一、High-level apoptosis is persistent in myocardiocytes of sinoaortic-denervated rats（论文文献综述）
陈明健,李婷,候鹏程,杨雯茜,陈青[1]（2021）在《自噬介导运动改善心血管疾病的研究进展》文中研究表明心血管疾病是威胁人类健康的重要原因,其死亡率位于所有疾病死亡率的前列。运动作为一种非药物干预手段,可使机体产生代谢适应,保护心血管系统。细胞自噬是存在于真核生物和哺乳动物中的一种重要生物学现象,在维持细胞功能与内环境中发挥关键作用。研究表明,自噬异常与心血管疾病的发生发展密切相关。自噬水平过低或高都可能导致心血管疾病,而适度的运动能纠正异常自噬,这可能在改善心血管疾病中发挥积极作用。该文主要从自噬角度综述运动对心血管疾病的影响及可能的机制,并分析三者之间的关系,为运动防治心血管疾病提供理论支持。
袁晶[2]（2021）在《绝经后高血压患者中医证型分布特点及淫羊藿苷干预的相关机制研究》文中认为目的:1.评价补肾法联合降压药治疗女性绝经后及围绝经期高血压的有效性和安全性。2.探讨绝经后高血压患者的中医证型分布及动态血压特点。3.探讨淫羊藿苷（icariin,ICA）对雌性去势SHR循环和心肌组织肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）的调节作用及相关机制。方法:1.系统评价和Meta分析计算机检索中国知网、维普数据库、万方数据知识服务平台、中国生物医学文献数据库、PubMed、Embase、The Cochrane Library 7个数据库,搜集有关补肾法联合降压药治疗绝经后及围绝经期高血压的随机对照试验。应用Rev Man 5.3和Stata 14.0软件进行Meta分析、发表偏倚检测、敏感性分析、亚组分析,采用TSA 0.9软件对降压疗效进行试验序贯分析。2.横断面研究以绝经后高血压患者作为研究对象,采用横断面研究方法分析一般资料、中医证型分布、昼夜节律分布特点;进一步将纳入患者分为绝经<10年组和绝经≥10年组,分析两组患者动态血压参数是否存在差异;分析年龄与动态血压参数的相关性;血压变异性（blood pressure variability,BPV）用标准差（standard deviation,SD）和变异系数（coefficient of variation,CV）表示,采用多元线性回归方法分析各变量与BPV的关系。3.动物实验9周龄雌性去势SHR48只,随机分为6组,模型组（SHR组）、雌二醇组（SHR+E2组）、ICA低剂量组（SHR+LI组）、ICA中剂量组（SHR+MI组）、ICA高剂量组（SHR+HI组）、ICA中剂量+雌激素受体拮抗剂ICI182780组（SHR+MI+ICI组）。9周龄雌性去势WKY8只作为正常对照组（WKY组）。SHR+E2组给予戊酸雌二醇（0.1 mg/kg/day）灌胃,ICA低、中、高剂量组分别给予ICA 10 mg/kg/day、20 mg/kg/day、40 mg/kg/day灌胃,SHR+MI+ICI组给予ICA 20 mg/kg/day灌胃,并予氟维斯群注射液52 mg/kg/month皮下注射。监测各组大鼠体重、血压及心率;对心脏、脾脏及肾脏进行称重并计算脏器系数;采用ELISA法检测各组大鼠血清AngⅡ、Ang（1-7）、E2水平;采用Western-blot法检测各组大鼠心肌组织 AGT1R、MAS1、ACE1、ACE2、GPR30、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平。结果:1.补肾法联合降压药治疗绝经后及围绝经期高血压的系统评价和Meta分析（1）Meta分析结果显示:最终纳入14篇文献,共1139例患者。补肾法联合降压药治疗绝经后及围绝经期高血压的降压疗效、更年期症状疗效优于西药组;SBP水平、DBP水平、kupperman评分、黄体生成素（luteinizing hormone,LH）水平低于西药组;雌二醇（estradiol,E2）水平高于西药组。（2）不良反应发生率:补肾法联合降压药组低于西药组。（3）发表偏倚:对降压疗效绘制漏斗图并进行Egger’s法检验,提示纳入文献存在发表偏倚。（4）降压疗效的试验序贯分析:结果提示Meta分析可能过早出现阳性结果,可能存在假阳性结果。2.绝经后高血压患者中医证型分布及动态血压特点研究（1）本次研究共纳入214例患者,阴阳两虚型患者所占比例最高。（2）所有纳入患者中,非勺型昼夜节律患者所占比例最高。（3）绝经≥10 年组的 24hSBP、nSBP、收缩压极差（maximum-minimum difference between systolic blood pressure,MMD）、24hSBPSD、dSBPSD、24hSBPCV、dSBPCV、dDBPCV、nDBPCV 高于绝经<10 年组（P<0.05 或P<0.01）。（4）24hSBP、dSBP、nSBP、MMD、24hSBPSD、dSBPSD、nSBPSD、dSBPCV、dDBPCV 与年龄呈正相关（P<0.05 或P<0.01）;24hDBP、SBP-BPF、dDBP、nDBP、Hr与年龄呈负相关（P<0.05或P<0.01）。（5）24hSBPSD的相关因素有:MMD、MAP、日间血压负荷;24hDBPSD的相关因素有:24hDBP、DBP-BPF、MMD、高血压3级、BUN;24hSBPCV的相关因素有:24hSBP、24hDBP、MMD、日间血压负荷;24hDBPCV的相关因素有:MMD、MAP、SBP-BPF、DBP-BPF、BUN。3.淫羊藿苷通过调节RAS对雌性去势SHR发挥血压保护作用（1）平均动脉压（MAP）:与WKY组比较,SHR组MAP升高（P<0.05）;与SHR 组比较,SHR+E2 组、SHR+LI 组、SHR+MI 组、SHR+HI 组 MAP 降低（P<0.05）;与 SHR+MI 组比较,SHR+MI+ICI 组 MAP 升高（P<0.05）。（2）心率:与SHR组比较,SHR+LI组、SHR+MI组、SHR+HI组心率降低（P<0.05 或P<0.01）。（3）脏器系数:①心脏系数:与WKY组比较,6组SHR的心脏系数均升高（P<0.01）;与SHR+MI组比较,SHR+MI+ICI组心脏系数升高（P<0.05）。②左肾系数:与WKY组比较,SHR组左肾系数升高（P<0.01）;与SHR组比较,SHR+E2组左肾系数降低（P<0.05）。③右肾系数:与WKY组比较,SHR组右肾系数升高（P<0.01）;与SHR组比较,SHR+E2 组、SHR+LI 组、SHR+MI 组、SHR+HI 组左肾系数降低（P<0.05 或 P<0.01）。④脾脏系数:与WKY组比较,SHR组脾脏系数升高（P<0.01）;与SHR+MI组比较,SHR+MI+ICI组脾脏系数升高（P<0.05）。（4）ACE1-AngⅡ-AT1R轴:①ACE1蛋白:与WKY组比较,SHR组ACE1蛋白表达水平升高（P<0.01）;与SHR组比较,SHR+MI组、SHR+HI组ACE1蛋白表达水平降低（P<0.05）。②AngⅡ含量:与WKY组比较,SHR组AngⅡ含量升高（P<0.01）;与SHR组比较,SHR+E2组、SHR+MI 组、SHR+HI 组 AngⅡ含量降低（P<0.05 或P<0.01）。③AGT1R蛋白:与SHR组比较,SHR+MI组AGT1R蛋白表达水平升高（P<0.05）。（5）ACE2-Ang（1-7）-MasR轴:①ACE2蛋白:与WKY组比较,SHR组ACE2蛋白表达水平升高（P<0.05）。②Ang（1-7）含量:与WKY组比较,SHR组Ang（1-7）含量升高（P<0.01）;与SHR+E2组比较,SHR+LI组Ang（1-7）含量升高（P<0.01）;与SHR+MI组比较,SHR+MI+ICI 组 Ang（1-7）水平降低（P<0.01）。③MAS1蛋白:与WKY组比较,SHR组MAS1蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。（6）E2及其受体GPR30:①E2含量:与SHR组比较,SHR+E2组、SHR+LI组、SHR+MI组、SHR+HI组的E2含量有升高趋势（P>0.05）。②GPR30蛋白:与WKY组比较,SHR组GPR30蛋白表达水平有升高趋势（P>0.05）。（7）ERK1/2 通路:①p-ERK1/2蛋白:与WKY组比较,SHR组p-ERK1/2蛋白表达水平有升高趋势（P>0.05）;与SHR组比较,SHR+HI组p-ERK1/2蛋白表达水平降低（P<0.05）。②p-ERK1/2/ERK1/2:与 WKY 组比较,SHR 组 p-ERK1/2/ERK1/2 有升高趋势（P>0.05）;与 SHR 组比较,SHR+E2 组、SHR+HI 组 p-ERK1/2/ERK1/2 有降低趋势（P>0.05）;与 SHR+MI 组比较,SHR+MI+ICI 组 p-ERK1/2/ERK1/2 升高（P<0.01）。结论:1.针对女性绝经后及围绝经期高血压患者,补肾法联合降压药能够降低患者的收缩压和舒张压水平、改善更年期症状、改善性激素水平,疗效优于西药组。2.阴阳两虚证是绝经后高血压患者最常见的中医证型,且绝经年限较长的高血压患者的BPV高于绝经年限较短者。3.ICA能够降低雌性去势SHR的血压和心率,上述作用与调节循环和心肌组织RAS 有关。ICA 可以抑制 ACE1-AngⅡ-AT1R 轴,对 ACE2-Ang（1-7）-MasR 轴具有升高的趋势,同时该作用的发挥与抑制ERK1/2通路有关。
熊伟[3]（2021）在《肥大细胞参与右美托咪定心脏保护效应的炎性调控机制研究》文中指出第一部分右美托咪定在体外循环心脏瓣膜置换术中的心脏保护效应:随机对照双盲研究[目的]探讨右美托咪定在体外循环心脏瓣膜置换术中的心脏保护作用。[方法]选取择期体外循环下行主动脉瓣或二尖瓣机械瓣膜置换术的40例成年患者,随机对照双盲分为2组（N=20例/组）,对照组（CON组）给予等体积0.9%氯化钠注射液持续泵注;右美托咪定组（DEX组）在麻醉诱导前10 min内予以右美托咪定1 μg/kg负荷量,然后0.5μg/kg/h持续泵注至术毕。统计两组患者的一般资料。观察注射负荷量药物、切皮、锯开胸骨前后SBP及HR变化情况,注射负荷量药物后高血压、低血压和严重心动过缓发生率,血管活性药物使用情况,以及术后主要心血管不良事件（PMACE）发生率。在术前和术后检测血常规,在术前、停机时、术毕和出ICU时检测患者外周血中cTnI和TPS浓度。采用多元logistic回归分析术后cTnI、TPS和NLR预测PMACE的准确性。[结果]两组患者间一般资料无统计学差异（P>0.05）。注射负荷量药物后,SBP和HR变化率DEX组高于CON组;但切皮和锯开胸骨后,SBP和HR变化率DEX组低于CON组（P<0.05）。DEX组较CON组的高血压和严重心动过缓发生率高,而低血压发生率低（P<0.05）。去氧肾上腺素使用率和多巴胺使用量,DEX组低于CON组;而阿托品使用率,DEX组高于CON组（P<0.05）。DEX组的低心排综合征和恶性心律失常发生率较CON组低（P<0.05）。与CON组比较,DEX组在停机时、术后即刻和出ICU前的外周血中cTnI和TPS的浓度降低（P<0.05）,且 cTnI 和 TPS 呈正相关（R2>0.9）。NEUT、MONO 和 WBC绝对值变化率DEX组高于CON组,而LYMPH绝对值和NLR变化率DEX组低于CON组（P<0.05）。单独使用NLR、TPS和cTnI预测PMACE具有较高准确性（AUC分别为0.831、0.833和0.848）。另外,联合使用NLR、TPS和cTnI构建多元回归模型用于预测PMACE可以提高预测的准确性,其中联合cTnI和NLR,TPS 和 NLR,cTnI、TPS 和 NLR 的 AUC 分别为 0.902、0.892和 0.895。[结论]右美托咪定治疗体外循环下心脏瓣膜置换术患者可抑制切皮和开胸刺激,减少术中血管活性药物使用率和术后心血管不良事件发生率,降低术后cTnI、TPS和NLR,联合cTnI、TPS和NLR在预测PMACE中具有一定准确性。第二部分右美托咪定预处理抑制肥大细胞脱颗粒对抗大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤[目的]探讨右美托咪定预处理抑制肥大细胞脱颗粒对抗大鼠在体心肌缺血/再灌注（Ischemia/reperfusion,I/R）损伤（Myocardial ischemia/reperfusion injury,MIRI）的保护机制。[方法]采用结扎冠状动脉左前降支30min（缺血）和再通120min（再灌注）构建大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤模型,分别予以右美托咪定和肥大细胞促分泌剂C48/80处理。在体预实验分为五组（N=6只/组）,Sham组、MIRI组、Group Ⅰ 组（C48/80 0.1 mg/kg.i.v.）、Group Ⅱ 组（C48/80 0.5mg/kg.i.v.）和 GroupⅢ组（C48/80 1 mg/kg.i.v）。在体正式实验分为五组（N=12只/组）,Sham组、I/R 组、DEX+I/R 组（DEX20 μg/kg.i.v.）、C48/80+I/R 组（C48/800.5 mg/kg.i.v.）和 DEX+C48/80+I/R 组（DEX 20 μg/kg.i.v.+C48/80 0.5 mg/kg.i.v.）。观察术中血流动力学和心律失常,以及术后左心室功能改变,并采用TTC法、ELISA法、透射电镜、HE染色、甲苯胺蓝和TUNEL染色,以及免疫组化染色、QRT-PCR和Western blot进行检测。[结果]结扎冠状动脉左前降支缺血30 min和再灌注120 min成功构建大鼠在体MIRI模型,C48/80在一定范围内（0.1、0.5、1.0mg/kg.i.v.）可以加重I/R损伤,且呈剂量依赖性。与Sham组比较,I/R组术中血流动力学紊乱和心律失常严重程度评分明显升高,术后左心室功能障碍和心肌梗死面积比明显增加,cTnl和TPS含量明显升高;而这些损伤在C48/80+I/R组中明显加重,在DEX+I/R组中明显减轻（P<0.05）。另外,I/R组较Sham组病理组织学评分和肥大细胞脱颗粒比明显升高,心肌纤维波状扭曲、水肿,炎性细胞浸润,左室心肌和冠状动脉超微结构明显损伤,在右美托咪定预处理后有所改善,但C48/80可以加重这种损伤。然而,这些损伤在DEX+C48/80+I/R组中较C48/80+I/R组部分逆转。