一、哮喘大鼠肺组织cAMP、cGMP的动态变化及补肾定喘汤对其的影响(论文文献综述)
李志军[1](2013)在《抗支口服液对哮喘大鼠模型作用机制的实验研究》文中提出目的:以建立支气管哮喘大鼠模型为基础,给予抗支口服液治疗,通过动物实验,从免疫组织化学、病理学和分子生物学等多方面探讨中药抗支口服液治疗哮喘大鼠模型作用机制,为临床应用抗支口服液治疗小儿支气管钳哮喘提供实验依据。方法:1、实验动物模型的建立及动物分组将70只wistar未成年大鼠,体重120~150g,适应性饲养3天。参照有关文献,将大鼠于实验第1天和第8天,腹腔内注射卵蛋白0.1mg和氢氧化铝凝胶1mg,从而使实验大鼠致敏。于实验的第15天起用3%卵蛋白对实验大鼠以5ml/分钟的雾化流速进行哮喘雾化激发,6分钟/次,两天一次,持续4周。以大鼠出现躁动、喷嚏、咳嗽、呼吸急促、流泪及站立不稳等表现为激发成功。将造模成功的50只大鼠随机分为模型组、地塞米松组、抗支口服液高、中、低剂量组。另取10只为空白组,空白对照组则用生理盐水代替卵蛋白对其进行腹腔注射及雾化激发。2、实验动物的灌胃给药及取材从第1次哮喘激发开始(于实验第15天)至处死前各治疗组每天于雾化前0.5h灌胃给药,高剂量组20g/kg/d.中剂量组10g/kg/d.低剂量组5g/kg/d,西药(地塞米松)组,给予0.5mg/kg/d地塞米松灌胃,持续给药4周,正常组用生理盐水灌胃。造模之前对实验动物进行体重测量,此后每4天对大鼠进行体重测量,于取材之前对大鼠进行最后一次体重测量。末次给药2小时后,对实验动物进行麻醉后取材。取各组大鼠肺组织、肺泡灌洗液(BALF)及其血清以备用。光镜下观察肺组织炎性病理改变,显微镜下观察肺泡灌洗液涂片细胞数及嗜酸性粒细胞和淋巴细胞含量,以酶联免疫吸附(ELISA)法测定肺组织中的LTB4、LTC4含量及血清内ECP的含量,以逆转录聚合酶联反应(reverse transcriptase, RT-PCR)测定哮喘大鼠肺组织IL-5mRNA表达,以放射免疫法测定血清中IgE含量。结果:1、肺组织病理学改变。光镜下见模型组大鼠肺组织有大量炎性细胞浸润,气道粘膜水肿伴有脱落的上皮细胞,上皮下纤维化,平滑肌增厚。中药高、中剂量组大鼠肺组织与模型组相比,以上改变明显减轻2、各指标改变实验结果显示抗支口服液能明显降低哮喘大鼠肺组织中炎症的主要调节因子IL-5mRNA的表达,从而减少气道内炎区的EOS的增殖、分化、聚集和活化,从而控制气道炎症;能降低哮喘大鼠血清免疫球蛋白E(IgE)的产生增加,减少肥大细胞的分化,并减慢嗜酸性粒细胞的生长、趋化和激活,从而减轻哮喘气道炎症;能降低哮喘大鼠血清中诱导气道炎症、介导气道上皮细胞损伤脱落的强碱性颗粒蛋白ECP含量;能降低肺组织中炎性介质LTB4、LTC4含量;降低哮喘大鼠肺泡灌洗液(BALF)涂片细胞数及嗜酸性粒细胞和淋巴细胞含量。结论:1、抗支口服液各剂量组能改善哮喘大鼠一般症状,减少哮喘大鼠肺组织炎性浸润,减少粘膜下水肿及分泌物的产生,从而减轻气道狭窄及气道高反应性,尤其是抗支口服液高、中剂量组。2、抗支口服液高、中剂量组均能降低哮喘大鼠肺组织内嗜酸性粒细胞、淋巴细胞含量,说明抗支口服液可通过降低肺组织内嗜酸性粒细胞、淋巴细胞含量,从而控制气道炎症。3、抗支口服液可明显降低哮喘大鼠肺组织IL-5mRNA的表达,减少炎性细胞浸润,从而减轻气道炎症,缓解哮喘气道痉挛状态。4、抗支口服液高、中剂量组明显降低了哮喘大鼠外周血内ECP含量从而抑制EOS的活化,保护呼吸道上皮,减轻AHR,抑制变态反应,最终达到抗炎的效果。5、抗支口服液可明显降低哮喘大鼠外周血内IgE含量,减轻哮喘的Ⅰ型变态反应的发生,从而达到控制哮喘发作的目的。6、抗支口服液高、中剂量组可明显降低哮喘大鼠肺组织内的LTB4、LTC4含量,从而减轻气道炎症及减缓支气管平滑肌收缩来缓解哮喘症状。
徐立然[2](2011)在《“补益肺肾、祛风化痰法”治疗支气管哮喘慢性持续期的临床研究和机理探讨 ——周仲瑛教授临床经验应用与评价方法研究》文中提出目的:中医药治疗支气管哮喘慢性持续期在“治未病”思想指导下,具有疗效好,作用持续,有效防治复发等特点,在整个支气管哮喘的防治工作中具有重要地位。我国着名国医大师周仲瑛教授以“风痰夙根论”及“发时治标、平时治本相对论”等学术观点形成独特的理论体系,确立“补益肺(脾)肾、祛风化痰”为哮喘慢性持续期治疗大法,并制定温养化痰方和清养化痰方为基础构成治疗方案。本文通过对周老治疗方案的临床观察和实验机理研究,以继承名医的理论体系和临床经验为目的,探讨其理法方药体系以及作用机理。方法:临床研究部分:本研究采用队列研究的方法,应用周老温养化痰方和清养化痰方与常规治疗方剂进行对照研究,观察与评价对支气管哮喘慢性持续期进行干预治疗的疗效和安全性。课题共纳入211例患者,其中脱落及剔除9例,进入统计分析病例202例。其中名中医组中寒哮患者73例,热哮患者48例,共121例。而常规组中寒哮患者44例,热哮患者37例,共81例。以上患者分别给予温养化痰方、清养化痰方、固本咳喘汤、麦味地黄汤,每日1剂,水煎200ml,1日2次,口服。小儿患者30kg以下者用量如上,但分两天服用。通过疗效性观察和安全性观察,比较名中医组和常规组的临床疗效。实验研究部分:将135只Wistar雄性大鼠随机分成正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组、清养化痰方低剂量组、清养化痰方中剂量组、清养化痰方高剂量组、温养化痰方低剂量组、温养化痰方中剂量组、温养化痰方高剂量组,每组15只,以卵蛋白致敏、反复长期激发的方式建立大鼠慢性哮喘模型,并予相应药物干预,观察记录大鼠—般状况,至实验结束,光镜下观察大鼠肺组织病理学变化,酶联免疫吸附法检测大鼠血清中TNF-α的含量,免疫组化法检测肺组织中NF-κB及MIF的表达,图像分析定量。数据用SPSS15.0统计软件进行统计学处理。结果:临床研究部分:1.在寒哮证中,名中医组临床控制率为20.0%,临床控制显效率为74.0%,总有效率为98.6%;而常规组分别为13%、43.2%、84.1%。两组比较,名中医组的临床控制显效率和总有效率明显高于常规组(P<0.01)。2.在热哮证中,名中医组临床控制率为22%,临床控制显效率为68.8%,总有效率为91.7%;而常规组分别为8.0%、35.1%、78.4%。两组比较,名中医组的临床控制显效率明显高于常规组(P<0.01)。3.名中医组与常规组相比,名中医组的临床控制显效率和总有效率明显高于常规组(P<0.01)。同时在名中医组和常规组进行远期疗效、生活质量、及ECP、IL-2、IL-4、IL-13、IFN-γ等指标改善方面的比较,名中医组具有明显优势。实验研究部分:成功复制大鼠慢性哮喘模型,各治疗组可明显改善大鼠的一般状态;哮喘模型组大鼠肺组织中大量炎症细胞浸润,气道上皮损伤,气道壁增厚,各治疗组病理学改变较哮喘模型组轻,清养化痰方低剂量组、温养化痰方中、高剂量组及地塞米松组改善明显。肺组织NF-κB表达方面,哮喘模型组大鼠肺组织NF-κB表达显着高于正常对照组(P<0.01),各治疗组的表达显着低于模型组(P<0.05),但显着高于正常对照组(P<0.01),温养化痰方高、中剂量组和清养化痰方低剂量组的表达水平与地塞米松组比无显着性差异(P>0.05),其余中药各组则显着高于地塞米松组(P<0.05);温养化痰方高剂量组低于清养化痰方高剂量组,两者有显着性差异(P<0.05)。肺组织MIF表达方面,哮喘模型组大鼠肺组织MIF表达显着高于正常对照组P<0.01),各治疗组的表达显着低于模型组P<0.05),但显着高于正常组(P<0.01);化痰方各治疗组与地塞米松组比无显着性差异(P>0.05),温养化痰方高剂量组表达水平最低,且与清养化痰方高剂量组比有显着性差异(P<0.05)。哮喘模型组及各治疗组血清TNF-α显着高于正常对照组(P<0.05),各治疗组与哮喘模型组有显着性差异(P<0.05),可明显降低血清TNF-α水平,中药组与地塞米松组比无显着性差异(P>0.05),清养化痰方高剂量及温养化痰方高剂量组作用最为明显。结论:温养化痰方、清养化痰方可以明显缓解支气管哮喘慢性持续期(肺肾气虚、寒痰证和肺肾阴虚、痰热内蕴证)患者的喘息、咯痰、咳嗽、胸闷、哮鸣音等临床症状体征,增加哮喘控制测试的评分,同时在远期疗效、生活质量等方面的改善,名中医组具明显优势。本药物无明显不良反应,具有良好的安全性。实验结果提示:1.化痰方能有效缓解慢性哮喘模型大鼠的临床表现和病理学改变,其作用机理在于:降低了NF-κB及MIF的表达及血清中TNF-a含量。2.寒热不同治法的清养和温养两方作用于同一哮喘模型在降低NF-κB、MIF的表达及血清TNF-α含量方面有着共同的作用,但量效方面存在着差异,这可能与本实验模型不具备“证”的特点有关。
