一、蜂胶黄酮类提取物对培养心肌细胞氧化损伤的保护作用(论文文献综述)
潘瑶[1](2021)在《日常膳食中四种水果/蔬菜提取物及其中四种主要的植物化学物相互作用规律及机制的探讨》文中指出日常膳食的蔬菜和水果中的植物化学物被认为对氧化应激引起的许多慢性疾病(例如:肿瘤、炎症、糖尿病、动脉粥样硬化等)具有预防作用。不同的植物化学物复配使用被证实可以产生抗氧化相互作用(协同作用、拮抗作用、加和作用)。根据分子结构和溶解性质的不同,可以将植物化学物分为易溶于极性溶剂(例如:水、甲醇、乙醇等)的水溶性植物化学物和易溶于非极性溶剂(例如:氯仿、正己烷、二氯甲烷等)的脂溶性植物化学物。目前为止,有关植物化学物抗氧化相互作用的研究建立在化学模型或仅仅局限于对同种类型植物化学物相互作用的探讨;缺乏对不同类型、比例、浓度的植物化学物抗氧化相互作用规律的深入研究;缺乏考虑生物学机制如细胞吸收、细胞膜转运蛋白、植物化学物作用靶点蛋白等的深入研究。本文以日常膳食中富含不同极性植物化学物的四种水果(桑葚、蓝莓、芒果、西瓜)以及四种蔬菜(茄子、紫薯、胡萝卜、番茄)为研究对象,通过探究极性和非极性提取物复配组合对细胞毒性、细胞内活性氧水平、细胞内抗氧化酶表达、细胞内炎症因子表达的影响,探索果蔬不同极性提取物以不同比例复配后在细胞内抗氧化相互作用的规律;通过高效液相色谱-质谱技术对果蔬提取物中主要的植物化学物成分进行分析鉴定,发现咖啡酸、对香豆酸、β-胡萝卜素、番茄红素为主要的四种极性和非极性植物化学物。以这四种植物化学物为研究对象,研究不同浓度、不同比例及细胞膜受体的不同表达对不同极性的植物化学物抗氧化相互作用的影响及其机制;利用分子对接技术,探索植物化学物作用靶点对抗氧化相互作用的影响。主要研究成果如下:1.以体外抗氧化活性(DPPH、ABTS)为指标,以联合指数(Combination index)为评价方法,探讨不同极性提取物不同比例混合对抗氧化作用的影响。发现水溶性果蔬提取物和脂溶性果蔬提取物以不同的质量比例复配后,当水溶性提取物占据多数时,常表现为抗氧化协同作用(例如:ABTS模型中,桑葚-芒果9:1时,CI25=0.66±0.12,CI<1);当脂溶性植物化学物占据多数时,常表现为抗氧化拮抗作用(例如:ABTS模型中,蓝莓:芒果=1:9时,CI25=1.11±0.09,CI>1)。2.采用H2O2诱导的H9c2细胞模型,以细胞毒性(MTT)、细胞内活性氧(ROS)水平、细胞内总抗氧化能力(CAA)、细胞内抗氧化酶(SOD、CAT、GPx)的表达、细胞内脂质过氧化物(MDA)的水平、细胞内炎症因子(ICAM-1、VCAM-1、IL-6、IL-1β、IL-8、TNF-α)的表达水平为指标,探讨不同极性提取物不同比例混合对抗氧化作用的影响。发现当水溶性提取物占据多数时,复配组常表现为抗氧化协同作用(例如:茄子:胡萝卜=9:1时,细胞内ROS水平胞内活性氧水平为30.37±0.25,显着低于单独茄子组34.34±0.36和单独胡萝卜组46.23±0.51)。另一方面,当脂溶性提取物占据多数时,复配组常表现为抗氧化拮抗作用(例如:番茄:紫薯=7:3时,细胞内ROS水平为68.21±0.95,显着高于单独番茄组34.51±0.76和单独紫薯组34.21±0.68)。3.通过超高效液相色谱及高效液相色谱串联飞行时间质谱技术鉴定了果蔬提取物中的主要植物化学物,利用主成分分析方法(PCA)分析主要植物化学物与抗氧化相互作用的关系。研究发现果蔬的水溶性提取物中主要植物化学物成分是花色苷、酚酸、黄酮类物质,而果蔬脂溶性提取物中主要活性成分是β-胡萝卜素和番茄红素。对抗氧化协同作用可能具有关键影响的物质有飞燕草素、矢车菊素、咖啡酸、对香豆酸、没食子酸等;对抗氧化拮抗作用可能具有关键影响的物质有β-胡萝卜素和番茄红素。4.采用H2O2诱导的H9c2细胞模型,以细胞毒性(MTT)、细胞内活性氧(ROS)水平、细胞内总抗氧化能力(CAA)、细胞内抗氧化酶(SOD、CAT、GPx)的表达、细胞内脂质过氧化物(MDA)的水平、细胞内乳酸脱氢酶泄露率(LDH)为指标,探究四种植物化学物(咖啡酸、对香豆酸、番茄红素、β-胡萝卜素)以不同浓度、摩尔质量比例复配后抗氧化相互作用的规律。研究发现当总浓度一定而水溶性植物化学物占比多时,复配组易表现出抗氧化协同作用;当脂溶性植物化学物占比多时,复配组易表现出抗氧化拮抗作用。当复配比例一定时,抗氧化相互作用随着总浓度的升高发生变化。例如:对香豆酸:β-胡萝卜素=1:9的复配组在3.0μM时表现为抗氧化拮抗作用(协同率SR:-11.68±1.25,SR<0),然而该组合在同一比例下、总浓度0.5μM时表现为抗氧化协同作用(协同率SR:12.27±3.24,SR>0)。5.采用H2O2诱导的H9c2细胞模型,探究细胞膜转运蛋白(SR-BI和CD36)表达在不同水平时,咖啡酸/对香豆酸对β-胡萝卜素和番茄红素的细胞吸收率、细胞内细胞膜转运蛋白表达、细胞内ROS水平、细胞内Nrf2/HO-1信号通路的影响。研究发现,在SR-BI和CD36的蛋白表达被抑制剂抑制下咖啡酸/对香豆酸可以上调其表达,提高β-胡萝卜素和番茄红素的细胞吸收率,降低细胞内ROS水平、上调Nrf2蛋白在细胞核中的积累,促进其下游抗氧化蛋白(HO-1、GCLC、NQO1)的表达。