与Sham组比较,I/R组细胞凋亡率升高,心肌组织中HMGB1、TLR4和NF-κB p65的阳性细胞率、mRNA和蛋白相对表达量明显升高（P<0.05）。与I/R组比较,DEX+I/R组中这些改变被部分逆转,而C48/80+I/R组中加剧了这些改变（P<0.05）。另外,DEX+C48/80+I/R组中较C48/80+I/R组细胞凋亡率和HMGB1、TLR4和NF-κBp65表达水平明显降低（P<0.05）。[结论]右美托咪定预处理可能通过抑制肥大细胞脱颗粒,抑制炎性相关因子级联释放和心肌细胞凋亡,从而对抗大鼠在体I/R损伤。第三部分右美托咪定预处理抑制心脏常驻肥大细胞脱颗粒减轻大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤[目的]探讨右美托咪定预处理抑制心脏常驻肥大细胞脱颗粒减轻大鼠离体MIRI的保护机制。[方法]采用大鼠离体心脏Langendorff灌流模型停止灌注30 min（全心缺血）和复灌60 min（再灌注）构建大鼠心脏离体MIRI模型。离体预实验分为五组（N=6 只/组）,Control 组、MIRI 组、GroupⅠ 组[（C48/80 1 μg/mL×5 min+KHB × 5 min）× 4]、Group Ⅱ 组（C48/80 1 μg/mL × 5 min+KHB × 5 min）和 GroupⅢ组（20 μg C48/80）。离体正式实验分为五组（N=12只/组）,Control组、I/R组、DEX+I/R 组（10 nM DEX × 30 min）、C48/80+I/R 组（C48/80 1 μg/mL × 5 min）和 DEX+C48/80+I/R 组（10 nM DEX × 30 min+C48/80 1μg/mL × 5 min）。观察血流动力学、心律失常和心肌水含量改变,并采用TTC法、ELISA法、透射电镜、HE染色、甲苯胺蓝和TUNEL染色,以及免疫组化染色、QRT-PCR和Western blot进行检测。[结果]大鼠离体心脏Langendorff灌流模型停止灌注30 min（全心缺血）和复灌60 min（再灌注）成功构建大鼠离体MIRI模型。离体预实验中Group I组中反复的C48/80干预洗脱,可改善MIRI引起的血流动力学紊乱、心律失常、心肌水肿和梗死,而Group Ⅱ和Group Ⅲ经短时程C48/80干预激发肥大细胞脱颗粒,可加重I/R损伤（P<0.05）。离体正式实验中,与Control组比较,I/R组血流动力学紊乱、心律失常、心肌水肿和梗死升高,cTnI和TPS含量升高（P<0.05）。I/R组较Control组病理组织学评分和肥大细胞脱颗粒比升高,心肌纤维波状扭曲、水肿,炎性细胞浸润,左室心肌和冠状动脉超微结构明显损伤。与Control组比较,I/R组细胞凋亡率升高,心肌组织中HMGB1、TLR4和NF-κBp65的阳性细胞率、mRNA和蛋白相对表达量升高（P<0.05）。上述改变在右美托咪定预处理后有所改善,但C48/80可以加重这种损伤;同时,DEX+C48/80+I/R组较C48/80+I/R组上述改变被部分逆转（P<0.05）。[结论]右美托咪定预处理可能通过抑制心脏常驻肥大细胞脱颗粒,抑制炎性相关因子级联释放和心肌细胞凋亡,从而对抗大鼠离体I/R损伤。第四部分 右美托咪定预处理抑制肥大细胞脱颗粒介导的心肌细胞损伤[目的]探讨右美托咪定预处理抑制肥大细胞脱颗粒介导的心肌细胞损伤的保护机制。[方法]构建大鼠心肌细胞H9C2（2-1）和大鼠肥大细胞RBL-2H3共培养体系,分别予以右美托咪定10 nM和肥大细胞促分泌剂C48/80 10 μg/mL预处理。实验分为三组（N=6孔/组）:S组（不予以任何药物处理）、C组（C48/8010μg/mL 干预 30 min）和 DC 组（10 nM DEX 预处理 60 min,然后 C48/80 10μg/mL干预30min）。倒置显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞活性,流式细胞仪及TUNEL染色检测细胞凋亡率,ELISA法检测培养上清液中心肌损伤标志物cTnI和肥大细胞标志物TPS含量,细胞免疫组织化学染色、QRT-PCR和Western blot检测心肌细胞中HMGB1、TLR4和NF-κBp65的阳性细胞率、mRNA和蛋白的相对表达量。[结果]C组较S组的H9C2（2-1）和RBL-2H3细胞活性明显下降,细胞凋亡率明显升高,cTnI和TPS释放明显升高,而右美托咪定预处理后DC组可部分抑制（P<0.05）。另外,C组较S组的心肌细胞中HMGB1、TLR4和NF-κB p65的阳性细胞率、mRNA和蛋白相对表达量明显增加,而右美托咪定预处理后DC组中降低（P<0.05）。[结论]右美托咪定预处理可能通过抑制肥大细胞脱颗粒以及炎性相关信号通路HMGB1/TLR4/NF-κB,从而减轻肥大细胞脱颗粒介导的心肌细胞损伤。
王惠[4]（2021）在《基于TXNIP/NLRP3途径研究益气活血药对心梗后内质网应激诱发细胞焦亡的影响》文中研究说明研究背景:受饮食习惯、生活方式和社会压力等因素影响,心肌缺血和心肌梗死及其导致的心衰仍严重影响居民的身体健康和生活质量,其中涉及的中青年患者也在不断增多。研究发现,当心肌受损后可导致内质网、线粒体功能障碍,触发包括细胞焦亡在内的多种细胞死亡途径,导致心脏功能受损。临床使用益气活血中药治疗,可有效改善患者症状和心脏功能。而益气活血药主要包括黄芪50g,生晒参10g,当归15g,川芎15g,三七6g,是以中医气血理论（气虚血瘀、气滞血瘀）为理论基础而创立,为导师临床治疗心肌缺血缺氧、心肌损伤以及心肌梗死后各种遗留症状的经验效方,其作用主要是有益心气,促进血液运行和疏通脉络,本课题组在前期研究中已经证明益气活血药能够改善心肌梗死患者疼痛、胸闷、气短等的症状,明显改善心脏射血功能和心脏形态,可以改善大鼠心肌梗死后炎症反应对心肌的损伤,减轻血清中炎症细胞因子分泌水平。研究目的和意义:探究心肌梗死后内质网应激与细胞焦亡的相互作用和调控机制,详细研究心肌梗死的病理生理过程,揭示益气活血药防治心肌缺血、心肌梗死的作用机制和靶点,对于心梗的临床治疗和新药的研发有重要理论意义和实际应用价值。研究方法:本课题内容分为动物实验和细胞实验两部分。动物实验:购买雄性SD大鼠（200±20g）,适应性喂养三天后,结扎左冠状动脉前降支构建急性心梗动物模型。术后根据心电图情况,选取符合要求（5个及5个以上病理Q波）的成模大鼠并随机分为4组:模型组（Model,M）,益气活血组（YQHX,Y）,培哚普利组（Perindopril,P）和只穿线不结扎的假手术组（Sham,S）,于术后第二天给予相应药物和蒸馏水灌胃。前期研究结果表明益气活血药改善心肌缺血、减轻心肌梗死的作用以益气药和活血药2:1时作用最为显着,且服用28天疗效更佳显着。28天时间点还是心梗后心衰的时间窗,模拟临床急性心梗导致心衰的病理情况。因此本实验观察灌胃28天后,各组大鼠的心脏超声情况,HE染色观察各组大鼠心肌细胞状态,评价各组大鼠心脏功能;透射电镜观察心肌组织超微结构,免疫荧光染色观察TXNIP、GSDMD分布及表达情况;免疫蛋白印记法观察各组大鼠梗死边缘区心肌组织中GRP78、（p）IRE1a、（p）PERK、TXNIP、NLRP3、GSDMD、IL-1β、Caspase-1、cleaved Caspase-1/11蛋白表达情况,揭示心肌梗死后梗死边缘区组织内质网应激和细胞焦亡变化情况及益气活血药的调节作用。细胞实验:采用H9c2心肌细胞系复制缺糖缺氧模型,根据课题组前期研究结果,并考虑益气活血药冻干粉的存放时间,选用冻干粉200μg/ml、300μg/ml和400μg/ml浓度进行观察。将心肌细胞分为:对照组（C）;缺糖缺氧模型组（M）;200μg/ml益气活血药组（Y2）;30μg/ml益气活血药组（Y3）;400μg/ml益气活血药组（Y4）。根据课题组的前期研究成果,选用造模12h时的时间点观察益气活血药对中轻度心肌细胞损伤的保护作用。采用CCK-8试剂盒观察各组心肌细胞的活力,测定各组细胞中LDH和ROS水平,筛选出益气活血药调节氧化应激水平的最佳浓度为300μg/ml。为进一步观察内质网应激和细胞焦亡间的关系,使用内质网应激抑制剂4-PBA,并将心肌细胞以40×104密度随机分为5组:对照组（C）,缺糖缺氧模型组（M）,益气活血药组（Y）,4-PBA抑制剂组（4-PBA）,益气活血药组+4-PBA抑制剂组（Y+4-PBA）。通过Hoechst 33342/PI双染检测各组心肌细胞细胞焦亡率,免疫蛋白印记法观察各组心肌组织中GRP78、（p）IRE1a、（p）PERK、TXNIP、NLRP3、GSDMD、IL-1β、Caspase-1、cleaved Caspase-1/11蛋白表达情况。实验结果:1.超声结果评价各组大鼠左室心功能情况。各组大鼠相应干预28天后,与假手术组相比,M组大鼠的左室射血分数（EF）和左室短轴率（FS）显着降低（p<0.01）,LVAWd、LVIDd、LVIDs 也都显着升高（p<0.01）,LVPWs 也有升高（p<0.05）,而、LVAWs降低（p<0.01）。益气活血药干预后可显着改善各组大鼠心功能,促进各组超声相应指标向正常范围恢复。2.各组大鼠梗死边缘区组织HE染色的心肌细胞情况。可见S组心肌细胞排列整齐,结构完整,细胞核位于细胞中央,无炎性细胞浸润;M组心肌细胞形态受损,细胞肿胀,细胞核散乱,形态位置都发生变化,心肌纤维断裂,结构破坏,胞浆着色不均,排列紊乱,细胞间隙显着增大,有大量炎性细胞浸润;Y组和P组边缘区组织可见心肌细胞肿胀,但整体结构完整,炎性细胞较M组减少,可见少量心肌纤维断裂,心肌细胞间隙略有增宽。3.透射电镜观察各组超微结构的变化。S组大鼠心肌Z线、M线清晰,粗细肌丝清晰排列整齐,线粒体结构完整,双层膜清晰可见,线粒体内基质颗粒和线粒体嵴排列清楚,内质网结构正常。心梗28天后,M组心肌细胞内超微结构紊乱,线粒体肿胀破裂,线粒体嵴模糊甚至消失,细肌丝断裂,粗肌丝堆积,肌原纤维断裂,内质网肿胀,多处可见空泡样结构。而药物干预组粗细肌丝融合分界不清,内质网、线粒体肿胀,线粒体嵴模糊,结构尚完整。5.免疫组化染色TXNIP、GSDMD的情况。TXNIP在假手术组少有表达,模型组显着增加,阳性细胞率大幅度提高。益气活血药和培哚普利组可减少TXNIP的阳性率表达。GSDMD在模型组广泛表达,强阳性染色细胞率较假手术组显着增多,用药组干预后GSDMD的蛋白阳性率可明显降低6.各组大鼠梗死边缘区组织内质网应激和细胞焦亡相关蛋白表达情况。蛋白免疫印迹法结果显示:与 S 组相比,M 组 GRP78、（p）IRE1a、（p）PERK、TXNIP、NLRP3、GSDMD、IL-1β、Caspase-1、cleaved Caspase-1/11 蛋白表达水平都显着增高（p<0.01）,而益气活血药和培哚普利可不同程度的降低各组蛋白表达,发挥相应调节作用（p<0.05）。7.益气活血药对缺糖缺氧H9c2心肌细胞的保护作用。与C组相比,缺糖缺氧12h后心肌细胞活力显着降低（p<0.01）,而Y2、Y3、Y4可不同程度的提高心肌细胞活力,保护其免受或少受缺糖缺氧的损伤,其中Y3的效果最佳。又继续探索了不同浓度益气活血药对各组细胞LDH和ROS的影响,结果显示益气活血药可降低缺糖缺氧心肌细胞LDH、ROS水平,其中Y3显示出更好的效果,故在本课题接下来的实验中,选用300μg/ml的益气活血药浓度进行机制探究。我们继续观察了 C、M、Y（300μg/ml）、4-PBA和Y（300μg/ml）+4-PBA五组心肌细胞的细胞存活率和LDH表达水平。结果显示,与C组相比,M组细胞存活率显着降低（p<0.01）,平均降至40%左右。在药物和抑制剂的干预下细胞存活率都明显增加（p<0.05）。虽然Y、4-PBA和Y+4-PBA三个组的细胞存活率程增加趋势,但三者没有统计学差异（p>0.05）。模型组细胞上清中LDH量显着增高（p<0.01）,平均可达400U/L左右。Y、4-PBA和Y+4-PBA干预后都可明显减少LDH的释放（p<0.01）,Y组与Y+4-PBA组相比,差异具有统计学差异（p<0.01）,Y+4-PBA组LDH的减少程度更佳显着。8.心肌细胞细胞焦亡率的情况。采用Hoechst 33342/PI双染后可见C组细胞淡蓝染,细胞密度高,细胞大小正常,基本没有红染细胞。M组细胞核蓝染高亮,细胞密度降低,细胞体积增大,大量红染细胞。而使用抑制剂和中药干预后,都可以降低焦亡细胞比率,细胞密度也较M组增加。9.益气活血药对缺糖缺氧心肌细胞内质网应激和细胞焦亡相关蛋白的影响。与S组相比,M 组 GRP78、（p）IRE1a、（p）PERK、TXNIP、NLRP3、GSDMD、IL-1β、Caspase-1、cleaved Caspase-1/11蛋白表达水平都显着增高（p<0.01）,益气活血药和抑制剂干预都可降低相关指标的表达,而抑制剂作用更佳显着。当益气活血药与抑制剂联用时,可进一步降低其表达水平（p<001）。研究结论:1.益气活血药可通过改善缺血心肌细胞超微结构损伤而提高心梗后心功能,改善心梗后的收缩功能,减小梗死面积。2.益气活血药通过调节内质网应激和细胞焦亡相关蛋白,减少心肌细胞死亡,挽救缺血心肌。3.内质网应激抑制剂4-PBA可显着抑制心肌细胞焦亡相关指标表达,表明细胞焦亡可以由内质网应激途径触发并加重细胞焦亡的损伤作用,该作用可能与TXNIP/NLRP3途径有关。而益气活血药可通过抑制内质网应激TXNIP/NLRP3途径,缓解内质网应激抑制细胞焦亡,减轻心肌细胞损伤,且从研究结果显示,益气活血药的作用机制与IRE1 α诱导的相关途径密切相关,这将是进一步研究该课题的重点方向。4.益气活血药减轻内质网损伤,改善了“气虚”的状态,提高了受损心脏功能运行的动力,为从现代科学角度阐释中医“气血”理论提供了研究基础。