徐立然,马秀霞[3](2011)在《中药对支气管哮喘实验病理形态学干预的研究》文中研究说明目的:探讨中药对支气管哮喘实验病理形态学干预的研究。方法:从中药对支气管哮喘动物模型嗜酸性细胞;辅助性T细胞(help T cell,Th)Th1、Th2亚群;内皮素(ET);白蛋白CD4+T细胞、CD8+T细胞含量及病理组织的影响展开进行论述。结果与结论:通过中药对支气管哮喘实验病理形态学干预的研究,了解中药治疗支气管哮喘的作用机制及对病理组织的不同影响以便更好的指导临床用药。
王娇,王宋平[4](2010)在《麻黄及其汤剂治疗哮喘的研究进展》文中指出中医药治疗哮喘历史悠久,麻黄作为治疗咳喘病之要药,具有发汗解表、宣肺平喘、利尿消肿之功效,在治疗哮喘方面日益受到重视。本文着重从动物实验及临床治疗研究方面综述近年来麻黄及其汤剂治疗哮喘的研究进展。
顾晓静[5](2009)在《“肺应秋”生理机制的实验研究 ——四时季节变化对肺脏细胞信号转导系统的影响》文中研究指明“四时五脏阴阳”理论体现出人是一个有机的统一整体,“肺应秋”是中医学“四时五脏阴阳”理论的重要组成部分,秋季肺如何应时地适应外界环境的变化,以维持自身稳定的生理状态,是“肺应秋”理论研究的重要内容。近年来,季节节律对人体生理病理变化影响的研究已引起学者的重视,研究季节气候变化对人体生理病理的影响对于临床治疗肺系疾病和指导人体养生具有重要的意义。1目的以“肺应秋”为切入点,通过研究肺脏细胞信号转导的季节性变化特点,从而揭示中医“肺应秋“的本质内涵,为“四时五脏阴阳”理论的研究提供科学依据和途径,也可指导养生并为治疗目前临床常见的季节性肺部疾患的研究提供理论和实验依据。2方法2.1理论研究本研究采用文献资料法和逻辑分析法,探讨“肺应秋”的中医理论内涵以及“肺应秋”调控机制与细胞信号转导理论的相关性,说明秋季脏腑的适应性调控具有一定的理论依据,进一步充实了“四时五脏阴阳”的理论内涵。2.2实验研究2.2.1实验动物:健康Wistar大鼠,雄性24只,体重150-170g,分别于2006年12月22日(冬至)、2007年3月21日(春分)、6月22日(夏至)和9月23日(秋分)前四十天由北京维通利华实验动物技术有限公司购入。随机分为生理组、模型组(松果腺摘除模型组)和伪手术组,每组各8只。饲养条件:自然光照,室温(冬春季室温为17℃±2℃,夏秋季室温为25℃±2℃)。自由摄取水及饲料,饲料为普通鼠全价颗粒饲料。模型组、伪手术组分别于春分、秋分、夏至、冬至(简称二分、二至)前一个月施行手术造模,与生理组动物在相同条件下饲养到二分、二至当日晚8:00以后处死取材。2.2.2检测方法:肺组织中G蛋白采用Western-blot法;肺组织中cAMP、cGMP采用ELISA法;肺组织IP3采用放射免疫法;肺组织中c-fosmRNA、c-junmRNA采用原位杂交法。2.2.3实验结果统计学分析方法:所有数据均用均数±标准差表示,运用SPSS11.5统计软件分析。各季节组内及四季节组间比较均采用单因素方差分析(One-Way Anova)检验,以P<0.05为差异有显着性。3结果3.1理论研究结果3.1.1在秋季,肺通过其肃降功能的增强,不但可以影响肺脏自身的生理功能,而且可以影响其他四脏的功能活动以适应外界环境的变化,这是“肺应秋”理论的生理内涵。3.1.2本研究通过对“肺应秋”调控机制和细胞信号转导机制进行分析发现,二者都强调外界环境对机体的影响,机体内存在整体调控机制,调控目的是为了实现“整体稳态”,认为理论上“肺应秋”调控机制与细胞信号转导存在相关性,并提出了从细胞信号转导角度来研究“肺应秋”调控机制的研究思路。3.2实验研究结果3.2.1季节变化对肺脏细胞信号转导物质的影响在正常生理状态下,季节变化对肺脏细胞信号转导物质可产生显着影响,表现在:(1)全年大鼠肺组织中Gq含量春季显着地低于夏季、秋季(P<0.05),非常显着地低于冬季(P<0.01);大鼠肺组织中Gs含量春季非常明显地低于夏季和冬季(P<0.01),夏季非常明显地高于春季和秋季(P<0.01),秋季非常明显地低于夏季(P<0.01)、明显地低于冬季(P<0.05)。(2)肺组织中第二信使cAMP含量夏季明显高于秋季(P<0.05);肺组织中cGMP的含量春季非常明显地低于秋季(P<0.01),明显低于冬季(P<0.05);肺组织中IP3的含量四季生理组之间无明显差异。(3)肺组织中第三信使c-fos mRNA、c-jun mRNA表达的平均光密度四季生理组之间无明显差异;c-fos mRNA表达的面积百分数春季非常明显地高于再秋冬季(P<0.01);c-jun mRNA表达的面积百分数春季非常明显地高于夏秋冬季(P<0.01),夏季明显高于冬季(P<0.05)。3.2.2松果腺对肺脏细胞信号转导物质的影响在摘除松果腺的情况下,肺脏细胞信号转导物质的节律会发生不同程度的变化,表现在:(1)春季大鼠肺组织中Gq含量生理组明显低于模型组(P<0.05),生理组与伪手术组之间没有差异,摘除松果腺后四季肺组织中Gq的含量无明显差异,伪手术组四季肺组织中Gq的含量冬季非常明显地高于春季和秋季(P<0.01);夏季肺组织中Gs的含量生理组明显高于模型组(P<0.05),生理组与伪手术组之间没有差异,摘除松果腺后四季肺组织中Gs的含量无明显差异,伪手术组四季肺组织中Gs的含量冬季非常明显地高于春季、夏季、秋季(P<0.01)。(2)肺组织中IP3的含量秋季模型组明显高于生理组和伪手术组(P<0.05)。(3)肺组织中c-fos mRNA的表达平均光密度冬季生理组明显低于模型组(P<0.05),生理组与伪手术组之间没有差别;肺组织中c-fos mRNA的表达面积百分数夏、秋季生理组明显低于模型组(P<0.05),生理组与伪手术组之间没有差别。肺组织中c-jun mRNA的表达平均光密度冬季生理组明显高于模型组(P<0.05),且生理组与伪手术组之间没有差别;秋季c-jun mRNA的表达面积百分数模型组非常明显地高于生理组、伪手术组(P<0.01)。这些都表明了松果腺在上述物质的季节变化中起了调节作用。4结论4.1在正常生理状态下,肺脏细胞信号转导呈现季节性变化节律。4.2四季肺脏细胞信号转导的节律性变化与松果腺的高位调节作用有关,这种调节具有复杂性和季节选择性。4.3“肺应秋”秋季肺脏中褪黑素影响肺脏局部免疫功能可能通过肺脏胞内Gs→(+)Ac→cAMP(?)→(+)PKA→(+)CREB→(+)c-fos细胞信号通路的抑制来实现。
张焱[6](2009)在《培土生金中药对脾虚哮喘大鼠肺、回肠组织神经肽水平的影响》文中提出目的:本实验通过研究脾虚哮喘及哮喘大鼠肺、回肠组织神经肽及受体表达水平的改变,探讨脾虚哮喘及哮喘动物机体内的神经内分泌免疫调节失衡状态;通过对脾虚哮喘及哮喘大鼠肺、回肠组织神经肽及受体表达水平改变的比较研究,探讨脾虚对哮喘的影响,为“脾虚为哮喘之关键病机”的论点提供新的依据,以进一步验证和深化哮喘的中医病机理论;通过研究培土生金中药对脾虚哮喘及哮喘大鼠肺、回肠组织神经肽及受体表达水平的影响,探讨培土生金法治疗哮喘的作用机制;通过对脾虚哮喘及哮喘大鼠肺、回肠组织神经肽及受体表达水平相关性的研究,探讨培土生金理论的现代科学内涵和肺脾二脏的密切关系。材料与方法:以中医理论为指导,复合利用中医脾虚动物模型和西医哮喘动物模型的造模方法,建立大鼠脾虚哮喘病证结合的模型。脾虚动物造模采用饮食不节加疲劳过度的方法。造模结束后,比较两模型组动物造模前后体重、肛温变化情况,以脾虚模型评估标准评估两模型组动物症状。以动物定量指标的变化有统计学意义、症状符合脾虚模型评估标准来判定脾虚动物模型建立成功。哮喘动物造模采用以卵蛋白为致敏原,氢氧化铝、百日咳灭活杆菌为免疫佐剂,腹腔注射致敏后以卵蛋白液雾化吸入激发建立动物哮喘模型。