这一现象可能是四种植物化学物抗氧化协同作用的机制之一。6.利用分子对接技术,探究咖啡酸、对香豆酸以及β-胡萝卜素和番茄红素的氧化产物与Keap1蛋白BTB/Kelch结构域的相互作用与可能的空间构象变化。研究发现当类胡萝卜素的氧化产物(OPC)与BTB结构域优先结合后,酚酸便很难与BTB-OPC结合,这可能导致Nrf2在细胞核中的积累量减少,从而下调Nrf2下游抗氧化基因表达,使抗氧化能力下降。当咖啡酸/对香豆酸与Kelch结构域优先结合后,此时,类胡萝卜素的氧化产物与Kelch-酚酸复合物结合能力下降,从而使得Nrf2与Keap1的结合受到竞争性抑制,增加游离的Nrf2进入细胞核,上调下游抗氧化基因的表达,使抗氧化能力升高。这一研究表明Keap1蛋白上的BTB或Kelch结构域可能分别极性不同的植物化学物优先结合,从而影响进入细胞核的游离Nrf2浓度,进而影响抗氧化能力。这一现象可能是影响本研究中极性不同的四种植物化学物抗氧化相互作用的机制之一。
杨硕[2](2021)在《艾蒿醇提物对脂多糖刺激的肉仔鸡生长、免疫和抗氧化功能的影响及其机理研究》文中研究指明本试验通过体内试验和体外试验相结合的方法,探讨艾蒿醇提物(Artemisia argyi alcohol extract,AAAE)对肉仔鸡生长、免疫和抗氧化功能的影响及其作用机理。主要研究内容及结果如下:第一部分:艾蒿醇提物对肉仔鸡血清免疫和抗氧化指标的影响试验采用单因子随机区组试验设计。共选择240只1日龄爱拔益加(AA)肉仔鸡,按照初始体重相近原则随机分为5个处理组,每个处理包括6个重复,每个重复包括8只鸡。饲喂5种日粮,该5种日粮是在基础日粮的基础上分别添加0、250、500、750和1000 mg/kg的AAAE。试验分为前期(1-21 d)和后期(22-42 d),共42d。结果表明:试验后期,日粮添加750 mg/kg的AAAE极显着提高肉仔鸡ADG,且随AAAE添加量的增加,ADFI呈极显着一次线性降低;日粮中添加适宜剂量(500-1000 mg/kg)的AAAE显着增加肉仔鸡血清中免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)、抗炎细胞因子(IL-2和IL-4)含量以及抗氧化酶(CAT和SOD)活性,并且显着降低血清促炎细胞因子(IL-1β和IL-6)及MDA含量。综合考虑,750 mg/kg的AAAE促进肉仔鸡免疫和抗氧化功能的效果更理想。第二部分:艾蒿醇提物对LPS刺激的肉仔鸡生长、免疫和抗氧化功能的影响及其机理研究试验采用2×2二因子试验设计,分别为2个日粮AAAE添加水平(0和750 mg/kg日粮)和2个LPS水平(0和750(?)g/kg体重)。共选取体重相近的192只1日龄AA肉仔鸡随机分为4个处理,每个处理6个重复,每个重复8只鸡。试验共42 d,分为预饲期(0-14 d)、应激Ⅰ期(15-21 d,LPS注射期)、恢复Ⅰ期(22-28 d)、应激Ⅱ期(29-35 d,LPS注射期)和恢复Ⅱ期(36-42 d)。处理1和处理2饲喂基础日粮,处理3和处理4饲喂试验日粮(基础日粮中添加750 mg/kg AAAE)。分别在应激Ⅰ期(试验第15、17、19、21 d)和应激Ⅱ期(试验第29、31、33、35 d)给处理1和处理3组的肉仔鸡腹腔注射750(?)g/kg体重的LPS溶液(LPS溶于生理盐水中配制成浓度为100(?)g/m L的LPS溶液),处理2和处理4组注射等量的生理盐水。结果表明:(1)在LPS刺激期(15-21,29-35 d),日粮中添加AAAE可显着缓解因LPS刺激导致的肉仔鸡ADG、ADFI、营养物质(DM、CP、Ca)表观代谢率、HDL-C及十二指肠VH/CD的降低,及血清ALT、LDL-C、血细胞参数(RBC、WBC、LYM、PLT)、应激激素(CORT、ACTH)的升高;(2)添加AAAE可显着缓解因LPS刺激引起的肉仔鸡肝脏IL-1β、IL-6、IgG含量和NF-κB p65、IL-1β基因表达,十二指肠IL-2含量和TLR4、IL-1β基因表达,空肠IL-6含量和My D88、NF-κB p65、IL-1β基因表达,回肠IL-1β、IL-4、IgM含量和TLR4基因表达水平以及TLR4/NF-κB信号通路中关键因子NF-κB p65和IκBα蛋白表达和磷酸化水平的升高。(3)添加AAAE显着缓解因LPS刺激导致的肉仔鸡血清CAT、SOD活性,肝脏SOD、GSH-Px活性和Nrf2、CAT、SOD、GSH-Px、HO-1基因表达,脾脏、十二指肠、空肠和回肠Nrf2、CAT、SOD、GSH-Px基因表达及回肠CAT活性的降低,并显着降低血清和组织中MDA含量。此外,AAAE增加了组织中Nrf2、HO-1和SOD蛋白表达水平,并显着降低Keap1蛋白表达水平。这些结果提示:AAAE能够增强肉仔鸡血清和组织的免疫及抗氧化能力,从而缓解LPS诱导的肉仔鸡免疫应激损伤,其作用机制可能与TLR4/NF-κB和Keap1/Nrf2通路有关。第三部分:艾蒿醇提物中黄酮的分离、纯化及其对肉仔鸡外周血淋巴细胞免疫和抗氧化功能的影响通过聚酰胺-大孔树脂联用分离纯化艾蒿醇提物中的艾蒿黄酮(Artemisia argyi flavonoids,AAF),用于外周血淋巴细胞(Peripheral blood lymphocytes,PBLs)培养试验。