胡欢[5]（2021）在《Adropin在高血压心肌重构中的作用及机制研究》文中研究指明研究背景:高血压心肌重构主要的特征表现为左心室肥厚和间质纤维化,是心力衰竭发生的主要原因之一。在高血压心肌重构进程中,压力负荷、神经体液及细胞因子等各种刺激因素引起心肌组织中氧化应激增强和炎症反应的激活,进一步导致心肌细胞肥大、心肌成纤维细胞的活化和细胞外基质成分的合成。因此,抑制氧化应激及炎症是减轻高血压心肌重构的重要途径之一。Adropin是由能量稳态相关基因（Enho）编码的一种肽类激素,早期研究发现其在维持能量代谢平衡和改善胰岛素抵抗过程中发挥重要作用。近期越来越多的研究表明Adropin同样可以通过抗氧化应激和抗炎作用参与多种疾病的发生与发展过程,然而其在高血压心肌重构中的作用及调节机制并不明确。本研究团队前期研究发现Adropin可能在肥胖青少年患者的血管内皮功能中发挥保护作用。基于Adropin在抗氧化应激、抗炎、维持能量代谢平衡、改善胰岛素抵抗及保护血管内皮功能等诸多病理生理过程中发挥重要作用,本研究团队推测Adropin可能参与了高血压心肌重构进程。本研究从临床、动物及细胞水平探究了Adropin在高血压心肌重构中的作用及其相关机制。第一部分高血压左室肥厚患者外周血Adropin水平的变化及意义目的:探讨高血压左室肥厚患者外周血Adropin水平的变化及意义。方法:本研究纳入于南昌大学第二附属医院心血管内科就诊的高血压患者86例以及于南昌大学第二附属医院体检科就诊的健康对照者12例,收集入组人群一般资料、临床指标结果、心脏彩超数据等。采用ELISA法检测入组人群血清Adropin水平,分析其在高血压患者和健康对照人群中的变化,进一步探究Adropin在高血压伴左室肥厚患者和高血压不伴左室肥厚对照人群血清中的变化,采用多元线性回归分析Adropin与左室肥厚标志物左室质量指数的关系,采用ROC曲线分析检测Adropin在高血压LVH中可能的诊断价值。结果:1.与健康对照人群相比,高血压患者血清Adropin表达水平显着降低,健康对照组Adropin水平:9.06±2.80 pg/mL;高血压组Adropin水平:4.64±0.64 pg/mL。2.与高血压不伴左室肥厚对照人群相比,高血压伴左室肥厚人群年龄更高,Adropin表达水平显着降低,其中高血压不伴左室肥厚对照组Adropin水平:4.79±0.65 pg/mL;高血压伴左室肥厚组:4.15±0.21 pg/mL。3.运用多元线性回归分析发现Adropin与左心室质量指数（LVMI）呈负相关性。当调整年龄、性别和身体质量指数（Body Mass Index,BMI）混杂因素后,血清Adropin水平每增加一个单位,LVMI下降7.31个单位:β（95%CI）=-7.31（-13.95,-0.67）,P=0.034。进一步将Adropin水平按三分位处理,与T1组（<4.36pg/mL）人群相比,T2（4.36 to<4.61 pg/mL）组和T3（≥4.61 pg/mL）组人群中的LVMI水平均显着降低[T2:β（95%CI）=-18.82（-28.21,-9.42）,P<0.001;T3:β（95%CI）=-20.76（-30.36,-11.15）,P<0.001]。进一步调整年龄、性别、BMI、收缩压、舒张压、总胆固醇、血糖、谷草转氨酶及谷丙转氨酶混杂因素后,血清Adropin水平每增加一个单位,LVMI下降7.52个单位:β（95%CI）=-7.52（-14.32,-0.71）,P=0.034。进一步将Adropin水平按三分位处理,与T1组（<4.36 pg/mL）人群相比,T2（4.36 to<4.61 pg/mL）组和T3（≥4.61 pg/mL）组人群中的LVMI水平均显着降低[T2:β（95%CI）=-17.59（-27.53,-7.65）,P=0.001;T3:β（95%CI）=-20.72（-30.41,-11.04）,P<0.001]。4.ROC曲线分析Adropin水平在高血压左室肥厚中的诊断价值:血清Adropin的曲线下面积为0.936,在4.265 pg/mL临界点处,特异性为89.5%,敏感性为91%,且具有统计学意义。结论:高血压患者血清Adropin水平低于健康对照者,高血压伴左室肥厚患者血清Adropin低于高血压不伴左室肥厚对照者,Adropin与LVMI呈负相关,且其具有作为诊断高血压左室肥厚标志物的可能性。第二部分重组Adropin对自发性高血压大鼠心肌重构的影响目的:探究自发性高血压大鼠血清Adropin水平的变化并观察重组Adropin治疗12周后对自发性高血压大鼠心肌重构的作用及其相关机制。方法:1.纳入6只16周龄的雄性自发性高血压大鼠（Spontaneously Hypertensive Rat,Rat）为实验组即高血压组（SHR）,6只同周龄的雄性Wistar-Kyoto大鼠为对照组即正常血压组（WKY）。使用无创血压仪测量大鼠血压,超声心动仪检测心脏功能指标,HE染色观察心肌组织病理变化,WGA染色观察心肌细胞大小变化,Masson染色观察心肌组织纤维化水平,RT-PCR法检测心肌组织中肥厚标志物ANP、BNP、β-MHC及纤维化标志物Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA表达水平,验证自发性高血压大鼠心肌重构模型。通过ELISA法,免疫组织化学法,RT-PCR法及Western Blot法检测自发性高血压大鼠心脏组织中Adropin的表达变化。2.我们构建并合成具有Adropin蛋白生物学活性的重组Adropin34-76多肽,纳入12只4周龄的雄性SHR及6只雄性WKY作为对照组。进一步将SHR分为2组:SHR组（n=6）和SHR接受Adropin处理组（n=6）。Adropin处理组腹腔注射Adropin（2.1μg/kg/d）,SHR组注射同等剂量的赋形剂。处理过程中每两周检测一次血压,处理12周后完成各项反映心肌重构的指标检测。通过ELISA法及Western Blot法检测大鼠血清及心肌组织中炎症因子IL-6及TNF-α的表达水平。通过DHE染色、组织MDA和SOD含量检测法进一步探究大鼠心肌组织中的氧化应激水平。结果:1.相比16周WKY组,16周SHR组大鼠SBP,DBP,心率及心脏重量及心指数（HW/BW）显着增高。彩超分析发现,相比WKY组,SHR组大鼠舒张末期室间隔厚度（IVS;d）,舒张末期左室后壁厚度（LVPW;d）显着增加,舒张末期左室内径（LVID;d）显着降低,而二者左心室射血分数（EF）和缩短分数（FS）无明显差异。组织病理染色发现,相比WKY组,HE染色提示SHR组大鼠心肌组织出现排列紊乱甚至断裂现象,WGA染色提示SHR组大鼠心肌细胞相对面积更大,Masson染色提示SHR组大鼠心肌组织纤维化水平显着增加,RT-PCR法提示SHR组大鼠心肌组织ANP、BNP、β-MHC、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA表达水平更高。ELISA,免疫组织化学染色及RT-PCR检测提示SHR大鼠血清及心脏组织中Adropin表达水平显着降低。2.4周龄的大鼠分为三组:WKY组;SHR组;SHR+Adropin组。Adropin处理过程中,相比WKY组,SHR组大鼠的SBP和DBP水平随着年龄的增加显着升高,而Adropin持续处理12周能显着延缓SHR的SBP和DBP的水平增加进展。彩超分析发现,三组在4周龄基线水平时的IVS;d、LVPW;d、LVID;d、EF及FS水平无明显统计学差异。而在Adropin处理12周后的16周龄时,相比WKY组,SHR组的IVS;d,LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平显着下降,而SHR+Adropin组的IVS;d,LVPW;d水平较SHR组显着降低,LVID;d水平显着增高。三组的EF和FS水平无明显统计学差异。HE、WGA及Masson染色发现,相比WKY组,SHR组心肌细胞相对面积显着增大,心肌组织纤维化水平显着增高,而Adropin干预能显着降低SHR组大鼠心肌肥大和纤维化水平。RT-PCR法提示,相比WKY组,SHR组心肌组织ANP、BNP、β-MHC、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA表达水平更高,而Adropin干预能显着降低其水平。进一步通过ELISA和Western Blot分析发现,相比WKY组,SHR组血清及心肌组织炎症因子IL-6和TNF-α的表达水平显着增高,而Adropin干预能显着降低二者的表达水平。心肌组织DHE染色、MDA和SOD含量检测提示,相比WKY组,SHR组大鼠心肌组织活性氧水平显着增加,MDA水平显着增高,SOD水平显着下降,而Adropin处理能显着降低心肌组织活性氧水平,降低MDA含量,提高SOD的表达水平。结论:16周龄的自发性高血压大鼠伴有心肌重构,Adropin表达水平的下降。重组Adropin治疗12周后显着减轻自发性高血压大鼠的心肌重构水平,降低心脏组织炎症水平及改善氧化应激。第三部分Adropin在小鼠病理性心肌重构中的作用及机制目的:探究高血压心肌重构常见刺激因素压力负荷增加和血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠病理性心肌重构过程中Adropin水平的变化,观察重组Adropin腹腔注射对病理性心肌重构的作用,观察Adropin敲除对病理性心肌重构的作用及其相关机制。方法:1.纳入28只8周龄的C57BL/6小鼠行主动脉弓缩窄（Transverse Aortic Constriction）手术及皮下埋植入式胶囊渗透压泵持续灌注血管紧张素Ⅱ构建小鼠病理性心肌重构模型。小鼠分为4组:假手术Sham组（n=8）,TAC组（n=8）;胶囊渗透压泵持续灌注生理盐水（Normal Saline,NS）组（n=6）,胶囊渗透压泵持续灌注血管紧张素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ）组（n=6）。超声心动仪检测心脏功能指标,HE染色观察心肌组织病理变化,WGA染色观察心肌细胞大小变化,Masson染色观察心肌组织纤维化水平,验证小鼠病理性心肌重构模型。通过ELISA法,RT-PCR法及Western Blot法检测小鼠病理性心肌重构中Adropin的表达变化。2.构建并合成具有Adropin蛋白生物学活性的重组Adropin34-76多肽,纳入48只8周龄的C57BL/6小鼠。进一步将小鼠分为8组:假手术Sham给予赋形剂Vehicle处理组（Vehicle+Sham,n=6）,假手术Sham给予Adropin处理组（Vehicle+Adropin,n=6）,TAC给予赋形剂处理组（Vehicle+TAC,n=6）,TAC给予Adropin处理组（Adropin+TAC,n=6）;含生理盐水（NS）泵植入术给予赋形剂Vehicle处理组（Vehicle+NS,n=6）,含生理盐水（NS）泵植入术给予Adropin处理组（Adropin+NS,n=6）,含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入术给予赋形剂Vehicle处理组（Vehicle+Ang Ⅱ,n=6）,含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入术给予Adropin处理组（Adropin+Ang Ⅱ,n=6）。Adropin处理组腹腔注射Adropin（450 nmol/kg/d）2周,Vechile组注射同等剂量的赋形剂。Ang Ⅱ组皮下灌注Ang Ⅱ（1500 ng/kg/d）2周,NS组皮下灌注等剂量的正常生理盐水。处理2周后完成各项反映心肌重构的指标检测,通过DHE染色、组织MDA含量和SOD蛋白表达水平检测法探究小鼠心肌组织中的氧化应激水平,并进一步研究Adropin治疗对Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构过程中Nrf2/HO-1信号通路的影响。3.构建Adropin基因敲除小鼠,在血管紧张素Ⅱ模型中进一步进行功能缺失性研究。纳入10只8-10周龄Adropin基因敲除小鼠和10只8-10周龄同窝出生的野生型小鼠。小鼠分为4组:含生理盐水（NS）泵植入野生型小鼠组（WT+NS,n=5）,含生理盐水（NS）泵植入Adropin基因敲除小鼠组(Adropin-/-+NS,n=5),含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入野生型小鼠组（WT+Ang Ⅱ,n=5）,含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）泵植入Adropin基因敲除小鼠组(Adropin-/-+Ang Ⅱ,n=5)。处理2周后完成各项反映心肌重构的指标检测,通过DHE染色、组织MDA含量和SOD蛋白表达水平检测法探究各组小鼠心肌组织中的氧化应激水平,并进一步研究Adropin敲除对Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构过程中Nrf2表达水平的影响。4.构建腺相关病毒AAV9-Nrf2-GFP及空载对照病毒（Vector）,经尾静脉注射特异性上调小鼠心肌组织Nrf2的表达,在Adropin基因缺失加重血管紧张素Ⅱ刺激引起的心肌重构实验中进一步进行功能回复性研究。纳入10只8-10周龄Adropin基因敲除小鼠,小鼠分为2组:尾静脉注射Vector的4周后皮下植入含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）微量泵组（Vector+Ang Ⅱ,n=5）;尾静脉注射AAV9-Nrf2-GFP的4周后皮下植入含血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）微量泵组（AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ,n=5）。Ang Ⅱ处理2周后完成完成各项反映心肌重构的指标检测。通过DHE染色、组织MDA含量和SOD蛋白表达水平检测法探究小鼠心肌组织中的氧化应激水平,并进一步研究凋亡相关分子Cleaved Caspase3的蛋白表达情况。结果:1.彩超结果发现,相比Sham组,TAC组的IVS;d和LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平下降,而EF及FS二者无明显差异;相比NS组,Ang Ⅱ组的IVS;d、LVPW;d、EF及FS水平显着增高,LVID;d水平下降。组织病理染色发现,相比Sham组,HE染色提示TAC组小鼠心肌组织出现排列明星紊乱以及断裂现象,WGA染色提示TAC组小鼠心肌细胞相对面积更大,Masson染色提示TAC组小鼠心肌组织纤维化水平显着增加。相比NS组,Ang Ⅱ组小鼠心脏出现相似的组织病理学改变。ELISA,RT-PCR及West检测提示TAC小鼠血清及心脏组织中Adropin表达水平较Sham组显着降低,而Ang Ⅱ小鼠血清及心脏组织中Adropin表达水平较NS组显着降低。2.