以大鼠出现呼吸加深加快,点头运动明显,腹肌强烈收缩,偶可闻及痰鸣音等类似人类哮喘的症状为造模成功。造模成功后,采用培土生金中药进行干预,共12天。干预结束后,采用血液白细胞及嗜酸粒细胞绝对计数方法测定大鼠末梢血及支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞(WBC)、嗜酸性粒细胞(EOS)计数;采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)测定大鼠血清及BALF中自介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)的浓度;采用免疫组化方法半定量分析肺及回肠组织中P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)含量;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法半定量分析肺组织中SP及其NK1受体mRNA的表达;并应用光镜对肺、回肠组织形态学进行观测。结果:1.同对照(C)组比较,疾病加证候(A)组和疾病(B)组大鼠均表现为血中及BALF中白细胞计数、嗜酸性粒细胞计数显着升高(P<0.01);疾病加证候(A)组和疾病(B)组大鼠均表现为血中及BALF中IL-4的浓度显着升高(P<0.01),IFN-γ的浓度显着降低(P<0.01),IFN-γ/IL-4比值显着降低(P<0.01);疾病加证候(A)组和疾病(B)组大鼠均表现为肺组织中SP及其NK1受体mRNA表达显着增强(P<0.01);疾病加证候(A)组和疾病(B)组大鼠均表现为肺、回肠组织中SP含量显着增加(P<0.01),VIP含量显着减少(P<0.01)。2.与疾病(B)组比较,疾病加证候(A)组外周血白细胞计数、BALF中白细胞计数、嗜酸性粒细胞计数、血清IL-4浓度、BALF中IL-4浓度、肺组织SP及其NK1受体mRNA表达、肺组织及回肠组织SP含量均显着高于疾病(B)组(P<0.05);BALF中IFN-γ浓度及IFN-γ/IL-4比值、肺组织及回肠组织VIP含量均显着低于疾病(B)组(P<0.01或P<0.05)。3.与相应的疾病组比较,两中药(A1,B1)组血中及BALF中嗜酸性粒细胞计数显着降低(P<0.01或P<0.05)。其中,疾病加证候中药(A1)组BALF中嗜酸性粒细胞计数与对照组比较,已无显着差异(P>0.05);疾病加证候中药(A1)组血中及BALF中白细胞计数显着降低(P<0.01),疾病中药(B1)组BALF中白细胞计数显着降低(P<0.01)。与相应的疾病组比较,两中药组(A1,B1)血中及BALF中IL-4的浓度显着降低(P<0.01),IFN-γ的浓度显着升高(P<0.01或P<0.05),IFN-γ/IL-4比值显着升高(P<0.01或P<0.05)。其中,疾病加证候中药(A1)组血中IFN-γ浓度、BALF中IL-4的浓度及BALF中IFN-γ/IL-4比值与对照(C)组比较,已无显着差异(P>0.05)。与相应的疾病组比较,两中药(A1,B1)组肺、回肠组织中SP含量显着减少(P<0.01),VIP含量显着增加(P<0.01),其中,疾病加证候中药(A1)组肺及回肠组织SP含量、疾病中药(B1)组回肠组织SP含量与对照(C)组比较,已无显着差异(P>0.05)。与相应的疾病组比较,两中药(A1,B1)组肺组织中SP及其NK1受体mRNA表达显着减少(P<0.01或P<0.05)。其中,疾病加证候中药(A1)组肺组织SPmRNA表达水平、疾病中药(B1)组肺组织NK1受体mRNA表达水平与对照(C)组比较,已无显着差异(P>0.05)。4.各组大鼠血中IFN-γ/IL-4比值与肺组织SP含量间存在着明显的负相关(r=-0.698,P<0.01);各组大鼠血中IFN-γ/IL-4比值与肺组织VIP含量间存在着明显的正相关(r=0.741,P<0.01)。各组大鼠血中IFN-γ/IL-4比值与回肠组织SP含量间存在着明显的负相关(r=-0.627,P<0.01);各组大鼠血中IFN-γ/IL-4比值与回肠组织VIP含量间存在着明显的正相关(r=0.766,P<0.01)。各组大鼠BALF中IFN-γ/IL-4比值与肺组织SP含量间存在着明显的负相关(r=-0.688,P<0.01);各组大鼠BALF中IFN-γ/IL-4比值与肺组织VIP含量间存在着明显的正相关(r=0.324,P<0.01)。各组大鼠BALF中IFN-γ/IL-4比值与回肠组织SP含量间存在着明显的负相关(r=-0.615,P<0.01);各组大鼠BALF中IFN-γ/IL-4比值与回肠组织VIP含量间存在着明显的正相关(r=0.679,P<0.01)。各组大鼠肺组织中SP与VIP含量之间存在着明显的负相关(r=-0.678,P<0.01);各组大鼠回肠组织中SP与VIP含量之间存在着明显的负相关(r=-0.620,P<0.01)。各组大鼠肺组织与回肠组织中SP含量之间存在着明显的正相关(r=0.602,P<0.01);各组大鼠肺组织与回肠组织中VIP含量之间存在着明显的正相关(r=0.608,P<0.01)。5.病理结果显示:疾病(B)组与疾病加证候(A)组均有不同程度的支气管及肺组织炎性病变,两中药(A1,B1)组的支气管及肺组织的炎性病变均有所减轻;疾病(B)组与疾病加证候(A)组均有不同程度的回肠组织炎性病变,两中药(A1,B1)组的回肠组织炎性病变程度有所减轻,但以疾病加证候治疗(A1)组的减轻程度明显。结论:1.哮喘及脾虚哮喘大鼠均存在着明显的气道局部或/和全身炎症性改变;哮喘及脾虚哮喘大鼠均存在着全身及气道局部免疫细胞因子IFN-γ、IL-4表达失衡;哮喘及脾虚哮喘大鼠均存在着肺、回肠组织内神经肽VIP、SP表达水平失衡;哮喘及脾虚哮喘大鼠均存在着肺组织内神经肽SP及其NK1受体mRNA表达水平失衡。2.脾虚可以加重哮喘机体气道内炎性细胞聚集及外周血炎性细胞聚集,加重哮喘机体肺、回肠组织炎性病变,从而加重哮喘机体的局部及全身炎症反应;脾虚可以加重哮喘机体血清及BALF中免疫细胞因子IFN-γ、IL-4表达失衡,加重哮喘机体肺、回肠组织内神经肽VIP、SP表达水平失衡,加重肺组织内神经肽SP及其NK1受体mRNA表达水平失衡,从而加重哮喘机体的神经内分泌免疫调节失衡,成为哮喘反复发作的内在原因之一。3.培土生金中药可以减轻模型大鼠气道局部及全身的炎性细胞浸润,下调血中及BALF中白细胞及嗜酸性粒细胞计数;培土生金中药可以调整全身及气道局部免疫细胞因子IFN-γ、IL-4表达失衡状态,上调血清及BALF中IFN-γ浓度,下调IL-4浓度,上调IFN-γ/IL-4比值;培土生金中药可以减轻肺、回肠组织内神经肽VIP、SP及NK1受体表达水平的失衡状态,下调肺组织中SP及其NK1受体mRNA表达水平,下调肺、回肠组织中SP含量表达水平,上调肺、回肠组织中VIP含量表达水平;培土生金中药能够减轻模型大鼠的大、小气道及肺、回肠组织的炎性病变。4.肺、回肠组织神经肽VIP、SP表达异常及肺组织SP及其NK1受体mRNA表达的异常均与哮喘慢性气道炎症的形成与持续存在明显相关性,与气道局部及全身的炎症状态呈明显相关性,与气道局部及全身的免疫细胞因子IFN-γ、IL-4表达失衡状态亦呈明显相关性。这进一步证实了神经肽VIP、SP在哮喘发病过程中的重要作用,特别是介导哮喘的神经内分泌免疫调节失衡。肺组织与回肠组织的神经肽VIP、SP的表达水平存在着明显的相关性,从神经肽VIP、SP及神经内分泌免疫调节的角度进一步证实了肺脾二脏的密切关系。
宋歌[7](2007)在《参芪定喘汤对哮喘的作用及机理的实验研究》文中研究指明本文在总结祖国医学和现代医学文献对支气管哮喘病因、病机及治疗的研究进展后,对参芪定喘汤治疗支气管哮喘的作用及机理进行研究探讨。参芪定喘汤是导师段富津教授的临床经验方,该药具有宣肺降气、化痰平喘、扶助正气之功。本课题通过对哮喘模型的复制,选择与哮喘发病机制相关的多项指标,对参芪定喘汤的作用机理进行系统的研究。实验中运用机能测定、放射免疫测定、组织切片染色等方法,从整体、组织细胞、细胞因子、炎性介质等方面探讨参芪定喘汤对哮喘模型的作用机理。结果显示参芪定喘汤能有效恢复哮喘模型的呼吸功能;能明显控制气道炎症,降低血中EOS数量,减轻炎性浸润,调节血清EOS趋化因子IL-4水平,增强SOD活力;能明显抑制Ⅰ型变态反应,下调血清B细胞刺激因子IL-4、IL-6水平,阻断变态反应启动环节,抑制过敏介质的产生;能明显缓解哮喘模型气道重塑改变;能改善神经调节功能,降低血清NO含量,恢复NANC对气道张力的调节作用及对粘液分泌的调节能力;能明显降低气道高反应性。说明参芪定喘汤具有明显的抗炎、调节免疫反应、降低气道高反应性的作用,通过多途径、多层次、多靶点控制哮喘模型的气道炎症,降低气道高反应性,因此具有广泛的应用前景。