试验采用单因素完全随机试验设计,共设6个AAF添加水平(0、25、50、100、200、400(?)g/m L),每个处理6个重复。结果表明:(1)添加50和100(?)g/m L AAF可显着增强淋巴细胞活力;(2)添加100和200(?)g/m L AAF显着降低细胞培养液中IL-1β含量及PBLs中IL-1β基因表达;25、200(?)g/m L和100(?)g/m L AAF剂量组分别增加了IL-2和IgG含量。另外,添加50和100(?)g/m L AAF显着降低TLR4、NF-κB p65基因表达;(3)添加100(?)g/m L AAF显着增加细胞培养液中GSH-Px、CAT、SOD活性并降低MDA含量,而且上调淋巴细胞中Nrf2、HO-1、SOD、CAT和GSHPx基因表达。综合考虑,添加100(?)g/m L AAF对淋巴细胞免疫和抗氧化作用效果最理想。第四部分:艾蒿黄酮通过TLR4/NF-κB信号通路调节肉仔鸡外周血淋巴细胞免疫功能的机理研究在第三部分研究的基础上,采用单因素完全随机试验设计,以LPS诱导淋巴细胞建立免疫应激模型,利用NF-κB抑制剂(PDTC),从NF-κB信号通路探究AAF对淋巴细胞遭受应激损伤的缓解作用。将PBLs随机分成6个处理(每个处理6个重复),分别是:空白对照组、LPS处理组、AAF处理组、LPS+PDTC处理组、LPS+AAF处理组和LPS+AAF+PDTC处理组。结果显示:(1)LPS+PDTC和LPS+AAF处理均显着降低了培养液中IL-1β和IL-4含量,并显着增加IgG和IgM含量。(2)与LPS组相比,LPS+PDTC组和LPS+AAF组中TLR4、My D88、NF-κB p65、NF-κB p50、IL-1β和IL-6基因表达显着降低,且NF-κB p65的蛋白表达和IκBα磷酸化水平显着降低。这表明AAF对LPS诱导的细胞应激损伤的保护作用能够通过调控NF-κB信号通路下游的IL-1β基因表达来减少炎性因子的释放。第五部分:艾蒿黄酮通过Keap1/Nrf2信号通路调节肉仔鸡外周血淋巴细胞抗氧化功能的机理研究采用单因素完全随机试验设计,以LPS诱导淋巴细胞建立免疫应激模型,利用Nrf2抑制剂(ML385),从Nrf2信号通路探究AAF对应激损伤的淋巴细胞的抗氧化作用。将PBLs随机分成6个处理(每个处理6个重复),分别是:空白对照组、LPS处理组、AAF处理组、LPS+ML385处理组、LPS+AAF处理组和LPS+AAF+ML385处理组。结果显示:LPS+ML385和LPS+AAF处理显着增加LPS刺激的细胞培养液中GSH-Px和SOD活性,降低MDA含量。与LPS应激组相比,LPS+ML385和LPS+AAF组中Nrf2、HO-1、GSH-Px和SOD的基因表达均显着增加,并显着降低Keap1蛋白表达水平。这表明AAF能够通过调控Keap1/Nrf2信号通路的激活,来缓解LPS刺激对淋巴细胞的损伤。
朱穆峰[3](2021)在《定心藤提取物减轻H2O2诱导的H9c2心肌细胞损伤作用及机制研究》文中研究指明目的:通过外源性给予H2O2刺激建立H9c2心肌细胞氧化损伤模型,研究定心藤提取物TL(3α-5α-tetrahydrodeoxycordifoline lactam)减轻H2O2诱导的H9c2心肌细胞氧化损伤及细胞凋亡的作用,探讨该作用是否通过激活MAPK信号传导通路中p-ERK1/2、p-JNK及p-p38蛋白表达,以及抗氧化途径而完成的。为今后定心藤临床治疗心血管疾病提供一定的科学研究依据。方法:1.药效研究分组H9c2心肌细胞随机分组为:Control组、H2O2组、H2O2+NAC组和H2O2+TL(20,60,200μg/m L)组。H2O2刺激2 h后采用MTS法检测吸光度值检测细胞存活率,ELISA试剂盒测定细胞培养液中LDH活力,H2O2刺激24 h后使用流式细胞术测定心肌细胞凋亡率。2.机制研究分组细胞随机分组为:Control组、TL组、H2O2刺激组和H2O2+TL组。H2O2刺激2 h、8 h、24 h后用ELISA试剂盒测定细胞内SOD活力及细胞培养液中的LDH漏出量,用Western blot法检测细胞中p-JNK、JNK、p-p38和p38蛋白表达水平。H2O2刺激3 min、10 min、30 min后用Western blot法检测细胞中p-ERK1/2和ERK1/2蛋白表达水平。3.抑制剂研究分组细胞随机分组:Control组、H2O2组、H2O2+TL组、H2O2+TL+ERK抑制剂组和H2O2+ERK抑制剂组。H2O2刺激30 min后采用Western blot法检测细胞中p-ERK1/2和ERK1/2蛋白表达水平,H2O2刺激24 h后采用流式细胞术测定心肌细胞凋亡率,H2O2刺激2 h后用MTS法检测细胞存活率。结果:1.定心藤提取物减轻H2O2诱导的H9c2心肌细胞损伤的作用与Control组相比较,给予H2O2刺激后可有效降低心肌细胞存活率;细胞培养液中LDH含量明显升高;细胞内SOD活力显着降低;细胞凋亡数量明显增加。H2O2可有效诱导H9c2心肌细胞氧化损伤及细胞凋亡。与H2O2组相比较,定心藤提取物预处理使心肌细胞存活率升高;培养液中LDH含量显着降低;细胞内SOD活力明显升高;细胞凋亡率明显降低。