |
| 6 结语 |
| 参考文献 |
| 第三章 蛋白激酶C与低氧性肺动脉高压 |
| 1 PKC的类型、结构特点及激活过程 |
| 2 PKC与肺血管收缩 |
| 3 PKC与低氧性肺血管重构 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 第四章 NO与低氧性肺动脉高压的研究进展 |
| 1 NO的生物合成 |
| 2 NO与肺循环 |
| 3 NO与低氧性肺动脉高压 |
| 4 NO与肉鸡PHS |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第五章 低温诱导的肺动脉高压肉鸡肺动脉PKCα表达变化及其与肺血管重构的关系 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验动物分组及处理 |
| 1.2 测定项目与方法 |
| 1.3 数据的统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 肉鸡PHS发病率的比较 |
| 2.2 参试肉鸡RV／TV的变化 |
| 2.3 参试肉鸡PCV及Hb的变化 |
| 2.4 肺动脉病理组织学观察 |
| 2.5 肺动脉管壁面积／管总面积、平均中膜厚度的变化 |
| 2.6 肺动脉PKCα表达变化的比较 |
| 2.7 PKCα的表达与mMTPA和WA／TA之间的相关性分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 肉鸡PHS模型的建立 |
| 3.2 肺动脉高压肉鸡肺动脉PKCα信号通道活性的变化 |
| 3.3 PKCα与肺血管重构 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第六章 L-精氨酸对低温诱导的肺动脉高压肉鸡肺动脉NOS活性的影响 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验动物分组及处理 |
| 1.2 测定项目与方法 |
| 1.3 数据的统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 参试肉鸡PHS发病率及RV／TV的比较 |
| 2.2 血浆NO浓度测定结果 |
| 2.3 肺市动脉NOS活性变化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 肺动脉高压肉鸡肺动脉NOS活性的变化 |
| 3.2 L-Arg对肺动脉NOS活性的影响 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第七章 L-精氨酸对低温诱导的肺动脉高压肉鸡肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验动物分组及处理 |
| 1.2 测定项目与方法 |
| 1.3 数据的统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 参试肉鸡PHS发病率 |
| 2.2 参试肉鸡RV／TV的变化 |
| 2.3 肺动脉病理组织学观察 |
| 2.4 肺动脉病理图像分析 |
| 2.5 肺动脉平滑肌凋亡细胞百分率的比较 |
| 2.6 血浆NO浓度的变化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 L-Arg／NO与肺动脉高压肺血管重构的关系 |
| 3.2 L-Arg／NO抑制肺血管重构的细胞凋亡机制 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第八章 L-精氨酸对低温诱导的肺动脉高压肉鸡肺动脉PKCα表达的影响 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验动物分组及处理 |
| 1.2 测定项目与方法 |
| 1.3 数据的统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 PHS发病率、RV／TV、血浆NO含量、肺动脉形态学测定结果 |
| 2.2 肺动脉PKCα表达的变化 |
| 2.3 NO与PKCα表达的相关性分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 L-Arg与肺血管重构 |
| 3.2 L-Arg／NO对肺动脉PKCα表达的影响 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第九章 L-肉碱对低温诱导的肉鸡肺动脉高压综合征发病率的影响 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验动物分组及处理 |
| 1.2 测定项目与方法 |
| 1.3 数据的统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 参试肉鸡PHS发病率的比较 |
| 2.2 参试肉鸡体重的比较 |
| 2.3 参试肉鸡RV／TV、RV／BW、TV／BW的变化 |
| 2.4 血浆MDA和SOD的变化 |
| 2.5 液PCV的变化 |
| 2.6 肺动脉病理图像分析结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 L-肉碱对肉鸡PHS发病率的影响 |
| 3.2 L-肉碱降低PHS发病率的可能机制 |
| 3.3 L-肉碱用于防治PHS的评价 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第十章 低氯高碳酸氢盐饲料对低温诱导的肺动脉高压综合征发病率的影响 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验动物分组及处理 |
| 1.2 测定项目与方法 |
| 1.3 数据的统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 参试肉鸡PHS发病率的比较 |
| 2.2 参试肉鸡RV／TV的比较 |
| 2.3 参试肉鸡血液PCV的变化 |
| 2.4 肺动脉管壁面积／管总面积和平均中膜厚度的变化 |
| 2.5 各组肉鸡采食量、增重和饲料转化率的比较 |
| 3 讨论 |
| 3.1 低氯高碳酸氢盐饲料对肉鸡PHS发病率的影响 |
| 3.2 低氯高碳酸氢盐饲料与肺血管重构 |
| 3.3 不同剂量碳酸氢盐对肉鸡PHS的防治作用 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 本文创新点 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表和完成的学术论文目录 |
| 附：科技查新报告 |
（10）核因子-κB抑制剂在蛋白激酶C对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉环反应性影响中的作用（论文提纲范文）
| 材 料 和 方 法 |
| 1 低氧性肺动脉高压动物模型的复制 |
| 2 试剂和仪器 |
| 3 取材方法 |
| 4 PMA和PDTC对离体肺动脉环张力的作用 |
| 5 统计学处理 |
| 结 果 |
| 1 模型的复制 |
| 2 PMA对肺血管环反应性的影响 |
| 3 PDTC对PMA作用于肺动脉血管环反应性的影响 |
| 4 PDTC不同浓度与肺动脉血管环%P0之间的相关分析 |
| 讨 论 |
四、银杏叶制剂对低氧肺动脉平滑肌蛋白激酶Cα表达的影响（论文参考文献）
- [1]低氧对小鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及经典型蛋白激酶C表达的影响[J]. 施熠炜,蒋蕊,秦小江,曾超. 中华生物医学工程杂志, 2021(06)
- [2]低氧诱导的DNA甲基转移酶3A的上调在肺动脉高压中的作用研究[D]. 朱晋生. 西北农林科技大学, 2021
- [3]基于多组学在慢性高原病机制的探索及厄贝沙坦的干预研究[D]. 伊力亚尔·尼加提. 新疆医科大学, 2021
- [4]新奇型蛋白激酶C在低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用和机制研究[D]. 蒋蕊. 山西医科大学, 2018(10)
- [5]银杏叶提取物对机体及运动能力影响[J]. 王雪芹. 中国老年学杂志, 2015(11)
- [6]间歇光照、呋喃苯胺酸、维生素C对肉鸡PHS的预防及其机理研究[D]. 李锦春. 南京农业大学, 2006(01)
- [7]银杏叶制剂对哮喘T淋巴细胞及其与PKC关系影响的研究[D]. 唐以军. 华中科技大学, 2006(02)
- [8]中药干预缺氧性肺血管重建的实验研究和作用机制探讨[J]. 刘旻. 河北中医, 2005(06)
- [9]肉鸡肺动脉高压综合征发病机理及防治的研究 ——肺动脉高压肉鸡肺动脉PKCα、NOS和细胞凋亡的变化[D]. 谭勋. 南京农业大学, 2004(02)
- [10]核因子-κB抑制剂在蛋白激酶C对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉环反应性影响中的作用[J]. 张焕萍,徐永健,张珍祥,倪望,陈仕新. 中国病理生理杂志, 2004(02)