王晓红[8](2007)在《咳喘宁对支气管哮喘大鼠免疫调节机制的研究》文中提出目的:在建立支气管哮喘大鼠模型基础上,通过动物实验,探讨咳喘宁对哮喘大鼠免疫调节的作用及其机制,为治疗支气管哮喘临床用药提供实验依据。方法第一部分:咳喘宁对支气管哮喘大鼠Th1∕Th2细胞因子的调节作用及病理形态学的影响清洁级SD大鼠40只,雌雄各半,体重180-200g。动物随机分为5组,即正常组、模型组、咳喘宁高剂量组(简称高剂量组)、咳喘宁低剂量组(简称低剂量组)、桂龙咳喘宁对照组(简称桂龙咳喘宁组),每组8只。各治疗组均从第1次哮喘激发开始(造模第3周)至处死前每天灌胃给药,连续4周,剂量分别为:高剂量组27g/Kg,低剂量组13.5g/Kg,桂龙咳喘宁组0.41 g/Kg,正常组、模型组予0.5%的羧甲基纤维素钠液灌胃,一日一次。参考文献,除正常组外,于实验第1天和第8天各组大鼠腹腔内注射10%卵蛋白、氢氧化铝混合液1ml,腰部两侧各取1点,每点皮下注射0.5 ml,共计2 ml,使大鼠致敏。第15天起用3%卵蛋白50 ml喷雾激发大鼠哮喘发作,雾化流量为5ml∕min,每次20min,隔日一次,共激发4周。以大鼠出现呼吸加快、口唇发绀、腹肌痉挛、点头呼吸及站立不稳等表现为激发成功。正常对照组以生理盐水代替卵蛋白进行腹腔注射及雾化吸入。病理组织学观察:动物麻醉完全后,开胸迅速结扎右主支气管,取右肺中叶4%多聚甲醛固定,脱水、包埋、切片,苏木精-伊红HE染色,镜下观察病理学改变,采用NYD1000型计算机图象处理软件。IL-4和IFN-γ水平的检测:动物麻醉完全后,开胸迅速结扎右主支气管,取右肺上叶,称重后移入玻璃匀浆管中,加入2倍肺组织重量的生理盐水,充分研碎,使组织匀浆化。制备好的匀浆,3500r/min离心10 min,提取上清液分装。采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定IL-4和IFN-γ水平。用抗IL-4(IFN-γ)单克隆抗体包被酶标板,PBS洗板4次;用1%BSA(牛血清白蛋白)加入酶标板(200μl∕孔),4oC过夜;然后分别加入标本及不同浓度的标准品(100μl∕孔),室温孵育120min,形成免疫复合物连接在板上,PBS洗板4次;加入辣根过氧化物酶标记的抗IL-4单克隆抗体(100μl∕孔),室温孵育60min, PBS洗板4次;加显色剂OPD底物溶液,避光室温10-30 min,出现黄色;加终止液硫酸,混匀,5 min内颜色变深;用酶标仪在490nm处测吸光度OD值,绘制标本曲线,查出标本浓度。数据采用均数±标准差(±s)表示,用SPSS for Windows 11.5统计软件处理,多组比较采用单因素方差分析,然后用Student-Newman-Keuls Test进行每两组间比较,显着性差异水平以0.05和0.01为标准。第二部分:咳喘宁对支气管哮喘大鼠炎性介质NO和ET-1的影响动物分组、模型建立、用药情况以及数据统计方法同前。病理组织学观察:动物麻醉完全后,开胸迅速结扎右主支气管,取右肺中叶4%多聚甲醛固定,脱水、包埋、切片,苏木精-伊红HE染色,镜下观察病理学改变。并参照文献测量大鼠气道壁的面积,并用气管内周长进行标准化。采用NYD1000型图像分析软件测定完整支气管管腔的内周长(Pi)、管壁面积(WA)、支气管平滑肌的面积,用Pi进行标准化,分别以WA/Pi、支气管平滑肌的面积/Pi表示支气管管壁厚度、支气管平滑肌厚度;同时测定每高倍视野(400倍)的EOS、淋巴细胞数。NO和ET-1含量测定:动物麻醉完全后,开胸迅速结扎右主支气管,取右肺上叶,称重后移入玻璃匀浆管中,加入2倍肺组织重量的生理盐水,充分研碎,使组织匀浆化。制备好的匀浆,3500r/min离心10 min,提取上清液分装。采用硝酸还原酶法测定肺组织NO含量,采用放免法测定肺组织ET-1含量,并用蛋白含量来校正。第三部分:咳喘宁对支气管哮喘大鼠核因子-kB(NF-kB)的影响动物分组、模型建立、用药情况以及数据统计方法同前。气道壁EOS计数:病理组织切片制作同前,采用NYD1000型计算机图象处理软件。选择结构较完整的支气管壁由同一观察者随机选取5个高倍视野(×400)计数支气管壁中浸润EOS数,计算其平均值作为该切片的代表值。NF-kB表达的检测:动物麻醉完全后,开胸迅速结扎右主支气管,取右肺中叶4%多聚甲醛固定24小时,脱水、石蜡包埋、连续切片,厚4μm,做免疫组织化学ABC法染色。一抗为小鼠抗大鼠P65单克隆抗体(F-6)、二抗为生物素化马抗小鼠IgG,主要操作步骤如下:(1)石蜡切片经二甲苯脱蜡及梯度酒精脱水,PBS漂洗5 min×2次;(2)3%的双氧水甲醇溶液室温孵育510 min,以消除内源性过氧化物酶的活性,PBS洗涤3次;(3)热修复抗原:将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液(pH6.0),微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10 min,反复1-2次,冷却后PBS洗涤2次(4)滴加5%正常山羊血清封闭,室温孵育20 min。倾去多余液体;(5)滴加NF-kBⅠ抗(1:100稀释)湿盒孵育,4℃冰箱内过夜,PBS洗涤5 min×2次;(6)滴加生物素标记的二抗工作液,37℃孵育45 min,PBS洗涤5 min×2次;(7)滴加试剂SABC(1:100稀释), 37℃孵育20 min,PBS洗涤5 min×2次;(8)DAB显色515 min,终止呈色反应;(9)苏木素衬染,常规裱片、干燥、脱水、透明、封片。在光学显微镜下观察,选择结构较完整的支气管壁由同一观察者随机选取5个高倍视野(×400)计算支气管壁中胞核NF-kB阳性的细胞百分数,取平均值作为该切片的代表值。第四部分:咳喘宁对支气管哮喘大鼠嗜酸粒细胞凋亡和相关基因蛋白bcl-2和bax表达的影响动物分组、模型建立、用药情况以及数据统计方法同前。组织标本制作:动物麻醉完全后,开胸迅速结扎右主支气管,取右肺中叶4%多聚甲醛固定24小时,脱水、石蜡包埋、连续切片,厚4μm,分别做HE染色、TUNEL标记和免疫组织化学ABC法染色。嗜酸粒细胞凋亡检测:本实验参照TUNEL试剂盒说明进行操作,主要步骤如下:(1)石蜡切片经二甲苯脱蜡及梯度酒精脱水,PBS(0.01M,pH7.4)漂洗5 min×2次;(2)蛋白酶K(2mg/L)37℃消化15 min, PBS漂洗5 min×3次;(3)DNA平衡液平衡阳性对照片2 min后,加入DNase I, 37℃反应10 min;(4)实验组和阳性对照片分别加入TUNEL工作液(1:19稀释)50μl, 37℃孵育45 min,PBS漂洗5 min×3次;(5)加入碱性磷酸酶(AP)标记的抗荧光素抗体50μl, 37℃孵育30 min,PBS漂洗5 min×3次;(6)经BufferⅢ平衡后,NBT/BCIP显色,室温下暗处显色至阳性对照显色良好时终止呈色反应;(7)缓冲甘油(PBS:甘油=1:3)封片和观察。bcl-2和bax蛋白表达的检测:采用免疫组织化学ABC法染色(方法同前)。结果判定及图象处理:光学显微镜下观察,凋亡的嗜酸粒细胞为蓝紫色双核或单核,位于胞核内,胞浆不着色。Bcl-2和Bax蛋白染色呈棕黄色颗粒,位于细胞浆内。每张切片高倍镜下(×400)由同一观察者随机选取5个视野,分别计算支气管壁和肺组织嗜酸粒细胞数量(HE)染色及嗜酸粒细胞凋亡指数(TUNEL法,凋亡嗜酸粒细胞占相应嗜酸粒细胞的百分比,AI),以及胞核bcl-2和bax强阳性的细胞百分数,取平均值作为该切片的代表值。