在TAC模型实验中,彩超结果结果,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平下降,而Adropin+TAC组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平较Vehicle+TAC显着下降,LVID;d水平明显上升。HE、WGA及Masson染色发现,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组心肌细胞相对面积显着增大,心肌组织纤维化水平显着增高,而Adropin干预能显着降低TAC组小鼠心肌肥大和纤维化水平。Western Blot法进一步分析发现,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组小鼠心肌组织肥厚标志物ANP及纤维化标志物Collagen Ⅰ蛋白表达水平明显升高,而Adropin治疗能显着降低二者水平。心肌组织DHE染色、MDA含量和SOD蛋白表达水平检测提示,相比Vehicle+Sham组,Vehicle+TAC组大鼠心肌组织活性氧水平显着增加,MDA水平显着增高,SOD蛋白表达水平显着下降,而Adropin干预能显着降低心肌组织活性氧水平,降低MDA含量,提高SOD的表达水平。在Ang Ⅱ模型实验中,可以发现类似的Adropin治疗逆转病理性心肌重构,改善氧化应激的现象。进一步通过Western Blot研究Adropin治疗对Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构过程中Nrf2/HO-1信号通路的影响发现,相比Vehicle+NS组,Vehicle+Ang Ⅱ组小鼠心肌组织中的胞核Nrf2和HO-1的表达水平显着升高,总NQO-1表达水平显着下降,而Adropin治疗组即Adropin+Ang Ⅱ小鼠心肌组织中的胞核Nrf2和HO-1的表达水平相比Vehicle+Ang Ⅱ组进一步升高,胞浆NQO-1的表达水平上升。Adropin干预同样能减轻Ang Ⅱ刺激引起的心肌组织凋亡相关分子Cleaved Caspase3的蛋白表达水平。3.构建Adropin基因敲除小鼠,验证Adropin缺失对血管紧张素Ⅱ刺激引起的心肌重构模型的影响。Western Blot研究发现,相比野生型小鼠,Adropin基因（Enho）敲除小鼠心肌组织中无Adropin蛋白的表达,证明Adropin基因敲除小鼠模型的成功构建。彩超分析发现,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平显着增高,LVID;d水平下降,而Adropin-/-+Ang Ⅱ组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平相比WT+Ang Ⅱ组进一步升高,LVID;d水平进一步下降,二者具有统计学意义。HE、WGA及Masson染色发现,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组心肌细胞相对面积显着增大,心肌组织纤维化水平显着增高,而Adropin敲除能进一步增加Ang Ⅱ组小鼠心肌肥大和纤维化水平。Western Blot法进一步分析发现,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组小鼠心肌组织肥厚标志物ANP及纤维化标志物Collagen I蛋白表达水平明显升高,而Adropin敲除能进一步升高二者水平,且二者具有统计学意义。心肌组织DHE染色、MDA含量和SOD蛋白表达水平检测提示,相比WT+NS组,WT+Ang Ⅱ组大鼠心肌组织活性氧水平显着增加,MDA水平显着增高,SOD蛋白表达水平显着下降,而Adropin敲除能进一步增加心肌组织活性氧水平,增加MDA含量,降低SOD的蛋白表达水平。RT-PCR和Western Blot法分析发现,相比WT+Ang Ⅱ,Adropin-/-+Ang Ⅱ组小鼠心肌组织中Nrf2的mRNA和蛋白表达水平显着下降,进一步提示Adropin可能通过Nrf2信号通路参与Ang Ⅱ刺激引起的病理性心肌重构。4.构建腺相关病毒AAV9-Nrf2-GFP,验证心肌组织Nrf2过表达在Adropin基因缺失加重血管紧张素Ⅱ刺激引起的心肌重构中的回复性作用。冰冻切片荧光显像、RT-PCR和Western Blot分析发现,相比尾静脉注射NS组,尾静脉注射AAV9-Nrf2-GFP及Vectord的Adropin敲除小鼠心脏组织出现荧光蛋白表达。相比尾静脉注射Vectro组,尾静脉注射AAV9-Nrf2-GFP组小鼠心肌组织Nrf2的mRNA和蛋白表达水平显着增高,证明了AAV9-Nrf2-GFP具有上调Adropin-/-小鼠心肌组织中Nrf2表达水平的能力。心脏彩超分析发现,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组小鼠的IVS;d和LVPW;d水平显着下降,LVID;d水平升高,二者具有统计学意义。HE、WGA及Masson染色发现,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组心肌细胞相对面积显着下降,心肌组织纤维化水平显着降低。RT-PCR分析发现,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组心肌组织肥厚标志物ANP、BNP、β-MHC及纤维化标志物Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CTGF的mRNA水平显着降低。心肌组织DHE染色、MDA含量和SOD蛋白表达水平检测提示,相比Vector+Ang Ⅱ组,AAV9.Nrf2+Ang Ⅱ组心肌组织ROS水平和MDA含量明显降低,而SOD水平明显升高。Nrf2过表达干预同样能减轻Ang Ⅱ刺激Adropin基因敲除小鼠引起的心肌组织凋亡相关分子Cleaved Caspase3的蛋白表达水平。结论:Adropin处理可以延缓压力负荷及血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠心肌病理性重构,Adropin敲除可以加重血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠心肌病理性重构,Nrf2/HO-1信号通路可能在其中发挥作用。第四部分Adropin在Ang Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用及其机制目的:细胞水平探究Adropin是否参与了Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成及相关机制。方法:1.探究血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）处理心肌成纤维细胞对Adropin表达水平的影响,分为四组:Control组,Ang Ⅱ 0.1μM组,Ang Ⅱ 1μM组和Ang Ⅱ 2μM组,处理时间为24小时。采用RT-PCR和Western Blot法检测Adropin的mRNA及蛋白表达水平变化。采用外源添加重组Adropin及WB的方法观察其对Ang Ⅱ刺激CFs细胞Adropin蛋白表达变化的影响。2.采用外源添加重组Adropin的方法,在Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成中进行功能型实验,分为四组:Vehicle组,Adropin组,Vehicle+Ang Ⅱ组及Adropin+Ang Ⅱ组。其中,采用噻唑蓝（MTT）法检测心肌成纤维细胞的增殖;采用Western Blot检测心肌纤维化标志分子Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ及CTGF指标的表达。3.探究Adropin对Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成进程中的氧化应激指标ROS、MDA及SOD水平的影响,Western Blot法研究外源添加重组Adropin对Nrf2/HO-1信号通路的影响。Nrf2的DNA结合活性实验分析Adropin处理对血管紧张素Ⅱ刺激心肌成纤维细胞过程中细胞内Nrf2的DNA结合活性的影响。结果:1.RT-PCR和Western Blot实验提示,Adropin的mRNA及蛋白的表达水平随着Ang Ⅱ浓度增高下降,外源添加重组Adropin处理能提高处于Ang Ⅱ刺激下的纤维细胞中的Adropin水平。2.MTT检测发现,相比对照Vehicle组,血管紧张素Ⅱ刺激可引起心肌成纤维细胞增殖水平的增加,而Adropin处理能显着降低血管紧张素Ⅱ刺激引起的增殖水平增加。Western Blot分析提示,相比Vehicle组,血管紧张素Ⅱ刺激引起心肌成纤维细胞中的Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ和CTGF蛋白表达水平增高,而Adropin处理能显着降低三者的水平。3.细胞氧化应激水平检测发现,相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞内活性水平和MDA水显着增高,而Ang Ⅱ+Adropin组活性氧及MDA水平较Ang Ⅱ组显着下降。相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞中SOD水平显着降低,而Ang Ⅱ+Adropin组SOD水平较Ang Ⅱ组显着上升。进一步分析Adropin干预对心肌成纤维细胞在Ang Ⅱ刺激下的Nrf2/HO-1信号通路的影响发现,相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞胞核Nrf2和HO-1蛋白表达水平显着增高,Adropin处理进一步增加了胞核Nrf2和HO-1的蛋白表达。相比Vehicle组,Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞胞总的Nrf2蛋白表达水平增高,NQO-1表达水平下降,而Adropin处理后进一步提高总的Nrf2和NQO-1蛋白的表达。此外,Nrf2的DNA结合活性实验分析发现,相比vehicle组,Ang Ⅱ刺激引起Nrf2的转录活性增加,Adropin处理能进一步显着增加Nrf2的转录活性。结论:Adropin处理可能通过增强Nrf2/HO-1信号通路提高细胞抗氧化能力,减轻细胞活性氧水平从而抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原合成。
杨敏[6]（2020）在《五味子醇甲对心肌肥大损伤的保护作用研究》文中进行了进一步梳理为明确五味子醇甲对动物心肌肥大损伤的保护作用,本论文通过五味子醇甲预处理大鼠心肌细胞、灌胃试验动物大鼠和靶动物犬后,开展了体内外心肌肥大损伤的人工模型试验研究:五味子醇甲对去甲肾上腺素诱导的心肌细胞肥大损伤的保护试验。体外培养大鼠H9C2心肌细胞,5μg/mL卡托普利阳性对照组,5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的低中高五味子醇甲药物组,干预48 h,分别加入10-6 mol/L去甲肾上腺素48 h成功诱导心肌肥大模型。观察细胞形态、检测心肌细胞表面积与蛋白/DNA比率、测定BNP、IL-6、TNF-α、IL-10等变化;试验结果表明,五味子醇甲中剂量组可显着降低肥大细胞表面积、蛋白/DNA比率与BNP、IL-6、TNF-α的含量（P<0.05）,升高IL-10含量（P<0.05）,提高心肌细胞存活率（P<0.05）,降低细胞凋亡率（P<0.05）,升高了线粒体膜电位,下调BAX表达,上调Bcl-2蛋白的表达,有效缓解心肌肥大。五味子醇甲对盐酸阿霉素诱导的心肌肥大损伤的保护作用试验。预先灌胃SD雄性大鼠,10mg/kg/d卡托普利阳性对照组,9 mg/kg/d、18 mg/kg/d、36 mg/kg/d的低中高五味子醇甲药物组,空白对照组灌胃等体积的生理盐水,共计21 d后,分别按大鼠体重腹腔注射2 mL/kg盐酸阿霉素6周成功诱导心肌肥大。观察大鼠的行为变化,检测心脏重量指数、左心室壁厚度、测定BNP与炎性因子含量等变化;结果表明,五味子醇甲中剂量可显着降低心脏重量指数、左心室壁厚度和BNP、IL-6、TNF-α含量（P<0.05）,降低RBC、HGB、RDW、MVP浓度,病理观察心肌纤维肥大等病变减轻,心肌凋亡率降低,BAX表达下调,Bcl-2表达上调,缓解心肌肥大。五味子醇甲对腹主动脉缩窄术致靶动物犬心肌肥大损伤的保护作用试验。预先灌胃雄性犬,3 mg/kg/d卡托普利阳性对照,6 mg/kg/d五味子醇甲组,共计14天,腹主动脉缩窄术4周致犬心肌肥大损伤,对照组灌胃等体积的生理盐水。观察犬行为变化,检测心率HR、收缩压SBP、心脏重量指数、左心室壁厚度、测定BNP与炎性因子含量等变化;犬试验结果显示,五味子醇甲显着降低了白细胞浓度与IL-6的含量（P<0.05）。结论,五味子醇甲对大鼠体内与体外心肌细胞肥大损伤具有一定的保护作用,主要通过降低BNP、IL-6、TNF-α含量,下调BAX蛋白,上调Bcl-2蛋白,保护心肌细胞;同时降低了心肌肥大损伤靶动物犬IL-6的含量,减小了炎性损伤。试验结果为进一步探讨五味子醇甲对心肌肥大保护作用机理提供参考,为五味子醇甲防治犬心肌肥大疾病药物研发提供一定的试验依据。