在定心藤提取物浓度为60μg/m L时效果最显着,定心藤提取物减轻了H2O2诱导的心肌细胞氧化损伤及细胞凋亡。2.定心藤提取物减轻H2O2诱导的H9c2细胞损伤的机制与Control组比较,给予H2O2刺激后p-ERK1/2蛋白水平表达明显下降;p-p38、p-JNK蛋白表达上升。与H2O2组比较,定心藤提取物预处理2 h后p-ERK1/2蛋白表达上升;p-p38、p-JNK蛋白表达降低。与定心藤处理组比较,PD98059处理1 h后细胞p-ERK1/2蛋白表达降低,细胞凋亡率明显升高,细胞存活率明显降低。结论:定心藤提取物对H2O2诱导的H9c2心肌细胞损伤与凋亡具有保护作用,其作用机制可能与抗氧化途径和激活MAPK信号通路中的p-ERK1/2、p-p38、p-JNK蛋白表达有关。
郝光[4](2020)在《蓝刺头黄酮对C2C12骨骼肌细胞和Ⅱ型糖尿病模型小鼠胰岛素抵抗作用及机制研究》文中认为胰岛素抵抗(IR)是Ⅱ型糖尿病(T2DM)的一个重要发病机制,是由各种因素导致胰岛素类靶器官对葡萄糖摄取和利用率降低,进而引发高血糖。因此,研究胰岛素抵抗的发生机制,以及研发改善胰岛素抵抗的药物已成为当前防治糖尿病的热点之一。多种植物黄酮类化合物在此方面具有较好的生物学效应,蓝刺头黄酮作为其中之一种,同样具有多种生理功能,然目前国内外关于蓝刺头黄酮对胰岛素抵抗作用研究尚未见报道。为探究蓝刺头黄酮对Ⅱ型糖尿病模型小鼠胰岛素抵抗改善作用及其机制,本试验通过响应面分析法优化了蓝刺头黄酮(ELTF)的提取方案,通过RT-PCR和Wester blot检测ELTF作用体外试验构建胰岛素抵抗小鼠C2C12骨骼肌细胞模型、体内试验高脂高糖+链脲佐菌素构建实验性Ⅱ型糖尿病小鼠胰岛素抵抗模型肌肉组织相关基因的表达情况。结果显示:1、本试验通过响应面分析法优化了蓝刺头黄酮的提取方案:具体参数为无水乙醇、提取时间为120min、料液比为1:50、提取温度为65℃,实验得率为7.18%。2、蓝刺头醇提物经5kDa中空纤维素膜过滤、乙酸乙酯3次萃取、等体积水饱和正丁醇3次萃取、乙醇处理30~80目聚酰胺粉过滤后得蓝刺头黄酮纯度为 84.8%。3、通过马血清培养基培养C2C12小鼠成肌细胞4d后分化成为小鼠C2C12骨骼肌细胞;在试验最大安全浓度内,通过棕榈酸诱导的小鼠C2C12骨骼肌细胞产生胰岛素抵抗效应的最适浓度为0.2mmol/L。4、使用CCK-8法评定ELTF作用24h的最大安全浓度为200μg/mL;试验各ELTF剂量组作用24h后与模型组相比,可显着增强胰岛素抵抗型小鼠C2C12骨骼肌细胞耗糖量(P<0.05)。5、使用RT-qPCR检测小鼠C2C12骨骼肌细胞mRNA表达,与模型组相比ELTF 可提高AMPK、GLUT4、IRS-1、Pparγ、PI3 Knase p85mRNA 表达量(P<0.05);使用Western Blot试验检测相关蛋白的表达,与模型组相比ELTF各剂量组可显着提高AMPK表达量(P<0.05)、ELTF低剂量组可显着提高GLUT4表达量(P<0.05)、ELTF低、中、高剂量组可显着提高IRS-1表达量(P<0.05)、ELTF低剂量组可显着升高Ppary表达量(P<0.05)、ELTF低剂量组可提高PI3 Knasep85表达量。6、使用ELTF作用实验性Ⅱ型糖尿病小鼠28d,与空白对照组体重相比较,实验性Ⅱ型糖尿病模型组体重显着降低(P<0.05),ELTF高、中、低剂量组、二甲双胍组体重均降低,其中高、低剂量组差异显着(P<0.05);与空白对照组相比较,糖尿病模型组、ELTF高、中、低剂量组、二甲双胍组血糖均升高,差异显着(P<0.05);与模型组相比,阳性药物组和ELTF高、中、低剂量组显着降低(P<0.05)。与空白对照组相比较,糖尿病模型组TC、TG和LDL含量显着升高(P<0.05);HDL含量降低不显着(P>0.05);与糖尿病模型组相比,ELTF高、中、低剂量组、二甲双胍组TC、TG、LDL、HDL含量均升高或降低不显着(P>0.05)。7、使用RT-qPCR检测Ⅱ型糖尿病模型小鼠骨骼肌mRNA表达,与模型组相比 ELTF 可提高AMPK、GLUT4、IRS-1、Ppary、PI3 Knasep85mRNA 的表达量(P<0.05);使用Western Blot试验检测相关蛋白表达,与模型组相比ELTF高剂量组可显着提高AMPK表达量(P<0.05)、ELTF低、高剂量组可显着提高GLUT4表达量(P<0.05)、ELTF各剂量组可显着提高IRS-1表达量(P<0.05)、ELTF低剂量组可显着升高Ppary表达量(P<0.05)、ELTF高剂量组可提高PI3 Knasep85 表达量(P>0.05)。结论:1、蓝刺头黄酮的提取方案为无水乙醇、提取时间为120min、料液比为1:50、提取温度为65℃,实验得率为7.18%。蓝刺头醇提物经中空纤维素膜过滤,再用乙酸乙酯萃取3次,再用等体积水饱和正丁醇萃取3次,再用乙醇处理30~80目聚酰胺粉过滤最终可得到纯度为84.8%的黄酮2、ELTF可显着增强由棕榈酸诱导的胰岛素抵抗型小鼠C2C12骨骼肌细胞的耗糖量。ELTF可改善Ⅱ型糖尿病模型小鼠血脂情况,降低Ⅱ型糖尿病模型小鼠血糖,有效的改善Ⅱ型糖尿病模型小鼠胰岛素抵抗状态。3、ELTF可通过调节相关AMPK信号通路基因及蛋白的调控而改善骨骼肌细胞胰岛素抵抗及Ⅱ型糖尿病模型小鼠胰岛素抵抗。