第五部分:咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织IL-5 mRNA表达的影响动物分组、模型建立、用药情况以及数据统计方法同前。动物麻醉完全后,开胸迅速结扎右主支气管,取近肺门处的右肺组织约50-100mg,放入匀浆器内,加入1ml的Trizol用匀浆器匀浆,采用RT-PCR法检测各组大鼠肺组织IL-5 mRNA表达的变化。结果第一部分:咳喘宁对哮喘大鼠Th1∕Th2细胞因子的调节作用及病理形态学的影响1咳喘宁对支气管哮喘大鼠支气管-肺组织病理学的影响正常组:大鼠肺组织支气管内及周围无明显炎性细胞浸润,管壁完整,管壁和平滑肌厚度正常,组织黏膜未见充血水肿,肺泡间隔狭窄,肺泡腔清亮宽敞。模型组:支气管壁、管腔内及血管、支气管周围有大量嗜酸性粒细胞及淋巴细胞为主的炎性细胞浸润,支气管粘膜水肿、增厚、上皮脱落、微血管渗漏、管腔内分泌物增多,基层细胞增生、平滑肌增厚,组织黏膜充血水肿,肺泡间隔变宽,肺泡腔变狭窄。桂龙咳喘宁组:肺组织嗜酸性粒细胞及其它炎性细胞浸润略微减少,管壁和平滑肌厚度略微减少,组织充血水肿现象略微减轻。咳喘宁低剂量组:肺组织嗜酸性粒细胞及其它炎性细胞浸润减少,管壁和平滑肌厚度减少,组织充血水肿现象减轻,肺泡腔变宽,肺泡间隔变窄。咳喘宁高剂量组:肺组织嗜酸性粒细胞及其它炎性细胞浸润明显减少,几乎消失;管壁和平滑肌厚度明显减少,组织充血水肿现象明显减轻,肺泡腔变宽,肺泡间隔变窄。2咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织匀浆IL-4含量的影响与正常组比较,模型组大鼠肺组织IL-4含量明显升高,具有非常显着性差异(P<0.01);与模型组比较,各治疗组均可降低IL-4含量,咳喘宁高剂量组效果更为明显,具有非常显着性差异(P<0.01);咳喘宁低剂量组和桂龙咳喘宁组,具有显着性差异(P<0.05);与桂龙咳喘宁组比较,咳喘宁高剂量组IL-4含量明显降低,具有显着性差异(P<0.05)。3咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织匀浆IFN-γ含量的影响与正常组比较,模型组大鼠肺组织IFN-γ含量较正常组有所升高,但无显着性差异(P>0.05);与模型组比较,各治疗组均可升高IFN-γ含量,咳喘宁高剂量组效果更为明显,具有非常显着性差异(P<0.01);咳喘宁低剂量组和桂龙咳喘宁组可升高IFN-γ含量,具有显着性差异(P<0.05);与桂龙咳喘宁组比较,咳喘宁高剂量组IFN-γ含量明显增高,具有显着性差异(P<0.05)。4咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织IFN-γ∕IL-4比值的影响与正常组比较,模型组大鼠肺组织IFN-γ∕IL-4比值明显降低,具有非常显着性差异(P<0.01);与模型组比较,各治疗组均可升高IFN-γ∕IL-4比值,具有显着性差异(P<0.05或P<0.01);咳喘宁高剂量组效果更为明显,具有非常显着性差异(P<0.01);与桂龙咳喘宁组比较,咳喘宁高剂量组IFN-γ∕IL-4比值明显增高,具有显着性差异(P<0.05)。第二部分:咳喘宁对支气管哮喘大鼠炎性介质NO和ET-1的影响1咳喘宁对支气管哮喘大鼠支气管-肺组织病理学的观察及定量分析:正常组大鼠肺组织偶见炎细胞浸润,管壁完整,粘膜未见充血水肿,管壁和平滑肌厚度正常;模型组大鼠可见支气管壁及血管、支气管周围有大量嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等炎性细胞浸润(P<0.01),支气管粘膜水肿、增厚、上皮脱落、微血管渗漏、管腔内分泌物增多,基层细胞增生、平滑肌增厚(P<0.01);与模型组比较,各治疗组嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等炎性细胞浸润明显减少(P<0.01),肺组织充血、水肿现象减轻,管壁和平滑肌厚度明显减少(P<0.01);高低剂量组病理组织学指标改善优于桂龙咳喘宁组(P<0.05或P<0.01)。2咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织NO含量的影响与正常组比较,模型组大鼠肺组织NO含量明显升高,具有非常显着性差异(P<0.01);与模型组比较,各治疗组均可降低NO含量,具有显着性差异(P<0.05或P<0.01);咳喘宁高剂量组效果更为明显,具有非常显着性差异(P<0.01);与桂龙咳喘宁组比较,咳喘宁高剂量组NO含量明显降低,具有显着性差异(P<0.05)。3咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织ET-1含量的影响与正常组比较,模型组大鼠肺组织ET-1含量明显升高,具有非常显着性差异(P<0.01);与模型组比较,各治疗组均可降低ET-1含量,具有显着性差异(P<0.05或P<0.01);咳喘宁高剂量组效果更为明显,具有非常显着性差异(P<0.01);与桂龙咳喘宁组比较,咳喘宁高剂量组NO含量明显降低,具有显着性差异(P<0.05)。第三部分:咳喘宁对支气管哮喘大鼠核因子-kB(NF-kB)的影响1咳喘宁对支气管哮喘大鼠气道壁EOS浸润情况比较模型组大鼠的气道壁EOS计数较正常组显着增加(P<0.01),治疗组大鼠的气道壁EOS计数较模型组显着降低(P<0.05或P<0.01),以咳喘宁高低剂量组改善更为显着(P<0.01),其优于桂龙咳喘宁组(P<0.01)。2咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织NF-kB表达的影响正常组大鼠肺组织及气道壁见少许NF-kB阳性表达细胞,模型组大鼠肺组织及气道壁中胞核表达NF-kB的细胞比例显着高于正常组,表现为不均匀的黄褐色颗粒状物(P<0.01),而治疗组肺组织及气道壁中胞核阳性细胞的比例显着低于模型组(P<0.05或P<0.01),以咳喘宁高低剂量组改善更为显着(P<0.01),其优于桂龙咳喘宁组(P<0.01)。第四部分:咳喘宁对支气管哮喘大鼠嗜酸粒细胞凋亡和相关基因蛋白bcl-2和bax表达的影响1咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织EOS凋亡指数的影响正常组大鼠肺组织及气道壁极少EOS浸润。模型组大鼠的气道壁EOS计数较正常组显着增加(P<0.01),治疗组大鼠的气道壁EOS计数较模型组显着降低(P<0.05或P<0.01),以咳喘宁高低剂量组改善更为显着(P<0.01),其优于桂龙咳喘宁组(P<0.01)。正常组大鼠肺组织及气道壁极少EOS凋亡,治疗组大鼠的气道壁EOS凋亡指数较模型组显着增高(P<0.05或P<0.01),以咳喘宁高剂量组改善更为显着(P<0.01),其作用优于桂龙咳喘宁组(P<0.01)。2咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织bcl-2蛋白表达的影响正常组大鼠肺组织及气道壁见少许bcl-2阳性表达细胞,模型组大鼠肺组织及气道壁中胞浆表达bcl-2的细胞比例显着高于正常组,表现为不均匀的黄褐色颗粒状物(P<0.01),而治疗组肺组织及气道壁中胞浆阳性细胞的比例显着低于模型组(P<0.05或P<0.01),以咳喘宁高剂量组改善更为显着(P<0.01),其优于桂龙咳喘宁组(P<0.01)。3咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织bax蛋白表达的影响正常组大鼠肺组织及气道壁见较多bax阳性表达细胞,表现为不均匀的黄褐色颗粒状物。模型组大鼠肺组织及气道壁中胞浆表达Bcl-2的细胞比例显着低于正常组,表现为较浅的黄褐色颗粒状物(P<0.01),而治疗组肺组织及气道壁中胞浆阳性细胞的比例显着高于模型组(P<0.01),以咳喘宁高剂量组改善更为显着,其优于桂龙咳喘宁组(P<0.01)。第五部分:咳喘宁对支气管哮喘大鼠IL-5 mRNA表达的影响哮喘模型组肺组织IL-5 mRNA表达较正常组明显增高,与模型组比较,各用药组肺组织IL-5 mRNA的表达明显降低(P<0.05或P<0.01),以咳喘宁高剂量组更为显着(P<0.01);咳喘宁高剂量组IL-5 mRNA表达含量明显低于桂龙咳喘宁组(P<0.01)。结论1咳喘宁能有效地改善支气管哮喘肺组织病理改变,减少肺组织EOS浸润,减轻组织充血、水肿现象,减少支气管管壁和平滑肌厚度,有效地减轻哮喘气道炎症及气道重塑。2咳喘宁能显着降低支气管哮喘大鼠肺组织IL-4的含量,提高IFN-γ的含量,提高IFN-γ∕IL-4比值,有效地调节哮喘细胞因子网络系统,改善哮喘气道炎症。3咳喘宁能显着降低支气管哮喘大鼠肺组织NO和ET-1的含量,减少哮喘炎性介质的分泌,改善哮喘气道炎症及气道重塑。4咳喘宁能显着降低支气管哮喘大鼠肺组织NF-kB的表达,通过调整信号传导途径,促进EOS凋亡,改善哮喘气道炎症。5咳喘宁能显着降低支气管哮喘大鼠肺组织bcl-2蛋白的表达,升高bax蛋白的表达,通过调整凋亡相关基因的表达,促进EOS凋亡,有效地改善哮喘气道炎症。6咳喘宁能显着降低支气管哮喘大鼠肺组织IL-5 mRNA的表达,从转录水平降低相关细胞因子含量,减少肺内EOS浸润,促进EOS凋亡,有效地改善哮喘气道炎症。