王玉[7]（2020）在《TRPC6在SAD大鼠血压变异性中的作用研究》文中研究表明背景大量研究表明,血压变异性增高是很多心脑血管疾病发生和进展的高危因素,可作为一项独立于血压之外反映心血管功能的指标。且不只是在高血压人群中,即使在血压值正常的人群中,血压变异性都是普遍存在的,然而,这往往被医生、患者所忽视,最终为人类的健康带来极其不利的影响。但目前,导致血压变异性增高的具体分子机制尚不清楚,因此,阐明血压变异性增高的机制具有重要意义。离子通道TRPC6（transient receptor potential cation channel 6）与很多心血管疾病的发生与进展有关。我们的前期实验表明,当血压变异性增加时,去窦弓神经（Sino-aortic denervation,SAD）大鼠模型主动脉平滑肌细胞中TRPC6的蛋白表达增加。因此我们推测TRPC6可能参与了对血压变异的调控。本实验的目的在于阐明TRPC6及TRPC6-Ca N-NFAT通路在SAD大鼠血压变异性中的调控作用。方法本实验的目的在于阐明TRPC6在大鼠血压变异性中的调控作用。我们通过对SD大鼠实施SAD手术,成功构建大鼠血压变异性增高的模型,该模型具有血压变异性增高而平均血压水平不增高的特点。血压变异性的表示方法为,每白天12个小时中,使用大鼠尾无创动脉血压检测仪,每隔1小时检测大鼠尾部无创血压,每次测得1个血压数值,最后根据12小时的血压数据进行计算,将收缩压及舒张压的标准差表示为大鼠的血压变异性。首先为10周龄SD大鼠实施SAD手术,SAD手术后8周进行血压测量,采用Western Blot、免疫荧光和定量RT-q PCR技术检测大鼠心肌和胸主动脉组织中TRPC6的表达水平,为了排除TRPC3对血压变异性的影响,TRPC3（transient receptor potential cation channel 3）在该组织中的表达水平同时被检测。为了进一步探讨TRPC6与SAD大鼠血压变异性增高的关系,我们在该实验中设计了不同浓度的TRPC6的激动剂及阻断剂,将从低到高3种不同浓度的TRPC6激动剂和阻断剂给予大鼠腹腔注射,以期从正反两方面探索TRPC6对血压变异性的调控作用。在此基础上,本研究进一步探讨了TRPC6-Ca N-NFAT分子通路在BPV升高中的作用。给予SAD大鼠腹腔注射TRPC6激动剂GSK1702934A（2mg/kg）或TRPC6阻断剂SAR7334（10mg/kg）后,取出心肌和胸主动脉组织,采用Western Blot检测NFAT在心肌组织和胸主动脉组织中的表达量,使用Ca N活性检测试剂盒检测组织中Ca N活性。研究结果结果显示:1.SAD术后,大鼠的收缩压变异性及舒张压变异性明显增加,但大鼠收缩压、舒张压水平及心率水平无明显变化,且SAD术后,大鼠胸主动脉和心肌组织中TRPC6的m RNA及蛋白表达水平与假手术组相比明显增高,但TRPC3的m RNA及蛋白表达水平无明显变化。2.腹腔注射不同剂量的TRPC6激动剂GSK1702934A后,SAD大鼠收缩压及舒张压变异性明显增高,且血压变异性的增高程度与激动剂的用量呈剂量依赖性,激动剂的用量越大,血压变异性增高越明显。3.腹腔注射不同剂量的TRPC6阻断剂SAR7334后,SAD大鼠收缩压及舒张压变异性明显降低,且血压变异性降低的程度与阻断剂的用量呈剂量依赖性,阻断剂用量越大,血压变异性降低越明显。4.SAD大鼠心肌组织内Ca N活性和NFAT表达量显着增高,而TRPC6活性被促进或抑制后,Ca N活性和NFAT表达量相应地进一步增加或显着降低。结论SAD大鼠心肌及胸动脉组织中TRPC6的表达明显增加,但TRPC3的表达无明显变化,提示TRPC6可能参与了血压变异性的调控,且TRPC6可能通过Ca N-NFAT通路在SAD大鼠BPV增高中发挥重要作用。并且,该研究提示TRPC6-Ca N-NFAT通路在SAD大鼠血压变异性增加中可能起到作用,表明干预TRPC6-Ca N-NFAT通路可能是防治血压变异的重要临床药理作用靶点,为进一步优化降压治疗及预防靶器官损害提供理论研究的依据。
哈略[8]（2020）在《艾灸及艾烟改善动脉粥样硬化的细胞自噬机制研究》文中提出背景:动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是多种心脑血管疾病的主要病理基础,是一种以粥样斑块为显着特征的慢性病理过程,在中医理论上属于“痰”、“瘀”的范畴,属于艾灸疗法的适应症范围。艾灸疗法改善AS的临床及机制研究已有大量报道,为艾灸抗AS的安全性和有效性提供了一定的科学依据。现代研究证明,艾灸可以通过改善AS过程中的脂质代谢、炎症反应、氧化应激、血小板活化以及内皮细胞功能多个方面,起到多靶点治疗AS的作用。艾烟是艾灸起效的重要因素之一,课题组前期研究也证明了艾烟在抗AS中不可替代的作用。细胞自噬是机体中的一项重要促存活机制,与AS各种发病机制均有深入的联系,也是近年来抗AS治疗中新的靶点和焦点。学者们认为自噬不足及过度自噬都会对AS的病理进程产生不利影响,这一现象反映了中医理论中阴阳平衡、对立统一的理念,同时自噬在微观层面上改善能量代谢、清除病理产物的作用与气的“气化”和“驱邪外出”等功能具有高度一致性。因此,已有不少学者着手研究中医药疗法调控自噬,改善心血管疾病的机制,并且取得了一定的成果。针刺、艾灸调控自噬防治心血管疾病的研究已有报道,但直接观察艾灸调控自噬对AS的研究还亟待开展。文献报道及课题组前期研究发现,艾灸对自噬通路及相关自噬蛋白展现出确切的调控作用,课题组预实验结果也体现了艾灸对AS过程中自噬的确切调控作用。基于上述基础,我们提出假说,艾灸及艾烟可以通过调控AS过程中的自噬功能,来实现防治AS的作用。目的:观察艾灸及艾烟两种干预手段对AS动物模型的影响,从病理改变、脂质代谢、斑块稳定性等方面探讨艾灸及艾烟防治AS的效应,然后通过对自噬特异性、自噬信号通路及凋亡水平等方面指标观察,从自噬角度探讨艾灸防治AS的作用机制。方法:54只8周龄ApoE载脂蛋白基因敲除小鼠按照随机数字表方法随机分为三组:模型组、艾灸组和艾烟组。18只同龄C57BL/6小鼠作为空白对照。艾灸组小鼠每日抓取,固定,予以艾灸膻中穴治疗,每次20 min,每日1次,每周6次,共干预12周。艾烟组小鼠每日接受固定浓度的艾烟暴露。模型组和空白组每日抓取固定,但不予任何干预。采用血液生化方法检测血脂四项（TC、TG、HDL、LDL）,采用Elisa法检测VLDL、ApoA1及ox-LDL,分别使用油红“O”和HE染色法观察主动脉病理切片。采用Masson染色法处理主动脉切片,计算ELA、CA、CD68、FCT、Ⅵ等斑块稳定性指标。采用免疫组化法检测主动脉内TNF-α、P38MAPK、NF-κB蛋白表达,采用Elisa法检测主动脉内MMP-2、MMP-9、TIMP-1。使用透射电镜观察血管内皮自噬小体数目,使用 Western blot 法检测小鼠主动脉 P62、Beclin-1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Atg5、Atg12 蛋白表达,使用免疫荧光法检测小鼠主动脉及肝脏P62、Beclin-1、LC3-Ⅱ表达。使用Western blot法及RT-PCR方法观察自噬信号通路p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR、PI3K在蛋白及mRNA水平上的的表达,使用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3表达。结果:1.AS病理进程及血脂水平模型组小鼠经过12周高脂喂养,体内存在较为明显的AS病变（血脂紊乱,AS斑块形成）;与空白组相比,小鼠血清TC（P<0.01）、TG（P<0.01）、LDL（P<0.01）、VLDL（P<0.01）显着升高,载脂蛋白ApoA1（P<0.05）及HDL（P<0.01）含量显着下降。以上AS常规指标结果提示本次研究AS模型建立成功。相比于模型组,经过12周的干预治疗,艾灸组小鼠体内AS病理改变减轻（血脂紊乱减轻、主动脉斑块缩小、内皮损伤改善）;艾灸组小鼠血清TC（P<0.01）、TG（P<0.01）、LDL（P<0.05）、VLDL（P<0.01）显着下降,载脂蛋白ApoA1及HDL含量有升高趋势,但无显着差异（P>0.05）。艾烟组小鼠体内AS病理改变减轻（血脂紊乱减轻、主动脉斑块缩小、内皮损伤改善）;艾烟组小鼠血清 TC（P<0.05）、TG（P<0.05）、VLDL（P<0.05）显着下降,LDL含量有下降趋势,但无显着差异（P>0.05）。载脂蛋白ApoA1及HDL含量有升高趋势,但无显着差异（P>0.05）。2.斑块稳定性相比于模型组,经过12周的干预治疗,艾灸组小鼠体内CA（P<0.01）、FCT（P<0.01）水平显着升高,ELA（P<0.01）水平显着下降,斑块易损指数Ⅵ（P<0.05）显着降低;炎症因子 TNF-α（P<0.05）、NF-κB（P<0.05）、MMP-9（P<0.05）、MMP-2（P<0.05）水平显着下降,TIMP-1（P<0.05）水平显着升高。艾烟组小鼠体内CA（P<0.01）、FCT（P<0.01）水平显着升高,ELA（P<0.01）水平显着下降,易损斑块指数Ⅵ（P<0.05）显着降低;炎症因子TNF-α（P<0.05）、MMP-9（P<0.05）、MMP-2（P<0.05）水平显着下降,TIMP-1水平升高但无统计学差异（P>0.05）。3.自噬特异性相比于模型组,经过12周的干预治疗,电镜下艾灸组小鼠主动脉内皮自噬小体及自噬溶酶体显着增多。Western blot显示艾灸组小鼠主动脉促自噬蛋白Beclin-1（P<0.01）、LC3-Ⅱ/LC-Ⅰ比值（P<0.01）、Atg12（P<0.05）显着升高,Atg5表现出升高趋势,但无统计学差异（P>0.05）;自噬抑制蛋白P62（P<0.01）显着降低。免疫荧光显示艾灸组小鼠主动脉Beclin-1（P<0.05）、LC3-Ⅱ（P<0.05）表达显着增强。艾灸组小鼠肝脏内Beclin-1（P<0.05）、LC3-Ⅱ（P<0.05）显着升高,P62 表达无显着差异（P>0.05）。相比于模型组,经过12周的干预治疗,电镜下艾烟组小鼠主动脉内皮细胞自噬小体及自噬溶酶体显着增多。Western blot显示艾烟组小鼠主动脉促自噬蛋白Beclin-1（P<0.01）、LC3-Ⅱ/LC-Ⅰ 比值（P<0.05）、Atg12（P<0.05）显着升高,Atg5 表现出升高趋势,但无统计学差异（P>0.05）;自噬抑制蛋白P62（P<0.01）显着降低。免疫荧光显示艾烟组小鼠主动脉Beclin-1（P<0.05）、LC3-Ⅱ（P<0.05）表达显着增强。艾烟组小鼠肝脏内Beclin-1、LC3-Ⅱ、P62表达与模型组无显着差异（P>0.05）。4.PI3K/Akt/mTOR 信号通路结果显示,相比于模型组,经过12周的干预治疗,艾灸组小鼠主动脉内p-Akt/Akt比值（P<0.01）、p-mTOR/mTOR/比值（P<0.01）显着下降,PI3K相对表达量无显着差异（P>0.05）。相比于模型组,经过12周的干预治疗,艾烟组小鼠主动脉内p-mTOR/mTOR/比值（P<0.01）显着下降、p-Akt/Akt比值有下降趋势,但无显着差异（P>0.05）,PI3K相对表达量无显着差异（P>0.05）。RT-PCR结果显示,相比于模型组,艾灸组小鼠mTOR mRNA及AktmRNA含量显着下降（P<0.05）。相比于模型组,艾烟组小鼠mTOR mRNA含量显着下降（P<0.05）,AktmRNA有下降趋势,但无统计学差异（P>0.05）。5.细胞凋亡蛋白相比于模型组,经过12周的干预治疗,艾灸组小鼠主动脉内Bcl-2蛋白含量显着升高（P<0.05）,Caspase-3蛋白含量显着下降（P<0.05）。相比于模型组,经过12周的干预治疗,艾烟组小鼠主动脉内Caspase-3蛋白含量显着下降（P<0.05）,Bcl-2蛋白含量有升高趋势,但无统计学差异（P>0.05）。结论:1.艾灸和艾烟都可以改善AS小鼠体内病理进展,减轻炎症反应,纠正血脂紊乱,增强斑块稳定性。2.艾灸和艾烟都可以上调AS小鼠体内自噬水平,艾灸改善自噬是艾灸防治AS的全新靶点。3.艾灸及艾烟可通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路中的相关活性分子,从而提升细胞内自噬水平,起到延缓AS病理进程,改善斑块稳定性的作用。4.艾灸及艾烟通过上调Bcl-2、下调Caspase-3蛋白表达,抑制细胞凋亡,展现出一定的调控自噬/凋亡平衡的作用。5.艾灸和艾烟的调节作用基本一致,在调控血脂方面艾灸干预的效果优于艾烟干预。
郭书栋[9]（2020）在《经颈动脉插管行K-H液交换的离体心脏制备技术》文中研究说明目的:探索一种能够在大鼠心脏离体过程中实现持续灌注的离体心脏制备和灌注技术,以从根本上克服传统的大鼠心脏离体方法所带来的局限性,为心脏离体研究提供更完美的研究模型。方法:将80只雄性SD大鼠随机平均分为传统对照组（T组,n=40）和改进手术组（M组,n=40）两组心脏,分别用Langendorff传统离体心脏方法和改进手术方法将心脏离体后灌注,通过观察记录心脏复跳（P-RT）、稳定时间（R-ST）,冠脉流量（CF）,各时间点心率（HR）、左室压力（LVP）以及心律失常情况来比较两组离体心脏功能,离体工作表现;再过比较心肌酶、左心室组织结构,心肌细胞凋亡情况两组不同心脏离体方法造成的心肌损伤。具体分组情况为:首先,随机将每组中的10只大鼠用来用来分别检测记录离体心脏2h全程心电图以分析心律失常;1min、5min、10min、15min、30min、1h、2h时的心率;30min、1h、2h时的左心室压力。然后,随机将每组中另外的10只用来分别检测记录1min、5min、10min、15min1、301min、1h、2h时的冠脉1流量;并取15min时的冠脉流出液检测CK-MB含量、1LDH活性水平;并检测2h时的心肌组1织病理学改变和心肌细1胞凋亡水平。再然后随机将每组中的另外的10只用来进一步检测4h时的心肌组织病理学改变和心肌细胞凋亡水平。最后,将每组中的最后10只用来持续灌注,记录离体心脏存活时间。通过比较以上指标来验证改进方法的优势。结果:心脏复跳观察实验结果显示:传统组的离体心脏主动脉灌注-复跳最长时间为5s,最短时间为2s,中位时间为3s;传统组离体心脏复跳-稳定跳动最长时间为8.8min,最短时间为4.2min,中位时间为5.05min;改进组的所有心脏在离体后均能实现持续、稳定跳动,未观察到停止灌注情况,未观察到心律失常情况,与传统组对比具有显着差异（P<0.001）;心率变化情况结果:1min时,传统组的心率仅有260.3±29.3次/分,而改进组心率可达到317.4±25.8次/分,P<0.001;5min、10min、15min、30min、1h、2h传统组心率分别为:268.0±29.2次/分、266.5±26.3次/分、264.5±30.2次/分、268.6±19.6次/分、258.5±26.1次/分、264.0±19.3次/分;改进组各时点心率为:329.2±21.7次/分、328.9±16.1次/分、331.2±33.6次/分、319.3±20.2次/分、318.0±20.4次/分、311.1±12.7次/分,所有P值均小于0.001;心律失常情况结果:传统组的各型心律失1常发生率依次1分别为:100%、100%、80%、60%;心律失常发生最大时长为492.9s,最小时长:47.9s,中位时长:167.4s,而与之相反的是,改进方法分离的心脏全程未发生心律失常,持续稳定跳动,较传统组具有显着差异,所有P值均小于0.001;冠脉流量结果:1min时,传统组冠脉流量为5.17±0.94 ml/min,改进组在1min时的冠脉流量为9.51±0.84 ml/min,P<0.001。