郑宇斐[5](2020)在《中国蜂胶及其黄酮类单体抗黑素瘤作用及其机制》文中认为黑素瘤是一种发展极为迅速的恶性皮肤病,具有发展迅速、恶性程度高、预后差、致死率高等特点。早期黑素瘤患者的5年存活率高达92%,但是黑素瘤一旦开始转移,患者的5年存活率迅速下降至15%。目前虽然关于黑素瘤研究已经有了一定的进展,然而针对黑素瘤的主要治疗方法效果并不显着,并且受到严重的副作用和黑素瘤耐药性的困扰。因此,对黑素瘤相关治疗药物和手段的研究仍是目前癌症研究的一个重点和热点。蜂胶是蜜蜂采集植物芽孢及伤口胶质物混合自身上颚腺分泌物而成的一种蜂产品,具有多种生物学活性,包括抗菌、抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。在抗肿瘤方面,有文献指出中国蜂胶可以有效地诱导包括乳腺癌、结肠癌在内的多种肿瘤发生细胞凋亡和周期阻滞,也是近几年蜂胶药理学研究的热点之一。基于蜂胶的前期抗肿瘤研究,本研究利用细胞模型和小鼠模型,系统性地探究了中国蜂胶及其黄酮类单体(松属素和柯因)对黑素瘤增殖、转移、自噬等方面的影响及其相关机制,以期揭示中国蜂胶的抗黑素瘤作用,为蜂胶的应用提供理论基础,也为黑素瘤的治疗提供新的思路。主要研究结果如下:1中国蜂胶对黑素瘤的发展影响研究我们首次证明了中国蜂胶对黑素瘤细胞系A375的促凋亡作用和抑制转移作用并揭示其分子机制。在经中国蜂胶处理后,A375细胞发生内源性凋亡和细胞周期阻滞。在此基础上,我们发现中国蜂胶在黑素瘤细胞中也能发挥其出色的抗炎作用,caspase-1和caspase-4表达水平降低,同时伴随着IL-1α、IL-1β和IL-18 mRNA水平的下降,进一步证明了中国蜂胶对黑素瘤炎性微环境的保持有抑制作用。我们还发现中国蜂胶可以在A375细胞中激活自噬,而抑制自噬会减弱中国蜂胶对黑素瘤的促凋亡作用,这也说明了自噬的发生增强了中国蜂胶对黑素瘤的细胞毒作用。此外,我们的实验结果证明中国蜂胶能减弱黑素瘤在体外的迁移能力。2中国蜂胶抗黑素瘤单体活性成分筛选利用高效液相色谱,我们确定了本实验中使用的中国蜂胶的主要功能性成分,包括咖啡酸、p—香豆酸、阿魏酸、异阿魏酸、肉桂酸、山奈酚、杨梅桐、槲皮素、3,4-二甲氧基肉桂酸、芹菜素、短叶松素、柯因、松属素、高良姜素、咖啡酸苯乙酯和3-O-乙酰基短叶松素等。利用CCK-8实验,我们比较这其中高含量的功能性单体对黑素瘤细胞的细胞毒性,结果显示松属素、咖啡酸苯乙酯、柯因、短叶松素、芹菜素、咖啡酸二甲醚对黑素瘤的细胞活性都有一定的抑制作用。3中国蜂胶活性成分松属素抗黑素瘤作用研究利用体内外模型进一步检测并探究了松属素对黑素瘤的抗肿瘤作用及其相关机制。在细胞实验中,我们发现松属素能诱导黑素瘤细胞(B16F10和A375)发生凋亡,并呈现浓度相关性。对凋亡调控通路的研究显示,松属素通过激活IRE1α/Xbp1通路引发内质网应激,从而活化下游蛋白caspase-12(鼠源细胞)/caspase-4(人源细胞)介导黑素瘤细胞凋亡。此外,我们的结果还显示松属素通过激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制黑素瘤细胞中自噬的发生,增强了松属素对黑素瘤的促凋亡作用。在小鼠成瘤模型中,松属素显着抑制了黑素瘤在小鼠体内的生长,并且在肿瘤组织中我们检测到了高水平的凋亡信号。4中国蜂胶活性成分柯因抑制黑素瘤转移效果研究我们证明了柯因可以有效抑制黑素瘤转移。通过细胞实验我们发现,在低浓度时,柯因也表现出了对黑素瘤细胞转移、侵袭和促血管生成能力很好的抑制作用。同时,柯因抑制了黑素瘤细胞的失巢凋亡抵抗,增加了其在转移过程中的凋亡率。进一步实验表明柯因通过下调FOXM1/β-catenin通路逆转了黑素瘤细胞上皮细胞间充质转化过程,而过表达FOXM1则会减弱柯因的抗黑素瘤转移作用。我们同时也在小鼠模型上验证了细胞实验的发现。利用肺转移模型,我们证明柯因处理能明显降低小鼠肺转移肿瘤的出现几率,同时在肺部肿瘤组织中,柯因治疗组FOXM1的表达量也更低。综上所述,本论文系统地研究了中国蜂胶的抗黑素瘤作用及其相关机制,有助于中国蜂胶的进一步开发与利用;通过研究中国蜂胶中主要功能活性单体的抗黑素瘤作用及其相关机制,揭示了中国蜂胶抗黑素瘤的物质成分基础,也为黑素瘤治疗药物开发提供了参考。
卢燕珊[6](2020)在《蜂胶黄酮类化合物的提取分离及其生物活性研究》文中研究指明蜂胶是由蜜蜂采集的树脂和其腺体分泌物等形成的一种黏性胶状固体物质。目前有关中国湖北孝感蜂胶方面的研究尚未见相关文献报道。黄酮类化合物是蜂胶中的重要活性物质,它们具有抗氧化、抗微生物、抗癌和免疫调节等多种生物活性。近年来,蜂胶黄酮的抗癌活性日益受到关注并成为研究热点,然而大多数研究都是集中在蜂胶黄酮粗提物或高良姜素和白杨素等单体的活性上,关于短叶松素-3-乙酸酯(PB3A)抗肿瘤活性方面的研究鲜见报道,PB3A对肝癌细胞的毒性作用及其作用机制尚不完全清楚。本论文主要研究了蜂胶黄酮的提取、分离纯化和抗氧化活性以及PB3A的抗肿瘤活性,以期为蜂胶黄酮资源的深度开发利用提供科学依据和理论指导。其主要内容及研究结果如下:1.