桑杲[9](2006)在《小儿止咳平喘露的平喘作用及其对外周血可溶性细胞粘附分子-1的影响》文中研究指明研究背景:麻杏石甘汤是中医治疗小儿支气管哮喘的常用方剂,小儿止咳平喘露是在“麻杏石甘汤”基础上,针对小儿的生理病理特点优化组合创制的经验方,并已经制成成药应用于临床,取得良好的平喘疗效。现代研究表明中药不仅具有舒张支气管平滑肌,抑制哮喘速发相反应的作用,还能够抗气道炎症,降低气道高反应性,抑制哮喘的迟发相反应,但大多数为临床疗效的报道,实验研究较少。对中药抗哮喘气道炎症机制的研究将有助于中药临床应用的科学化和合理化,并为哮喘的中药治疗提供理论依据。气道炎性细胞浸润是哮喘组织病理学特征之一,其中嗜酸性粒细胞是哮喘气道炎症的主要效应细胞。它通过释放毒性蛋白,引起气道上皮损伤、剥脱和气道高反应性。无论是在哮喘急性期还是缓解期,肺组织内均有明显的嗜酸性粒细胞浸润。气道的嗜酸性粒细胞浸润是哮喘的重要特征之一,并与气道上皮损害、肺组织水肿及病情严重程度呈平行关系。嗜酸性粒细胞粘附分子的异常表达在嗜酸性粒细胞的分化、增殖及其向气道的粘附、迁移与功能活化等环节中起着十分关键的作用。小儿止咳平喘露的平喘作用是否与干预可溶性细胞粘附分子-1(sICAM-1)的异常表达、减少气道嗜酸性粒细胞浸润有关是一个值得探讨的问题。研究目的:在小儿止咳平喘露平喘、镇咳、祛痰的实验基础上,观察其对哮喘动物模型肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞计数及外周血sICAM-1水平的影响。研究方法:1.采用豚鼠组胺引喘法观察小儿止咳平喘露的平喘作用。2.采用豚鼠枸橼酸引咳法观察小儿止咳平喘露的镇咳作用。3.采用小鼠气道酚红排泄法观察小儿止咳平喘露的祛痰作用。4.将40只健康豚鼠随机分为4组,即正常对照组、模型组、细辛脑组、小儿止咳平喘露组,每组10只。建立卵白蛋白致敏豚鼠哮喘模型,在肺泡灌洗液中计数白细胞总数和嗜酸性粒细胞,用ELISA法检测豚鼠血清sICAM-1水平。研究结果:1.组胺诱发豚鼠哮喘试验:小儿止咳平喘露组豚鼠引喘潜伏期为80.40±17.53秒,与正常对照组(53.20±9.35秒)及细辛脑组(53.00±8.01秒)相比明显延长(p<0.01)。2.枸橼酸诱发豚鼠咳嗽试验:小儿止咳平喘露组豚鼠咳嗽潜伏期为45.60±9.41秒,细辛脑组豚鼠咳嗽潜伏期为40.40±6.75秒,与正常对照组(17.90±6.17秒)相比,小儿止咳平喘露组和细辛脑组豚鼠咳嗽潜伏期明显延长(p<0.01)。3.小鼠气道酚红排泄试验:小儿止咳平喘露组小鼠气道酚红排泄量为152.88±56.98ng/ml,细辛脑组小鼠气道的酚红排泄量为199.25±60.17ng/ml,与正常对照组(72.13±27.19ng/ml)相比明显增加(p<0.01)。4.豚鼠肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞计数:哮喘模型组豚鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞计数为(2.90±0.88)×106个/ml,较正常对照组[(1.10±0.74)×106个/ml]显着增加,两者有显着性差异(P<0.01);小儿止咳平喘露组[(1.00±0.82)×106个/ml]和细辛脑组[(1.50±0.53)×106个/ml]豚鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞计数较哮喘模型组明显减少(P<0.01)。5.豚鼠血清sICAM-1含量测定:正常对照组豚鼠血清sICAM-1含量很低(23,40±5,56ng/ml),哮喘模型组豚鼠血清sICAM-1含量为159.90±40.07ng/ml,较正常对照组显着增加,两者有显着性差异(P<0.01);小儿止咳平喘露组(61.80±7.76ng/ml)和细辛脑组(76.30±10.76ng/ml)豚鼠血清sICAM-1水平较哮喘模型组显着降低(P<0.01)。结论:1.小儿止咳平喘露具有平喘、止咳、祛痰作用;2.小儿止咳平喘露能降低哮喘豚鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞计数;3.小儿止咳平喘露能明显降低哮喘豚鼠血清sICAM-1水平。
刘自力[10](2006)在《培土生金法对脾虚哮喘大鼠嗜酸细胞凋亡及对Fas mRNA、Bcl-2 mRNA表达的影响》文中进行了进一步梳理目的:通过对各种“宿根”学说的分析,借助于现代医学对中医“宿根”概念的新认识,在前期临床与实验研究的基础上,首次明确提出“脾虚为哮喘宿根”的新假说。以培土生金立法,采用健脾益肺的方药,应用现代分子生物学的方法,观察其对脾虚哮喘大鼠嗜酸性粒细胞凋亡形态学及对Fas mRNA、Bcl-2 mRNA表达的影响,探讨脾虚对哮喘的影响及培土生金法治疗哮喘的作用机制。 方法:以中医理论为指导,复合利用中医脾虚动物模型和西医哮喘动物模型的造模方法,建立大鼠脾虚哮喘病证结合的模型。造模成功后,采用培土生金的方法进行治疗。采用TUNEL法进行细胞原位凋亡的检测,肺组织中Fas mRNA、Bcl-2 mRNA的检测采用原位杂交法,并采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)测定BALF液中IL-5、GM-CSF的浓度。应用光镜对肺组织形态学进行观测。 结果:病证结合组和疾病组同对照组比较,均表现为BALE中GM-CSF的浓度显着升高和TGF-β浓度的显着下降(P<0.01),病证结合组和疾病组与对照组比较,均表现为EOS计数值升高、EOS凋亡率下降(P<0.01或P<0.05),病证结合组和疾病组同对照组比较,均表现为EOS上的Fas mRNA表达的显着减少和Bcl-2mRNA表达的显着增多(P<0.01)。与相应的疾病组相比较,两中药组(A1,B1)GM-CSF的浓度显着降低P(<0.01),TGF-β浓度的显着升高(P<0.01或P<0.05);与相应的疾病组相比较,两中药组中EOS凋亡率明显升高(P<0.05)或P<0.01),同时,与相应的疾病组相比较,两中药组((A1,B1)Bcl-2mRNA表达显着减少(P<0.01),Fas mRNA表达明显增多(P<0.01或P<0.05)。各组大鼠肺组织中Fas mRNA的表达与EOS的凋亡间存在明显的正相关(r=0.62,p<0.05),Bcl-2mRNA的表达与EOS的凋亡间存在着明显的负相关(r=-0.58,p<0.05);各组大鼠BALF中的TGF-β浓度水平与EOS的凋亡率呈显着正相关(r=0.51,p<0.05),各组大鼠BALF中的GM-CSF浓度水平与EOS的凋亡率呈显着负相关(r=-0.65,p<0.01)。病理结果显示:疾病组与病证结合组均有不同程度的支气管及肺组织炎性病变,两治疗组的支气管及肺组织的炎症病变均有所减轻。 结论:培土生金法能促进模型大鼠哮喘及脾虚哮喘状态下EOS的凋亡;培土生金法能上调模型大鼠肺组织EOS表面Fas mRNA的表达,下调EOS表面Bcl-2 mRNA的表达;培土生金法能提高模型大鼠BALF中TGF-β的浓度,降低GM-CSF的浓度;培土生金法能减轻模型大鼠的大、小气道及肺组织的炎症。