在5min、10min、15min时,传统组冠脉流量依次为:9.61±0.81 ml/min、9.21±0.82 ml/min、9.18±0.83 ml/min;改进组的冠脉流量为:9.69±0.87ml/min、9.83±0.76ml/min、9.88±0.86 ml/min,两组在上述时点无显着差异,P值依次为:0.834、0.097、0.080。传统组30min、1h、2h时的冠脉流量依次为:8.76±0.85 ml/min、7.99±0.67ml/min、7.14±0.80 ml/min;改进组的冠脉流量依次为:9.89±0.85ml/min、9.66±0.79ml/min、9.17±0.78ml/min,差异具有统计学意义,P值依次为:0.008、<0.001、<0.001;左心室压力参数结果:改进组的所有左室压力参数在30min、1h、2h均表现出显着差异。在30min时,传统组的左心室收缩压、左心室发展压、左室发展压上升最大速率、左室发展压下降最小速率依次为:109.3±5.1mm Hg、104.3±6.1 mm Hg、2427.8±143.1 mm Hg/s、-1874.1±177.3 mm Hg/s;在1h时,传统组上述指标依次为:104.7±5.3 mm Hg、99.2±5.7 mm Hg、2195.1±190.1 mm Hg/s、-1868.0±256.6 mm Hg/s;在2h时,传统组上述指标依次为:96.1±6.2 mm Hg、91.1±5.7 mm Hg、1968.6±166.6 mm Hg/s、-1653.3±255.5 mm Hg/s。与之相对应的是,在30min时,改进组的上述指标依次为:122.5±11.1 mm Hg、117.1±11.0mm Hg、2794.1±170.6 mm Hg/s、-2615.2±298.6 mm Hg/s;在1h时,改进组的上述指标依次为:118.0±10.4 mm Hg、112.8±9.0 mm Hg、2636.4±170.4 mm Hg/s、-2509.3±302.9 mm Hg/s;在2h时,改进组的上述指标依次为:111.0±11.5 mm Hg,106.1±10.1 mm Hg、2502.9±132.9 mm Hg/s、-2323.9±245.3 mm Hg/s。具体P值见正文;冠脉流出液CK-MB含量和LDH活性结果:传统组CK-MB含量为:93.36±33.87ng/ml,而改进组CK-MB含量仅有:53.31±17.88ng/ml,P=0.010,差异具有统计学意义;传统组LDH活性为:2109.82±55.80 U/ml,而改进组LDH活性仅有:1944.46±125.66 U/ml,P=0.007,差异具有统计学意义;心肌组织病理结构变化结果:在改进组中,心肌细胞的大小相对正常,细胞质和细胞核染色较均匀,心肌细胞排列比较规则,密度趋于正常,镜下可见闰盘结构。心肌纤维清晰且连续,未见明显断裂,心肌间隙稍增大,心肌间质轻度水肿。与之相反,我们观察到传统组心肌细胞排列不规则,心肌纤维广泛断裂,且紊乱,可以观察到心肌间隙严重增大,心肌间质严重水肿;心肌细胞凋亡结果:200倍镜下2h传统组心肌细胞凋亡的发生率（27.25±9.15%）明显高于改进组（0.37±0.12%）,P<0.001;4h传统组心肌细胞凋亡的发生率（40.90±6.56%）明显高于改良组（0.42±0.14%）,P<0.001。4h的心肌细胞凋亡的发生率（40.90±6.56%）明显高于2h组（27.25±9.15%）,差异具有统计学意义,P=0.001;而在改进组中,这种现象并未发现,P=0.380,差异无统计学意义。离体心脏存活时间结果:传统组离体心脏中位存活时间为:7.2h;改进组离体心脏中位存活时间:10.55h,P<0.001,改进组离体心脏存活时间显着长于传统组。结论:我们成功的开发出了一种能够在大鼠心脏离体过程中实现持续灌注的离体心脏制备和灌注技术。该技术能够实现无肝素应用,无灌注中断,无低温刺激,无缺血-再灌注损伤,无缺氧-复氧损伤,全程无心律失常。该技术制备的大鼠心脏损伤更小,凋亡更少。该技术制备的大鼠心脏能够存活更长时间。
孙忠广[10]（2019）在《GCN2在有氧运动减轻阿霉素诱导的小鼠心肌损伤中的作用和机制》文中认为研究背景和目的阿霉素（Doxorubicin,DOX）是一种有效的癌症化疗药物。阿霉素对心脏有一定的副作用-剂量依赖性心肌损伤,严重的导致心力衰竭,甚至死亡;这种心肌损伤的机制与能量代谢障碍、凋亡、氧化应激和纤维化等有关。有氧运动作为一种非药物手段可以有效的预防和缓解阿霉素诱导的心肌损伤,但其作用机制至今尚未完全阐明。一般性调控阻遏蛋白激酶2（general control non-derepressible 2,GCN2）是真核起始因子2α（eukaryotic initiation factor2α,eIF2α）激酶的其中之一,是氨基酸感应激酶。前期研究表明GCN2活性的降低和缓解小鼠心血管疾病有关,GCN2及其下游eIF2α/ATF4通路在其中起着重要作用,但是GCN2基因在有氧运动减轻阿霉素诱导的心肌损伤的过程中所起的作用尚不清楚。因此本研究将使用阿霉素诱导的小鼠心肌损伤模型,采用中等强度的跑台运动干预,研究阿霉素注射期间和之后的中等强度的有氧运动对小鼠心肌损伤的影响,并探索对GCN2及其下游通路（eIF2α/ATF4）的影响。本研究将使用GCN2基因敲除小鼠进行同样的阿霉素注射和有氧运动干预,研究GCN2基因敲除后是否影响有氧运动对阿霉素诱导的小鼠心肌损伤的调节作用;同时还采用GCN2激活剂观察GCN2激活是否影响有氧运动调节阿霉素诱导的小鼠心肌损伤的作用。本研究将揭示有氧运动减轻心肌损伤的作用机制以及GCN2在其中所起的作用。研究方法和材料第一部分:有氧运动对阿霉素诱导的C57小鼠心肌损伤的影响和对GCN2的影响1.8周龄的雄性C57小鼠（n=36）随机分配到C57对照组（C57 CON,n=6）、C57注射阿霉素组（C57 DOX,n=12）、C57运动组（C57 E,n=6）,C57注射阿霉素运动组（C57 DE,n=12）。注射阿霉素方案共进行4周,每周注射一次,每次注射5mg/kg,总剂量为20mg/kg,对照组小鼠注射等量的生理盐水。2.有氧运动训练方案采用8周的中等强度的跑台训练。DE组小鼠前4周注射阿霉素和运动训练同时进行,后4周只进行有氧运动训练。8周有氧运动训练结束后进行超声心动图测试,评估小鼠的心功能,包括心脏射血分数（EF）、左室短轴缩短率（FS）、左室舒张末期内径（LVEDD）和左室收缩末期内径（LVESD）等。24小时后对小鼠进行运动能力测试,包括最大运动距离和运动时间。3.麻醉小鼠并获取小鼠心脏组织,对心脏组织进行组织学测试,包括使用麦胚凝集素（wheat germ agglutinin,WGA）染色观察心肌细胞大小变化,使用天狼星红（Sirius Red）染色观察心肌组织纤维化水平。4.对小鼠心肌组织进行分子生物学测试,包括GCN2蛋白及其下游通路（eIF2α、P-eIF2α、ATF4）、心肌凋亡相关蛋白（Caspase3、Bax、Bcl2）、心功能相关蛋白（ANP）、心肌能量代谢相关蛋白（AMPKα、P-AMPKα、PGC1α、SIRT1）和纤维化相关蛋白（CollagenI）的表达。第二部分:有氧运动对阿霉素诱导的GCN2基因敲除小鼠心肌损伤的影响和机制1.8周龄的雄性GCN2基因敲除小鼠（GCN2 KO,n=36）随机分配到GCN2基因敲除对照组（GCN2 KO CON,n=6）、GCN2基因敲除阿霉素组（GCN2 KO DOX,n=12）、GCN2基因敲除运动组（GCN2 KO E,n=6）,GCN2基因敲除注射阿霉素运动组（GCN2 KO DE,n=12）。2.该部分实验方法和测试指标与第一部分相同,主要研究GCN2基因敲除是否影响有氧运动对阿霉素诱导的小鼠心肌损伤的调节作用,并研究其相关机制。第三部分:GCN2激活对有氧运动调节阿霉素诱导的小鼠心肌损伤的影响和机制1.8周龄的雄性C57小鼠（n=24）随机分配到C57注射阿霉素运动组（C57 DE,n=12）和C57注射阿霉素运动+GCN2激活剂组（C57 DEL,n=12）;8周龄的雄性GCN2基因敲除小鼠（n=24）分到GCN2基因敲除注射阿霉素运动组（GCN2 KO DE,n=12）和GCN2基因敲除注射阿霉素运动+GCN2激活剂组（GCN2 KO DEL,n=12）。2.GCN2激活剂采用1周的亮氨酸缺乏（Leu-）饮食喂养,对照组喂养普通饲料,亮氨酸缺乏饲料组成和普通饲料除了亮氨酸的含量不同之外,其余完全相同。1周的亮氨酸缺乏饮食喂养可以有效的激活GCN2。3.阿霉素注射方案和有氧运动方案与第一部分相同,并在8周有氧运动干预的最后1周进行亮氨酸缺乏饮食干预,干预结束后对小鼠进行超声心动图测试和运动能力测试。研究结果:第一部分1.相比C57安静组,C57 DOX组小鼠心脏的EF和FS的显着降低（P<0.01）,最大运动距离和运动时间也显着下降（P<0.01）,即注射阿霉素降低了小鼠的心功能和运动能力;从干预的第4周到第8周,C57 DOX组小鼠体重相比安静组显着较低（P<0.01）;C57 DOX组小鼠心肌组织出现显着纤维化（P<0.01）;C57 DOX组小鼠心脏GCN2下游蛋白（P-eIF2α/ATF4）表达显着增加（P<0.01）;Bax、Caspase3和ANP蛋白表达显着增加（P<0.01）,心肌抗凋亡相关的Bcl2蛋白表达和Bcl2/Bax比率显着下降（P<0.05）;能量代谢相关蛋白（P-AMPKα、PGC1α、SIRT1）表达显着降低（P<0.05）;纤维化相关蛋白（Collagen I）表达显着增加（P<0.01）;即阿霉素诱导了C57小鼠的心肌凋亡、能量代谢障碍和心肌纤维化。2.相比C57 DOX组,C57 DE组缓解了上述不良的症状,包括改善了小鼠EF和FS（P<0.05）;改善了小鼠最大运动距离和运动时间（P<0.05）;改善了小鼠心肌组织纤维化水平（P<0.05）;并且抑制了凋亡和纤维化相关蛋白（Bax、Caspase3、Collagen I）的表达（P<0.05）;心肌抗凋亡相关的Bcl2蛋白表达和Bcl2/Bax比率显着升高（P<0.05）;还增加了能量代谢相关蛋白（P-AMPKα、PGC1α、SIRT1）的表达,ANP蛋白表达有升高的趋势,但没有显着差异性;即有氧运动改善了阿霉素诱导的C57小鼠的心肌凋亡、能量代谢障碍和心肌纤维化。3.相比C57 DOX组,C57 DE组还抑制了GCN2和下游通路相关蛋白（P-eIF2α/ATF4）的表达（P<0.05）,GCN2蛋白表达的下降可能和有氧运动的心脏保护作用相关。第二部分1.相比GCN2 KO安静组,GCN2 KO DOX组小鼠心脏的EF和FS显着降低（P<0.01）;最大运动距离和运动时间也显着下降（P<0.01）;从干预的第4周到第8周,GCN2 KODOX组小鼠体重相比安静组显着较低（P<0.01）;GCN2 KO DOX组小鼠心肌组织出现显着纤维化（P<0.01）;GCN2 KO DOX组小鼠GCN2下游通路相关蛋白（P-eIF2α、ATF4）表达显着增加（P<0.05）,Bax和ANP蛋白表达显着增加（P<0.01）,Bcl2蛋白表达和Bcl2/Bax比率显着下降（P<0.05）,能量代谢相关蛋白（P-AMPKα、PGC1α、SIRT1）表达显着降低（P<0.05）;即阿霉素诱导了GCN2基因敲除小鼠的心肌凋亡、能量代谢障碍和心肌纤维化。2.相比GCN2 KO DOX组,GCN2 KO DE组缓解了上述症状,具体包括减轻了阿霉素诱导的GCN2 KO小鼠EF和FS值（P<0.05）,改善了运动能力（P<0.05）;减轻了心肌组织纤维化（P<0.05）;抑制了心肌凋亡和心功能相关蛋白（Bax、ANP）的表达（P<0.05）;增加了心肌抗凋亡相关的Bcl2和Bcl2/Bax比率显着升高（P<0.05）;还增加了能量代谢相关蛋白（P-AMPKα、PGC1α、SIRT1）的表达;抑制了GCN2下游通路相关蛋白（P-eIF2α、ATF4）的表达（P<0.05）;即有氧运动改善了阿霉素诱导的GCN2基因敲除小鼠的心肌凋亡、能量代谢障碍和心肌纤维化。3.研究还对GCN2基因敲除小鼠与C57小鼠的心肌损伤指标进行了对比,发现与C57DOX组相比,GCN2 KO DOX组小鼠的体重、运动能力、EF和FS显着较高（P<0.05）,心肌纤维程度也显着较低（P<0.05）,即GCN2基因敲除抑制阿霉素导致的小鼠的体重、心功能和运动能力的下降;与C57 DE组相比,GCN2 DE组小鼠的心脏EF和FS值也显着较高（P<0.05）,其余指标较高,但没有显着差异性;即GCN2基因敲除能缓解阿霉素诱导的小鼠心肌损伤,且GCN2基因敲除还能促进有氧运动对小鼠心肌损伤的缓解作用,其机制和抑制GCN2的活性有关,然后抑制P-eIF2α/ATF4通路的表达,进而抑制心肌凋亡、纤维化和能量代谢障碍。第三部分1.相比C57 DE组,C57 DEL组小鼠心脏GCN2下游通路蛋白（P-eIF2α/ATF4）的表达显升高（P<0.05）。2.相比C57 DE组,C57 DEL组小鼠的运动能力显着下降（P<0.05）;EF和FS显着降低（P<0.05）;心肌纤维化程度有升高的趋势,但没有差异性;即GCN2激活导致了C57 DE组小鼠的体重、心功能和运动能力的下降;相比GCN2 KO DE组,GCN2 KO DEL组小鼠体重显着降低（P<0.05）,EF、FS和运动能力有下降的趋势,但没有显着差异性;心肌纤维化程度也有升高的趋势,但没有显着差异性。3.相比C57 DEL组,GCN2 KO DEL组小鼠的体重没有显着差异性;EF和FS较高,但没有显着差异性;运动能力显着较高（P<0.05）;心肌纤维化程度显着较低（P<0.05）;GCN2下游蛋白（P-eIF2α/ATF4）的表达也显着较低（P<0.05）。研究结论1.8周的有氧运动缓解了阿霉素诱导的C57小鼠的心肌损伤,机制和调节心肌凋亡、能量代谢障碍和纤维化相关蛋白的表达有关;有氧运动还抑制了GCN2蛋白及其下游P-eIF2α/ATF4的表达,GCN2蛋白表达下降和有氧运动减轻心肌损伤有关。2.GCN2基因敲除后缓解了阿霉素诱导的小鼠心肌损伤,并促进有氧运动对阿霉素诱导的心肌损伤的缓解效果,其机制与抑制GCN2蛋白表达,调控下游P-eIF2α/ATF4通路,进而影响小鼠心肌凋亡、能量代谢和纤维化有关。3.GCN2激活抑制有氧运动对C57小鼠心肌损伤的改善作用,GCN2是有氧运动缓解阿霉素诱导的心肌损伤的重要基因,其下游通路（P-eIF2α/ATF4）在该过程中起着重要作用。