本文以湖北孝感蜂胶为原料,采用超声强化提取蜂胶总黄酮,考察超声功率、超声时间和乙醇浓度对蜂胶总黄酮提取得率的影响,并采用响应面法优化超声提取工艺条件。实验结果表明,超声强化提取的最佳工艺条件为:超声功率为150 W,超声时间为16 min,乙醇浓度为86%,在该条件下的蜂胶总黄酮提取得率为21.10±0.075%(n=3)。2.采用液质联用技术从蜂胶的醇提物中共鉴定出8种黄酮类化合物和2种酚酸类化合物,分别是槲皮素(m/z 301[M-H]-)、异鼠李素(m/z 315[M-H]-)、山奈酚(m/z 285[M-H]-)、高良姜素(m/z 269[M-H]-)、柯因(m/z 253[M-H]-)、松属素(m/z 255[M-H]-)、短叶松素(m/z 271[M-H]-)、短叶松素-3-乙酸酯(m/z 313[M-H]-)、咖啡酸(m/z179[M-H]-)、咖啡酸苯乙酯(m/z 283[M-H]-)。3.采用制备液相色谱法对蜂胶黄酮类物质进行分离纯化,再利用多种分析技术对分离纯化得到的白色晶体进行纯度分析和结构鉴定。结果表明,通过液相色谱法确定白色晶体(化合物1)的纯度为96.82%,通过质谱、紫外光谱、红外光谱和核磁共振波谱等多种技术确定化合物1为短叶松素-3-乙酸酯。4.采用自由基清除实验研究蜂胶黄酮的抗氧化活性。结果显示,DPPH·、O2-·和ABTS+·的清除率都随着蜂胶黄酮浓度的增加而增大,蜂胶黄酮清除DPPH·、O2-·和ABTS+·的IC50值分别是0.038、0.746和0.006 mg/mL,表明蜂胶黄酮具有一定的DPPH·、O2-·和ABTS+·清除能力,因此说明蜂胶黄酮具有一定的抗氧化活性。5.采用细胞毒性检测实验(MTT法)研究PB3A对人肝癌细胞Hep G2、人宫颈癌细胞Hela、人肺癌细胞NCI-H460和人正常肝细胞LO2的毒性并通过细胞划痕、AO/EB双染和Hoechst 33258染色等实验研究PB3A对HepG2细胞迁移能力及其形态的影响,然后采用caspase-3活性检测实验研究PB3A诱导HepG2细胞凋亡的作用机制。细胞毒性检测结果显示,PB3A能够显着地抑制HepG2、Hela和NCI-H460细胞的生长,PB3A对HepG2、Hela和NCI-H460细胞的IC50值分别是79.2、133.5和148.3μM,PB3A对LO2细胞的毒性作用较弱,其IC50值为2245.4μM,这些结果表明PB3A对HepG2、Hela和NCI-H460细胞有较强的毒性作用而不损伤正常肝LO2细胞。细胞划痕愈合结果显示,药物处理组的细胞迁移速率减慢,表明PB3A能够降低Hep G2细胞迁移能力。AO/EB双染和Hoechst 33258染色结果表明,药物处理组的细胞发生了核DNA凝聚固缩等形态学变化,因此说明PB3A通过细胞凋亡的途径诱导Hep G2细胞死亡。caspase-3活性检测结果显示,药物处理组的Hep G2细胞caspase-3活性增强,表明PB3A可能通过激活caspase-3蛋白酶的途径诱导HepG2细胞凋亡。
王倩[7](2020)在《蜂胶黄酮对小鼠铅中毒的保护作用及其机制研究》文中研究表明铅是一种有毒且不可生物降解的重金属元素,因其在不同行业的广泛应用成为影响环境和人类健康的主要威胁之一。长期与铅的接触会对神经、血液、消化等系统产生不利影响,最终导致严重的疾病。因此,铅中毒的治疗一直是科学家们研究的热点。目前,临床主要采用毒性小的二巯丁二酸(DMSA)和2,3-二巯基丙磺酸钠(DMPS)治疗重度铅中毒,而对于中、轻度铅中毒则建议采用天然物质进行治疗和预防,因此寻找安全且具有生理功效的天然产物或药物显得尤为重要。黄酮类化合物是自然界广泛存在的植物次生代谢产物,具有强抗氧化、抗炎、增强免疫等药用功效。蜂胶是一种可用于保健食品的天然产物,因以黄酮化合物为主要有效成分而具有多种生物活性。为了充分开发利用蜂胶资源,本文以蜂胶中常见黄酮类化合物为主要研究对象,通过密度泛函理论和实验分析筛选抗氧化活性强的黄酮类化合物,并以其为代表探究黄酮对铅诱导小鼠肝肾组织损伤的预防性保护作用及机制,以及对肠道菌群紊乱的调节作用。此外,选择蜂胶为材料,研究了蜂胶乙醇提取物对铅诱导小鼠的预防性保护作用。主要研究内容如下:1.采用NBO电荷、解离能和概念DFT等方法,探究蜂胶中常见黄酮类化合物对金属离子配位以及自由基清除的能力。结果表明,杨梅素、槲皮素和木犀草素分子中邻苯二酚结构的羟基H原子具有多的正电荷分布和较小的解离能值易于被自由基进攻和夺取。同时,三种化合物分子均具有较低的分子轨道能隙而且羟基O原子上分布有较多的负电荷,利于与金属离子(M)发生反应并形成稳定的M-O键。2.采用光谱表征、抗氧化能力测定等方法,研究杨梅素、槲皮素和木犀草素的抗氧化能力以及与Pb(Ⅱ)的配位作用。结果表明,杨梅素分子的HOMO轨道在整个分子体系具有较好的分散性,利于与Pb(Ⅱ)之间发生L→M电荷转移,使其UV-Vis光谱显着红移52 nm。根据CDA分析结果可知,杨梅素分子可以向Pb(Ⅱ)的空轨道提供0.549电子,形成稳定的Pb-O键,使其红外光谱在729 cm-1处出现强的ν(Pb-O)。此外,通过FRAP、ABTS和DPPH等方法分析结果表明,杨梅素具有强的铁还原能力和自由基清除能力,其中对DPPH的清除能力高达90.11%。