二、哮喘大鼠肺组织cAMP、cGMP的动态变化及补肾定喘汤对其的影响(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、哮喘大鼠肺组织cAMP、cGMP的动态变化及补肾定喘汤对其的影响(论文提纲范文)
(1)抗支口服液对哮喘大鼠模型作用机制的实验研究(论文提纲范文)
缩略语表 |
中文摘要 |
ABSTRACT |
引言 |
文献综述 |
第一章 祖国医学对哮喘的认识及治疗概况 |
一、哮喘之认识 |
二、哮喘之辨证施治 |
1 内治法 |
2 哮喘缓解期的辨证施治 |
3 哮喘的其方它治法 |
4 支气管哮喘常用方剂现代研究 |
第二章 现代医学对支气管哮喘的研究 |
一、哮喘的流行病学 |
二、病因学 |
1 遗传因素 |
2 吸入变应原 |
3 空气污染 |
4 病毒感染 |
5 食物性变应原 |
6 药物因素 |
三、哮喘的发病机制 |
(一) 气道炎症学说 |
(二) 神经-受体失衡学说 |
(三) 免疫与变态反应学说 |
(四) 其它学说 |
四、哮喘的防治 |
1 哮喘的治疗 |
2 哮喘慢性维持期的治疗 |
3 哮喘患者的教育 |
实验研究 |
第一章 抗支口服液对哮喘大鼠一般状态及肺组织病理学变化的影响 |
一、实验材料 |
(一) 实验动物 |
(二) 药物 |
(三) 主要试剂 |
(四) 主要仪器 |
(五) 主要溶液的配置 |
二、实验方法 |
(一) 动物处理 |
(二) 肺组织病理学检查 |
三、实验结果及分析 |
(一) 抗支口服液对支气管哮喘大鼠一般状态的影响 |
(二) 肺组织形态学病理改变 |
(三) 结果分析 |
四、讨论 |
第二章 抗支口服液对哮喘大鼠肺泡灌洗液中炎性细胞的影响 |
一、材料与方法 |
(一) 实验材料 |
(二) 实验方法 |
二、实验结果 |
三、讨论 |
第三章 抗支口服液对哮喘大鼠肺组织内IL-5MRNA表达的影响 |
一、材料与方法 |
(一) 材料 |
(二) 实验方法 |
二、结果 |
三、讨论 |
第四章 抗支口服液对哮喘大鼠血清中ECP、IGE水平的影响 |
一、材料与方法 |
(一) 材料 |
(二) 实验方法 |
二、实验结果 |
三、讨论 |
第五章 抗支口服液对哮喘大鼠肺组织内LTB_4、LTC_4的影响 |
一、材料与方法 |
(一) 材料 |
(二) 实验方法 |
二、实验结果 |
三、讨论 |
结论 |
致谢 |
参考文献 |
附录 |
附件 |
(2)“补益肺肾、祛风化痰法”治疗支气管哮喘慢性持续期的临床研究和机理探讨 ——周仲瑛教授临床经验应用与评价方法研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
前言 |
第一部分 理论研究 |
1. 历史文献研究 |
1.1 病名及其内涵和外延 |
1.2 病因病机探讨 |
1.3 辨证论治研究 |
2. 近年中医药研究 |
2.1 支气管哮喘慢性持续期的病因病机认识 |
2.2 支气管哮喘慢性持续期的中医治疗法则 |
2.3 支气管哮喘慢性持续期的中医药复方应用 |
2.4 支气管哮喘慢性持续期的中医药实验研究 |
3. 现代医学研究 |
3.1 与体质相关的发病危险因素 |
3.2 支气管哮喘与IgE |
3.3 支气管哮喘与细胞因子 |
3.4 支气管哮喘与核因子-κB |
3.5 支气管哮喘与肺功能 |
3.6 支气管哮喘的生活质量评价 |
4. 目前存在的问题和解决的思路 |
5. 周仲瑛教授学术思想探讨 |
5.1 肺肾两虚、风痰伏肺,是哮喘慢性持续期的病机关键 |
5.2 补益肺肾、祛风化痰,是哮喘慢性持续期的治疗大法 |
5.3. 风痰瘀虚夹杂,是哮喘慢性持续期的复杂因素 |
5.4 防控复发,是哮喘慢性持续期的"治未病"学术思想 |
5.5 "温养化痰方"和"清养化痰方"探微 |
第二部分 临床研究 |
1. 病例选择标准 |
1.1 西医诊断标准 |
1.2 临床分期标准 |
1.3 临床分级标准 |
1.4 中医辨证标准 |
1.5 病例纳入标准 |
1.6 病例排除标准 |
1.7 退出和中止试验病例标准 |
1.8 不良事件处理 |
2. 统计学方法 |
3. 临床资料 |
3.1 病例来源及分组 |
3.2 性别与年龄分布 |
3.3 证型分布 |
3.4 病情严重程度分级 |
4. 治疗方法 |
4.1 采用前瞻性队列研究 |
4.2 暴露(或治疗)界定 |
5. 观察指标 |
5.1 疗效性观察 |
5.2 安全性观察 |
6. 疗效评定标准 |
6.1 疾病疗效判断标准 |
6.2 中医证候疗效评价标准 |
6.3 安全性评价标准 |
7. 治疗结果 |
7.1 疗效比较 |
7.2 治疗前后哮喘控制测试(ACT)评分比较 |
7.3 治疗前后症状、体征变化 |
7.4 治疗期间各时间点症状、体征变化 |
7.5 两组治疗前后次症变化 |
7.6 治疗前后实验室检查变化 |
7.7 远期疗效观察 |
7.8 生存质量调查 |
8. 安全性观察 |
9. 讨论 |
9.1 总体疗效突显 |
9.2 减少发作频次和程度 |
9.3 改善患者生存质量 |
9.4 改善肺的通气功能 |
9.5 作用机理探讨 |
9.6 安全可靠,未见毒副反应 |
第三部分 实验研究 |
实验一 温养化痰方、清养化痰方对哮喘大鼠NF-κB的影响 |
1. 材料与方法 |
1.1 实验材料 |
1.2 实验方法 |
2. 结果 |
2.1 一般状况 |
2.2 各组大鼠肺组织病理学观察 |
2.3 NF-κB在各组肺组织中的表达情况 |
3. 讨论 |
4. 结论 |
实验二 温养化痰方、清养化痰方对哮喘大鼠MIF的影响 |
1. 材料与方法 |
1.1 实验材料 |
1.2 实验方法 |
2. 实验结果 |
2.1 一般状况 |
2.2 各组大鼠肺组织病理学观察 |
2.3 MIF在各组肺组织中的表达情况 |
3. 讨论 |
4. 结论 |
实验三 温养化痰方、清养化痰方对哮喘大鼠TNF-α的影响 |
1. 材料与方法 |
1.1 实验材料 |
1.2 实验方法 |
2. 实验结果 |
3. 讨论 |
4. 结论 |
实验总结 |
结论 |
参考文献 |
附录 |
攻读博士学位期间取得的研究成果 |
致谢 |
作者简介 |
(3)中药对支气管哮喘实验病理形态学干预的研究(论文提纲范文)
1 中药对实验指标的影响 |
1.1 中药对嗜酸性粒细胞的影响 |
1.2 中药对支气管哮喘辅助性T细胞Th1、Th2亚群的调节作用 |
1.3 中药对支气管哮喘内皮素 (ET) 的调节作用 |
1.4 中药对CD4+、CD8+T细胞含量的影响 |
1.5 中药对下丘脑中5-羟色胺 (5-HT) 含量的影响 |
1.6 中药对外周血浆白介素-5、白介素-10 (IL-5、IL-10) 变化的影响 |
1.7 中药对哮喘动物模型气道谷胱甘肽水平的影响 |
1.8 中药对动物模型气道环核苷酸水平的影响 |
1.9 中药对哮喘模型氧自由基 (ROS) 代谢的影响 |
1.10 中药对哮喘大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴 (HPA轴) 及IL-6功能紊乱的实验研究 |
2 中药对实验动物组织形态学的影响 |
3 结语 |
(4)麻黄及其汤剂治疗哮喘的研究进展(论文提纲范文)
1 中医哮病 |
2 哮喘发病机制 |
3 麻黄治疗哮喘的药理学 |
4 麻黄常用配伍治疗哮喘 |
4.1 麻黄汤 |
4.2 定喘汤 |
4.3 射干麻黄汤 |
4.4 小青龙汤 |
5 小 结 |
(5)“肺应秋”生理机制的实验研究 ——四时季节变化对肺脏细胞信号转导系统的影响(论文提纲范文)
中文摘要 |
ABSTRACT |
英文缩略词 |
前言 |
综述一 中医"肺应秋"理论的研究概况 |
参考文献 |
综述二 肺系疾病与细胞信号转导物质 |
参考文献 |
第二部分 理论探讨 |
理论探讨一 "肺应秋"的中医理论内涵 |
参考文献 |
理论探讨二 "肺应秋"调控机制与细胞信号转导的相关性探讨 |
参考文献 |
实验一 四季变化对Wistar大鼠肺组织中G蛋白的影响 |
1 材料和方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