二、High-level apoptosis is persistent in myocardiocytes of sinoaortic-denervated rats（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、High-level apoptosis is persistent in myocardiocytes of sinoaortic-denervated rats（论文提纲范文）
（1）自噬介导运动改善心血管疾病的研究进展（论文提纲范文）
| 1 细胞自噬 |
| 2 细胞自噬与心血管病 |
| 2.1 心肌缺血再灌注损伤与细胞自噬 |
| 2.2 心力衰竭与细胞自噬 |
| 2.3 心肌病与细胞自噬 |
| 2.4 动脉粥样硬化与细胞自噬 |
| 3 运动对心血管自噬的影响 |
| 3.1 急性运动对心血管自噬的影响 |
| 3.2 长期运动对心血管自噬的影响 |
| 4 运动对自噬的调控机制 |
| 4.1 运动通过AMPK/mTOR/ULK1调节自噬 |
| 4.2 运动通过Beclin1复合物调节自噬 |
| 5 运动、自噬与心血管疾病的关系 |
| 5.1 运动抑制自噬改善心血管疾病 |
| 5.2 运动促进自噬改善心血管疾病 |
| 6 小结与展望 |
（2）绝经后高血压患者中医证型分布特点及淫羊藿苷干预的相关机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 肾素-血管紧张素系统与绝经后高血压研究进展 |
| 1 绝经后高血压概述 |
| 2 肾素-血管紧张素系统概述 |
| 3 雌激素通过调节肾素-血管紧张素系统治疗绝经后高血压 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 补肾法治疗绝经后高血压的研究进展 |
| 1 中医对绝经后高血压的认识 |
| 2 补肾法治疗绝经后高血压的理论依据 |
| 3 补肾法治疗绝经后高血压的研究进展 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 补肾法联合降压药治疗绝经后及围绝经期高血压的系统评价和Meta分析 |
| 1 研究目的 |
| 2 资料与方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 文献检索结果 |
| 3.2 纳入文献的一般特征 |
| 3.3 纳入文献的用药规律统计 |
| 3.4 纳入文献的质量评价 |
| 3.5 Meta分析结果 |
| 3.6 不良反应分析 |
| 3.7 发表偏倚检测 |
| 3.8 敏感性分析 |
| 3.9 亚组分析 |
| 3.10 试验序贯分析 |
| 4 讨论 |
| 5 研究结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 绝经后高血压患者中医证型分布及动态血压特点研究 |
| 1 研究目的 |
| 2 研究内容和研究方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 基线资料 |
| 3.2 高血压分级分布 |
| 3.3 中医证型分布 |
| 3.4 昼夜节律类型分布 |
| 3.5 不同绝经年限动态血压参数比较 |
| 3.6 年龄与动态血压参数的相关性 |
| 3.7 血压变异性相关因素的多元线性回归 |
| 4 讨论 |
| 5 研究结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 淫羊藿苷通过调节RAS对雌性去势SHR发挥血压保护作用 |
| 1 研究目的 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 统计学方法 |
| 5 实验结果 |
| 5.1 一般情况 |
| 5.2 淫羊藿苷对大鼠体重的影响 |
| 5.3 淫羊藿苷对大鼠血压的影响 |
| 5.4 淫羊藿苷对大鼠心率的影响 |
| 5.5 淫羊藿苷对大鼠脏器系数的影响 |
| 5.6 淫羊藿苷对大鼠ACE1-AngⅡ-AT1R轴的影响 |
| 5.7 淫羊藿苷对大鼠ACE2-Ang(1-7) -MasR轴的影响 |
| 5.8 淫羊藿苷对大鼠E_2含量及GPR30蛋白表达的影响 |
| 5.9 淫羊藿苷对大鼠心肌组织ERK1/2通路的影响 |
| 6 讨论 |
| 6.1 淫羊藿苷对SHR大鼠血压的影响 |
| 6.2 SHR和WKY大鼠循环和心肌组织RAS组分存在差异 |
| 6.3 淫羊藿苷对SHR大鼠循环和心肌组织RAS组分的影响 |
| 6.4 淫羊藿苷对SHR大鼠E_2及其受体GPR30的影响 |
| 6.5 淫羊藿苷对SHR大鼠心肌组织ERK1/2通路的影响 |
| 7 研究结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（3）肥大细胞参与右美托咪定心脏保护效应的炎性调控机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 序言 |
| 第一部分 右美托咪定在体外循环心脏瓣膜置换术中的心脏保护效应:随机对照双盲研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 右美托咪定预处理抑制肥大细胞脱颗粒对抗大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 右美托咪定预处理抑制心脏常驻肥大细胞脱颗粒减轻大鼠离体心肌缺血/再灌注损伤 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第四部分 右美托咪定预处理抑制肥大细胞脱颗粒介导的心肌细胞损伤 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 全文总结 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 综述 右美托咪定心脏保护作用的研究进展:从基础到临床 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（4）基于TXNIP/NLRP3途径研究益气活血药对心梗后内质网应激诱发细胞焦亡的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 益气活血类中药保护缺血性心肌病的作用机制及在内质网应激方面的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 心肌细胞死亡形式及其在心血管疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 益气活血药对心梗大鼠心脏功能的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 益气活血药对心肌梗死大鼠内质网应激和细胞焦亡的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 益气活血药对缺血缺氧诱导的H9c2心肌细胞活力的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 益气活血药对缺糖缺氧诱导的H9c2心肌细胞内质网应激和细胞焦亡的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（5）Adropin在高血压心肌重构中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 高血压左室肥厚患者外周血Adropin水平的变化及意义 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备及试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 Adropin在高血压患者血清中的表达水平变化 |
| 3.2 高血压患者一般临床资料 |
| 3.3 Adropin水平与左室质量指数的相关性研究 |
| 3.4 Adropin水平在高血压左室肥厚中的诊断价值分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 重组Adropin对自发性高血压大鼠心肌重构的影响 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备与试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 SHR大鼠心肌重构的发生及Adropin表达水平的下降 |
| 3.2 Adropin处理延缓高血压大鼠心肌重构的进展 |
| 3.3 Adropin处理抑制SHR大鼠心肌组织炎症水平的影响 |
| 3.4 Adropin处理降低SHR大鼠心肌组织氧化应激水平 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 Adropin在小鼠病理性心肌重构中的作用及机制 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备与试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 小鼠病理性心肌重构的形成及Adropin表达水平的下降 |
| 3.2 Adropin处理延缓TAC诱导的小鼠病理性心肌重构 |
| 3.3 Adropin处理延缓Ang Ⅱ诱导的小鼠病理性心肌重构 |
| 3.4 Adropin敲除增加Ang Ⅱ诱导的小鼠病理性心肌重构 |
| 3.5 Nrf2 过表达减轻Adropin缺失加重Ang Ⅱ模型小鼠病理性心肌重构的程度 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第四部分 Adropin在 Ang Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用及其机制 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器、设备与试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 Ang Ⅱ对 CFs细胞Adropin表达的影响 |
| 3.2 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞Adropin蛋白表达变化的影响 |
| 3.3 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞增殖的影响 |
| 3.4 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞胶原合成的影响 |
| 3.5 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞氧化应激的影响 |
| 3.6 Adropin处理对Ang Ⅱ刺激CFs细胞引起Nrf2/HO-1 信号通路变化的影响 |
| 3.7 Adropin增强Ang Ⅱ刺激CFs细胞中的Nrf2 转录活性 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 Adropin:一种新的心脏疾病生物标记物 |
| 参考文献 |
（6）五味子醇甲对心肌肥大损伤的保护作用研究（论文提纲范文）
| 附件 |
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 五味子的概述 |
| 1.2 五味子醇甲的概述 |
| 1.2.1 五味子醇甲的抗炎活性作用机理 |
| 1.2.2 五味子醇甲的抗氧化活性作用机理 |
| 1.2.3 五味子醇甲的抗凋亡损伤作用机理 |
| 1.3 宠物犬心肌肥厚疾病现状 |
| 1.4 心肌肥大的概述 |
| 1.4.1 心肌肥大的发展 |
| 1.4.2 诱发心肌肥大发生的主要因素及机制研究 |
| 1.4.2.1 去甲肾上腺素 |
| 1.4.2.2 异丙肾上腺素 |
| 1.4.2.3 血管紧张素II |
| 1.4.2.4 阿霉素 |
| 1.4.2.5 腹主动脉缩窄术 |
| 1.5 研究的目的与意义 |
| 第二章 五味子醇甲预处理对大鼠心肌细胞肥大损伤的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 药品与试剂 |
| 2.1.2 细胞来源 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 心肌细胞肥大损伤模型建立与分组给药 |
| 2.2.1.1 心肌细胞的培养与传代 |
| 2.2.1.2 实验分组与给药 |
| 2.2.2 五味子醇甲对心肌细胞肥大主要判定指标的影响 |
| 2.2.2.1 心肌细胞表面积的测量与蛋白/DNA比率 |
| 2.2.2.2 心肌肥大损伤标志物BNP的含量变化 |
| 2.2.3 五味子醇甲对肥大心肌细胞炎性因子的影响 |
| 2.2.3.1 ELISA检测IL-6、IL-10、TNF-α的变化 |
| 2.2.4 五味子醇甲对心肌肥大的凋亡损伤的保护作用研究 |
| 2.2.4.1 五味子醇甲预处理对NE诱导心肌细胞存活率的影响 |
| 2.2.4.2 HOECHST33342 检测的心肌细胞凋亡率的变化 |
| 2.2.4.3 线粒体膜电位的检测 |
| 2.2.2.4 WESTERN BLOT检测凋亡蛋白表达变化 |
| 2.2.2.5 实时荧光定量PCR |
| 2.2.5 数据分析方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 心肌肥大模型建立 |
| 2.3.2 五味子醇甲对心肌肥大指标的改变 |
| 2.3.2.1 细胞形态观察 |
| 2.3.2.2 心肌细胞表面积、蛋白/DNA比率与BNP的含量变化 |
| 2.3.3 五味子醇甲对肥大心肌细胞炎性因子的影响 |
| 2.3.3.1 各组IL-6、IL-10、TNF-α的含量变化 |
| 2.3.4 五味子醇甲对大鼠心肌细胞肥大凋亡损伤的影响 |
| 2.3.4.1 MTT法分析心肌细胞存活率 |