总而言之,杨梅素具有强的抗氧化能力和配位能力,可能成为体内除铅的有效成分,为进一步研究黄酮类化合物对铅暴露小鼠的保护作用提供了理论基础。3.通过分析肾脏组织金属离子水平、氧化应激参数、炎性细胞因子表达水平、肾组织病理学以及肾上皮细胞NF-κB p65阳性细胞表达的变化,研究杨梅素对铅诱导小鼠肾脏损伤的预防性保护作用及机制。结果表明,杨梅素可以有效预防铅暴露肾脏组织铅含量的升高(p<0.05)以及钙铁锌水平的降低;并抑制血清中BUN和CRE含量的升高;同时,有效地降低了MDA含量,并分别提高了SOD活性和GSH含量(p<0.05);此外,杨梅素可通过抑制NF-κB途径介导的炎性反应,显着下调炎性细胞因子表达;并预防肾小球萎缩,缓解肾小管的肿胀和充血现象。4.通过测定小鼠肝脏组织金属离子、氧化应激参数、炎性细胞因子,并对肝脏进行病理学检查和采用免疫组织化学染色法观察肝上皮细胞NF-κB p65阳性细胞表达的变化,研究杨梅素对铅诱导小鼠肝脏损伤的预防性保护作用及机制。结果表明,杨梅素可以有效地预防铅暴露小鼠肝脏组织铅含量的升高(p<0.05)以及钙铁锌水平的降低。杨梅素不但有效抑制血清中ALT和AST含量的升高(p<0.05),同时还可以有效地抑制过量MDA的生成,并提高内源抗氧化物SOD和GSH的水平(p<0.05)。此外,杨梅素可通过抑制NF-κB途径介导的炎性反应,显着下调TNF-α的高表达。小鼠染铅前给予100 mg/kg杨梅素可预防肝索紊乱、肝细胞排列混乱等损伤。5.采用16s rRNA测序法分析小鼠肠内容物的微生物群落,探究杨梅素对铅暴露小鼠肠道菌群紊乱的调节作用。结果表明,铅暴露改变了小鼠肠道菌群的多样性和丰度,而杨梅素能够在属水平上有效地预防Mucispirillum和Candidatus_Arthromitus相对丰度的升高,并增加Adlercreutzia的相对丰度。因此,杨梅素能够有效地调节铅暴露小鼠肠道菌群的丰度和多样性。6.以蜂胶乙醇提取物为研究对象,利用Y迷宫实验、氧化应激等探究蜂胶乙醇提取物对铅诱导小鼠的预防性保护作用,同时用HPLC-DAD分析了蜂胶乙醇提取物中的黄酮类化合物。结果表明,蜂胶乙醇提取物中含有芦丁、杨梅素、桑色素、木犀草素、山奈酚、芹菜素、白杨素和高良姜素等黄酮类化合物。在铅暴露条件下,蜂胶乙醇提取物的预防性干预不仅有效降低铅诱导小鼠肝肾脑组织中的铅水平(p<0.05);同时还可以显着保护小鼠的学习和记忆能力,抑制铅对中枢神经的影响;并且还可有效地预防肝肾脑组织的氧化损伤(p<0.05)。总之,蜂胶乙醇提取物对铅暴露小鼠的预防性保护作用,为进一步开发蜂胶资源提供了理论依据,同时,对可预防机体铅中毒的天然保健食品或药物的进一步研究具有参考价值。
郭静[8](2019)在《不同品种竹叶主要化学成分分析及竹叶牙膏的制备》文中指出目的:本课题对竹叶及其易混淆品种淡竹叶、苦竹叶开展主要化学成分分析和抗氧化活性成分研究,从而优选竹叶为主要原料,考察竹叶最佳提取工艺、蜂胶前处理方法和牙膏成型工艺,制备一款竹叶蜂胶牙膏,并为其初步建立质量标准,为竹叶健康产品的开发奠定基础。方法:首先,采用高效液相色谱法建立竹叶及其易混淆品种淡竹叶、苦竹叶中绿原酸、异荭草苷、荭草苷、异牡荆素等7种成分含量测定的方法,并进行方法学考察。其次,通过比较三种常用的抗氧化活性评价方法,优选DPPH自由基清除法对其活性成分和提取物进行体外抗氧化活性测定。再者,利用多元相关与回归的统计分析方法研究其成分含量与提取物抗氧化能力的相关性,探讨其主要的抗氧化活性成分,并优选出成分含量较高、活性较好的品种。通过单因素考察、正交试验设计和多指标综合评分法确定该品种的最佳提取工艺,再按《中国药典》(2015年版)一部蜂胶项下方法对蜂胶进行了质量研究,通过单因素试验考察了蜂胶的前处理方法,并以感官性状为主要指标优选牙膏最佳配方,合理制备了一款竹叶蜂胶牙膏。结果:1.确定了竹叶及其易混淆品种淡竹叶、苦竹叶的含量控制方法。借助高效液相色谱技术对其进行了成分分析,建立了以绿原酸、异荭草苷、荭草苷、异牡荆素、木犀草苷、木犀草素和芹菜素为指标成分的HPLC含量测定方法,该方法具有良好的准确性和可重复性(RSD<3%)。成分分析结果发现,淡竹叶中含日当药黄素,而苦竹叶和竹叶中均不含日当药黄素。淡竹叶各指标成分整体含量较低,而竹叶中活性成分整体含量较高,多数成分含量均明显高于淡竹叶和苦竹叶,其中异荭草苷含量约为淡竹叶的14倍,异牡荆素含量约为淡竹叶的29倍。2.通过抗氧化活性成分研究确定了优质品种。预试验中分别采用了ABTS法、FRAP法和DPPH法对竹叶及其易混淆品种淡竹叶、苦竹叶的指标成分和提取物的抗氧化能力进行了测定。结果发现,DPPH法稳定性好,可重复性强,数据准确、可靠,被选作本研究中抗氧化活性的评价方法,并以抗坏血酸VC、维生素E类似物Trolox等作为阳性药对照。结果表明,7个指标成分中有4个成分的抗氧化活性强于阳性对照VC(IC50=0.926 m M)和Trolox(IC50=0.973 m M),以木犀草素(IC50=0.422 m M)和木犀草苷(IC50=0.427 m M)抗氧化活性最强。7批淡竹叶清除DPPH自由基的IC50值为5.07±2.67 mg/m L,10批苦竹叶清除DPPH自由基的IC50值为3.24±1.15 mg/m L,9批竹叶清除DPPH自由基的IC50值为1.98±0.42 mg/m L,三者中以竹叶活性最强,且不同产地间差异最小,质量更稳定,为较优品种。