参考文献 |
实验二 四季变化对Wistar大鼠肺组织中第二信使的影响 |
1 材料和方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
参考文献 |
实验三 四季变化对Wistar大鼠肺组织中第三信使的影响 |
1 材料和方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
参考文献 |
小结 |
结语 |
致谢 |
个人简历 |
附图 |
(6)培土生金中药对脾虚哮喘大鼠肺、回肠组织神经肽水平的影响(论文提纲范文)
中文摘要 |
英文摘要 |
前言 |
文献综述 |
正文 |
实验一 脾虚哮喘大鼠模型的建立 |
实验二 培土生金中药对脾虚哮喘大鼠血清及支气管肺泡 灌洗液中IL-4、IFN-γ浓度及IFN-γ/IL-4比值的影响 |
实验三 培土生金中药对脾虚哮喘大鼠 肺及回肠组织病理学的影响 |
实验四 培土生金中药对脾虚哮喘大鼠 肺、回肠组织中神经肤水平的影响 |
实验五 培土生金中药对脾虚哮喘大鼠 肺组织中SP及其KN1受体m砂认表达的影响 |
分析讨论 |
结论 |
参考文献 |
附录图片 |
致谢 |
个人简历 |
(7)参芪定喘汤对哮喘的作用及机理的实验研究(论文提纲范文)
缩略语表 |
摘要 |
ABSTRACT |
前言 |
文献综述 |
一、祖国医学对哮喘的认识及研究进展 |
(一) 历代医家对哮喘的认识 |
(二) 中医药治疗哮喘的研究近况 |
二、现代医学对支气管哮喘的研究进展 |
(一) 对于病因学的研究进展 |
(二) 对于发病机制的研究进展 |
(三) 哮喘的防治 |
实验研究 |
一、实验材料及制备 |
二、实验方法 |
(一) 对哮喘豚鼠呼吸功能的影响 |
(二) 对致敏豚鼠离体回肠平滑肌过敏性收缩的影响 |
(三) 对哮喘豚鼠血中EOS数量的影响 |
(四) 对哮喘豚鼠血清SOD、NO含量的影响 |
(五) 对哮喘豚鼠血清IL-4、IL-6含量的影响 |
(六) 对哮喘豚鼠肺组织形态学的影响 |
三、实验结果 |
(一) 对哮喘豚鼠呼吸功能的影响 |
(二) 对致敏豚鼠离体回肠平滑肌过敏性收缩的影响 |
(三) 对哮喘豚鼠血中EOS数量的影响 |
(四) 对哮喘豚鼠血清SOD、NO含量的影响 |
(五) 对哮喘豚鼠血清IL-4、IL-6含量的影响 |
(六) 对哮喘豚鼠肺组织形态学的影响 |
讨论 |
一、参芪定喘汤组方依据 |
二、参芪定喘汤方义分析 |
三、对哮喘动物模型的评价 |
四、参芪定喘汤对哮喘的作用及机制研究 |
(一) 对哮喘豚鼠呼吸功能的影响 |
(二) 对哮喘豚鼠气道炎症的影响 |
(三) 对哮喘豚鼠变态反应机制的影响 |
(四) 对哮喘豚鼠气道重塑机制的影响 |
(五) 对哮喘豚鼠神经调节机制的影响 |
(六) 对哮喘豚鼠气道高反应性的影响 |
结论 |
致谢 |
参考文献 |
附图 |
个人简历 |
(8)咳喘宁对支气管哮喘大鼠免疫调节机制的研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
英文摘要 |
英文缩写 |
研究论文 咳喘宁对支气管哮喘大鼠免疫调节机制的研究 |
引言 |
第一部分 咳喘宁对支气管哮喘大鼠 Th1∕Th2 细胞因子的调节作用及病理形态学的影响 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
附图 |
附表 |
讨论 |
小结 |
参考文献 |
第二部分 咳喘宁对支气管哮喘大鼠炎性介质NO 和ET-1 的影响 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
附表 |
讨论 |
小结 |
参考文献 |
第三部分 咳喘宁对支气管哮喘大鼠核因子-kB (NF-kB)的影响 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
附图 |
附表 |
讨论 |
小结 |
参考文献 |
第四部分 咳喘宁对支气管哮喘大鼠嗜酸粒细胞凋亡和相关基因蛋白Bcl-2 和bax 表达的影响 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
附图 |
附表 |
讨论 |
小结 |
参考文献 |
第五部分 咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织IL-5 mRNA 表达的影响 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
附图 |
附表 |
讨论 |
小结 |
参考文献 |
结论 |
综述 中药治疗支气管哮喘的实验研究进展 |
致谢 |
个人简历 |
(9)小儿止咳平喘露的平喘作用及其对外周血可溶性细胞粘附分子-1的影响(论文提纲范文)
一 中文摘要 |
二 英文摘要 |
三 正文 |
1 前言 |
2 材料与方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
5 结论 |
6 参考文献 |
四 综述 传统中医药在小儿支气管哮喘中的应用及研究进展 |
五 在读期间发表论文 麻杏石甘汤治疗小儿支气管哮喘的药理研究及临床应用进展 |
六 致谢 |
(10)培土生金法对脾虚哮喘大鼠嗜酸细胞凋亡及对Fas mRNA、Bcl-2 mRNA表达的影响(论文提纲范文)
英文缩略语词表 |
英文摘要 |
中文摘要 |
前言 |
实验研究 |
一、材料与方法 |
1.实验动物及分组 |
2.动物模型的建立 |
3.处理因素 |
4.标本采集及制备 |
5.观察指标及测定方法 |
6.实验数据的处理 |
二、结果与分析 |
1.培土生金法对脾虚哮喘大鼠血及BALF中EOS的影响 |
2.培土生金法对脾虚哮喘大鼠BALF中TGF-β、GM-CSF浓度的影响 |
3.培土生金法对脾虚哮喘大鼠肺组织EOS凋亡的影响 |
4.培土生金法对脾虚哮喘大鼠肺组织Fas mRNA、Bcl-2mRNA表达的影响 |
5.培土生金法对脾虚哮喘大鼠肺组织形态学的影响 |
6.Fas mRNA、Bcl-2mRNA的表达、相关细胞因子浓度与EOS凋亡的相关性分析 |
三、讨论 |
1.祖国医学对哮喘的认识 |
2.现代医学对哮喘发病机理的认识 |
3.哮喘病证结合动物模型的建立 |
4.EOS凋亡在支气管哮喘炎症机制中的作用 |
5.脾虚为哮喘之宿根 |
6.培土生金法的作用与机制 |
结语 |
参考文献 |
文献综述 |
1.炎性细胞凋亡与支气管哮喘 |
2.支气管哮喘的中西医研究进展 |
附录图片 |
致谢 |
个人简历 |
四、哮喘大鼠肺组织cAMP、cGMP的动态变化及补肾定喘汤对其的影响(论文参考文献)
- [1]抗支口服液对哮喘大鼠模型作用机制的实验研究[D]. 李志军. 黑龙江中医药大学, 2013(10)
- [2]“补益肺肾、祛风化痰法”治疗支气管哮喘慢性持续期的临床研究和机理探讨 ——周仲瑛教授临床经验应用与评价方法研究[D]. 徐立然. 南京中医药大学, 2011(07)
- [3]中药对支气管哮喘实验病理形态学干预的研究[J]. 徐立然,马秀霞. 中医学报, 2011(02)
- [4]麻黄及其汤剂治疗哮喘的研究进展[J]. 王娇,王宋平. 四川中医, 2010(09)
- [5]“肺应秋”生理机制的实验研究 ——四时季节变化对肺脏细胞信号转导系统的影响[D]. 顾晓静. 北京中医药大学, 2009(10)
- [6]培土生金中药对脾虚哮喘大鼠肺、回肠组织神经肽水平的影响[D]. 张焱. 辽宁中医药大学, 2009(07)
- [7]参芪定喘汤对哮喘的作用及机理的实验研究[D]. 宋歌. 黑龙江中医药大学, 2007(05)
- [8]咳喘宁对支气管哮喘大鼠免疫调节机制的研究[D]. 王晓红. 河北医科大学, 2007(06)
- [9]小儿止咳平喘露的平喘作用及其对外周血可溶性细胞粘附分子-1的影响[D]. 桑杲. 浙江大学, 2006(03)
- [10]培土生金法对脾虚哮喘大鼠嗜酸细胞凋亡及对Fas mRNA、Bcl-2 mRNA表达的影响[D]. 刘自力. 辽宁中医药大学, 2006(12)