| 2.3.4.2 HOECHST33342 检测细胞凋亡率结果 |
| 2.3.4.3 线粒体膜电位变化 |
| 2.3.4.4 WB与 RT-PCR结果分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 五味子醇甲预处理对盐酸阿霉素致大鼠心肌肥大损伤的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验药品及试剂 |
| 3.1.2 实验动物 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 建立心肌肥大损伤模型 |
| 3.2.1.1 分组及给药 |
| 3.2.2 五味子醇甲对盐酸阿霉素诱导大鼠心肌肥大损伤病理变化的影响 |
| 3.2.2.1 心脏重量指数与心室壁厚度的变化 |
| 3.2.2.2 血液学指标的变化 |
| 3.2.2.3 制作病理切片 |
| 3.2.3 五味子醇甲对大鼠心肌肥大损伤生物标识物BNP和炎性因子的影响 |
| 3.2.3.1 BNP、TNF-α、IL-6、IL-10 含量测定 |
| 3.2.4 五味子醇甲对大鼠心肌肥大凋亡损伤的影响 |
| 3.2.4.1 TUNEL法检测心肌组织凋亡率的变化 |
| 3.2.4.2 心脏组织免疫组化染色 |
| 3.2.4.3 WESTERN BLOT法测定蛋白含量变化 |
| 3.2.4.4 实时荧光定量PCR法测定蛋白基因的相对表达量 |
| 3.2.5 统计分析方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 大鼠的行为状态观察 |
| 3.3.2 大鼠心肌肥大模型建立 |
| 3.3.3 五味子醇甲对大鼠心肌肥大损伤病理变化的影响 |
| 3.3.3.1 大鼠全心指数与左心室壁厚度的变化 |
| 3.3.3.2 血液学指标结果 |
| 3.3.3.3 HE染色结果 |
| 3.3.4 五味子醇甲对大鼠心肌肥大损伤生物标识物BNP和炎性因子的影响 |
| 3.3.4.1 BNP、TNF-α、IL-6、IL-10 含量变化 |
| 3.3.5 五味子醇甲对大鼠心肌肥大凋亡损伤的影响 |
| 3.3.5.1 TUNEL法检测心肌凋亡率结果 |
| 3.3.5.2 免疫组化结果 |
| 3.3.5.3 检测BAX、BCL-2 蛋白表达与基因表达的结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 五味子醇甲预处理对腹主动脉缩窄术致犬心肌肥大损伤的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验药品与试剂 |
| 4.1.2 实验动物 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 犬心肌肥大损伤模型建立及分组给药 |
| 4.2.2 犬的一般状态观察与SBP、HR的变化 |
| 4.2.3 五味子醇甲对犬心肌肥大损伤病理变化的影响 |
| 4.2.3.1 心脏脏器指数与左心室壁厚度的变化 |
| 4.2.3.2 血常规检测 |
| 4.2.3.3 HE染色 |
| 4.2.4 五味子醇甲对腹主动脉缩窄术致犬心肌肥大BNP和炎性因子的影响 |
| 4.2.5 五味子醇甲对犬心肌肥大凋亡损伤的影响 |
| 4.2.5.1 五味子醇甲对犬心肌肥大损伤心肌组织凋亡率的影响 |
| 4.2.5.2 心脏组织免疫组化染色 |
| 4.2.6 统计分析方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 犬一般状态观察 |
| 4.3.2 犬心肌肥大模型的评价 |
| 4.3.3 犬的心率和收缩压变化 |
| 4.3.4 五味子醇甲对犬心肌肥大损伤病理变化的影响 |
| 4.3.4.1 心脏重量指数、左心室壁厚度的变化 |
| 4.3.4.2 血液指标的变化 |
| 4.3.4.3 HE染色结果 |
| 4.3.5 五味子醇甲对犬心肌肥大损伤生物标识物BNP和炎性因子的影响 |
| 4.3.6 五味子醇甲对犬心肌肥大凋亡损伤的影响 |
| 4.3.6.1 TUNEL法检测犬心肌凋亡率 |
| 4.3.6.2 犬免疫组化结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（7）TRPC6在SAD大鼠血压变异性中的作用研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 实验材料与方法 |
| 2 研究结果 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 血压变异性与TRPC6的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间的研究成果 |
（8）艾灸及艾烟改善动脉粥样硬化的细胞自噬机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 细胞自噬在动脉粥样硬化发病机制中的作用研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 艾灸疗法防治高脂血症并动脉粥样硬化症的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述三 中医药疗法调控自噬机制防治心血管疾病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一章 艾灸及艾烟对APOE~(-/-)小鼠AS斑块、血脂及一般状况的实验研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二章 艾灸及艾烟对APOE~(-/-)小鼠AS斑块稳定性的实验研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三章 艾灸及艾烟对APOE~(-/-)小鼠自噬特异性的实验研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第四章 艾灸及艾烟调控APOE~(-/-)小鼠自噬信号通路及细胞凋亡的实验研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 1. 动物模型的选择 |
| 2. 艾灸疗法改善AS过程中自噬水平的作用机制 |
| 3. 艾灸改善自噬调控AS斑块稳定性的作用机制 |
| 4. 艾燃烧生成物的生物效应 |
| 结语 |
| 创新与展望 |
| 创新点 |
| 研究不足与未来研究方向 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（9）经颈动脉插管行K-H液交换的离体心脏制备技术（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验对象与分组 |
| 1.1.2 实验主要器械 |
| 1.1.3 实验方案设计 |
| 1.1.4 离体心脏制备及灌注技术 |
| 1.1.5 检测指标 |
| 1.1.6 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 经颈动脉K-H液灌注示意图 |
| 1.2.2 心脏复跳情况比较 |
| 1.2.3 心率变化情况比较 |
| 1.2.4 心律失常情况比较 |
| 1.2.5 冠脉流量比较 |
| 1.2.6 左心室压力参数变化比较 |
| 1.2.7 冠脉流出液CK-MB含量和LDH活性比较 |
| 1.2.8 心肌组织病理结构变化比较 |
| 1.2.9 心肌细胞凋亡比较 |
| 1.2.10 离体心脏存活时间比较 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 关于改进技术的优势及实验结果的解释 |
| 1.3.2 关于提高改进技术的操作成功率的注意事项 |
| 1.3.3 关于本实验的研究价值和发展 |
| 1.3.4 关于本实验的尚待改进之处 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 离体心脏技术相关研究进展及展望 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）GCN2在有氧运动减轻阿霉素诱导的小鼠心肌损伤中的作用和机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 1 研究背景 |
| 2 研究目的和意义 |
| 3 研究假设 |
| 4 研究假设图 |
| 5 研究技术路线图 |
| 6 参考文献 |
| 文献综述 |
| 1 阿霉素诱导的心肌损伤介绍 |
| 2 运动防治阿霉素诱导的心肌损伤的证据和机制 |
| 3 运动防治阿霉素诱导的心肌损伤的问题和未来方向 |
| 4 eIF2α激酶和心血管疾病 |
| 5 结论和展望 |
| 6 参考文献 |
| 第一部分 有氧运动对阿霉素诱导的C57小鼠心肌损伤的影响和对GCN2的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 动物和实验设计 |
| 2.2 阿霉素注射方案 |
| 2.3 有氧运动方案 |
| 2.4 超声心动图测试方案 |
| 2.5 运动能力测试方案 |
| 2.6 心脏组织的病理学评估 |
| 2.7 Western Blot |
| 2.8 统计 |
| 3 结果 |
| 3.1 有氧运动和阿霉素干预对C57小鼠的体重影响 |
| 3.2 有氧运动减轻阿霉素诱导的C57小鼠运动能力的下降 |
| 3.3 有氧运动减轻阿霉素诱导的C57小鼠心功能的下降 |
| 3.4 有氧运动减轻阿霉素诱导的C57小鼠心肌纤维化 |
| 3.5 有氧运动对C57 小鼠心肌GCN2和P-eIF2α/eIF2α/ATF4 蛋白表达的影响 |
| 3.6 有氧运动减轻阿霉素诱导的C57小鼠心肌凋亡和心功能相关蛋白的表达 |
| 3.7 有氧运动减轻阿霉素诱导的C57小鼠心肌能量代谢功能相关蛋白的表达 |
| 3.8 有氧运动减轻阿霉素诱导的C57小鼠心肌纤维化相关蛋白的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 6 参考文献 |
| 第二部分 有氧运动对阿霉素诱导的GCN2基因敲除小鼠心肌损伤的影响和机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 动物和实验设计 |
| 2.2 阿霉素注射方案 |
| 2.3 有氧运动方案 |
| 2.4 超声心动图测试方案 |
| 2.5 运动能力测试方案 |
| 2.6 心脏组织的病理学评估 |
| 2.7 Western Blot |
| 2.8 统计 |
| 3 结果 |
| 3.1 有氧运动和阿霉素干预对GCN2基因敲除小鼠的体重影响 |
| 3.2 有氧运动减轻阿霉素诱导的GCN2基因敲除小鼠运动能力下降 |
| 3.3 有氧运动减轻阿霉素诱导的GCN2基因敲除小鼠心功能下降 |
| 3.4 有氧运动减轻阿霉素诱导的GCN2基因敲除小鼠心肌纤维化 |
| 3.5 有氧运动对GCN2 基因敲除小鼠GCN2和P-eIF2α/eIF2α/ATF4 蛋白表达的影响 |
| 3.6 有氧运动减轻阿霉素诱导的GCN2基因敲除小鼠凋亡和心功能相关蛋白的表达 |
| 3.7 有氧运动减轻阿霉素诱导的GCN2基因敲除小鼠能量代谢功能相关蛋白的表达 |
| 3.8 GCN2基因敲除促进有氧运动对阿霉素诱导的小鼠心肌损伤的减轻作用 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 6 参考文献 |
| 第三部分 GCN2激活对有氧运动调节阿霉素诱导的心肌损伤的影响和机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 动物和实验设计 |
| 2.2 阿霉素注射方案 |
| 2.3 有氧运动方案 |
| 2.4 超声心动图测试方案 |
| 2.5 运动能力测试方案 |
| 2.6 心脏组织的病理学评估 |
| 2.7 Western Blot |
| 2.8 亮氨酸缺乏饮食方案 |
| 2.9 统计 |
| 3 结果 |
| 3.1 GCN2激活减弱有氧运动对小鼠运动能力的改善作用 |
| 3.2 GCN2激活减弱有氧运动对小鼠心功能的改善作用 |
| 3.3 GCN2激活减弱有氧运动对小鼠心肌纤维化的改善作用 |
| 3.4 GCN2 激活对小鼠心肌P-eIF2α/eIF2α和 ATF4 蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 6 参考文献 |
| 全文总结 |
| 附录 |
| 1.本科至研究生学习经历 |
| 2.攻读博士期间科研成果 |
| 致谢 |
四、High-level apoptosis is persistent in myocardiocytes of sinoaortic-denervated rats（论文参考文献）
- [1]自噬介导运动改善心血管疾病的研究进展[J]. 陈明健,李婷,候鹏程,杨雯茜,陈青. 生命科学, 2021
- [2]绝经后高血压患者中医证型分布特点及淫羊藿苷干预的相关机制研究[D]. 袁晶. 北京中医药大学, 2021(02)
- [3]肥大细胞参与右美托咪定心脏保护效应的炎性调控机制研究[D]. 熊伟. 昆明医科大学, 2021
- [4]基于TXNIP/NLRP3途径研究益气活血药对心梗后内质网应激诱发细胞焦亡的影响[D]. 王惠. 北京中医药大学, 2021(02)
- [5]Adropin在高血压心肌重构中的作用及机制研究[D]. 胡欢. 南昌大学, 2021(01)
- [6]五味子醇甲对心肌肥大损伤的保护作用研究[D]. 杨敏. 中国农业科学院, 2020
- [7]TRPC6在SAD大鼠血压变异性中的作用研究[D]. 王玉. 重庆医科大学, 2020(01)
- [8]艾灸及艾烟改善动脉粥样硬化的细胞自噬机制研究[D]. 哈略. 北京中医药大学, 2020(04)
- [9]经颈动脉插管行K-H液交换的离体心脏制备技术[D]. 郭书栋. 天津医科大学, 2020(06)
- [10]GCN2在有氧运动减轻阿霉素诱导的小鼠心肌损伤中的作用和机制[D]. 孙忠广. 上海体育学院, 2019(12)