多元相关与回归分析结果表明,芹菜素含量与淡竹叶抗氧化活性呈显着性正相关(P<0.01),异荭草苷含量与苦竹叶提取物抗氧化活性呈显着性正相关(P<0.01),荭草苷含量与竹叶提取物抗氧化活性呈显着性正相关(P<0.01)。因此进一步优选产地为浙江衢州(风干)的竹叶为后续产品制备的最佳原料药材。3.通过竹叶提取工艺研究确定了竹叶的最佳提取方法。以指标成分含量、总黄酮含量、DPPH自由基清除率为参考指标,并采用正交试验法、单因素考察法、综合评分法对竹叶进行了提取工艺的优化,确定了竹叶最佳提取工艺:竹叶药材中加入40倍量80%乙醇,浸泡30 min,加热回流提取两次,每次1 h,合并两次提取液,滤过,即得。该工艺条件下得到的提取液总黄酮转移率高达88.08%,DPPH自由基清除率为73.16%,结果稳定(RSD<3%),工艺合理可行。4.通过对蜂胶的质量研究及前处理方法考察,选择了经检验符合《中国药典》(2015年版)规定的合格蜂胶药材,并以适量80%乙醇充分浸提蜂胶得到蜂胶醇溶液,再以适当比例加入竹叶蜂胶牙膏的制备。单因素试验考察结果表明,以80%乙醇处理蜂胶,较药典方法而言,其提取液中各指标成分转移充分,且未见其余成分的明显缺失,结果稳定,方法合理、可行。5.确定了竹叶蜂胶牙膏的制备工艺。本课题选用了湿法溶胶制膏法进行竹叶蜂胶牙膏的制备,优化得到配方工艺为:非离子瓜尔胶0.75 g,羧甲基纤维素钠0.25 g,山梨醇40 g,甘油20 g,尼泊金乙酯0.1 g,尼泊金丙酯0.05 g,糖精钠0.35 g,二氧化硅18 g,十二烷基硫酸钠2 g,薄荷油1 g,水适量,竹叶提取液2 g,蜂胶提取液0.5 g。其制备工艺为:首先取配方量非离子瓜尔胶和羧甲基纤维素钠分散于甘油、山梨醇中,另取尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、糖精钠、提取物预溶于适量水中加入,搅拌、陈化,再依次加入二氧化硅、十二烷基硫酸钠、薄荷油,搅拌、陈化,即得。6.通过质量标准研究确定了竹叶蜂胶牙膏的质量标准(草案)。成品牙膏每支装100 g,外观呈细腻光亮的浅黄色膏体,气芳香,具清凉口感。试验表明,单一成分在牙膏中含量过低无法被准确检测,而黄酮类物质是竹叶和蜂胶中的主要有效成分,且含量较单一成分高,可实现定量研究,故选择以有效组分总黄酮的含量作为竹叶蜂胶牙膏的含测指标,并初步建立了竹叶蜂胶牙膏质量标准。本品每支含有效成分以总黄酮计算,不得少于400 mg。结论:本课题经实验研究,建立了可用于淡竹叶、苦竹叶和竹叶含量控制的方法,初步探索了其抗氧化活性物质基础,优化考察了竹叶的提取工艺、蜂胶的前处理方法和竹叶蜂胶牙膏成型工艺,合理制备了一款竹叶蜂胶牙膏,为竹叶资源的合理利用和竹叶系列健康产品的后续开发打下了坚实基础。
胡福良[9](2017)在《蜂胶的化学成分、质量控制及生物学活性研究进展》文中提出蜂胶是近十多年来蜂产品乃至天然产物研究开发的热点之一。文中对2012年以来国内外有关蜂胶的化学成分、质量控制及生物学活性研究进展进行了综述,旨在为蜂胶的深入研究及开发利用提供参考。
李强强,王凯,梁馨文,吴黎明[10](2017)在《蜂产品中黄酮类化合物的提取工艺及功能活性的研究进展》文中研究说明蜂产品中富含黄酮类化合物,不同蜂产品中黄酮类化合物的种类和含量分布大不相同。黄酮类化合物具有显着的抗菌、抗病毒和抗炎作用等诸多生物活性,因此蜂产品中的黄酮类提取物可用于各类新型食品、药品、保健品的开发,对保障人类健康有重大意义。本文综述了近年来对蜂产品中黄酮类化合物的提取分离纯化工艺及相关功能活性研究,旨在为蜂产品的深入研究提供一定的技术支撑。
二、蜂胶黄酮类提取物对培养心肌细胞氧化损伤的保护作用(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、蜂胶黄酮类提取物对培养心肌细胞氧化损伤的保护作用(论文提纲范文)
(1)日常膳食中四种水果/蔬菜提取物及其中四种主要的植物化学物相互作用规律及机制的探讨(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
缩略词 |
第1章 绪论 |
1.1 引言 |
1.2 膳食中常见的植物化学物 |
1.2.1 脂溶性植物化学物 |
1.2.2 水溶性植物化学物 |
1.3 植物化学物的抗氧化相互作用 |
1.3.1 概述 |
1.3.2 研究现状 |
1.3.3 评价方法 |
1.4 植物化学物的生理活性与浓度的关系 |
1.4.1 剂量与效应关系 |
1.4.2 生理浓度与病理浓度 |
1.4.3 双相剂量效应 |
1.5 植物化学物的生物可利用度和跨膜运输 |
1.5.1 生物可利用度 |
1.5.2 被动扩散 |
1.5.3 主动运输 |
1.6 植物化学物对Nrf2-Keap1-ARE抗氧化信号通路的影响 |
1.6.1 Nrf2-Keap1-ARE信号通路 |
1.6.2 植物化学物与对Nrf2-Keap1-ARE通路的作用 |
1.6.3 植物化学物对Nrf2-Keap1-ARE信号通路下游蛋白表达及氧化产物积累的影响 |
1.7 本课题研究的目的、意义及主要内容 |
1.7.1 课题来源 |
1.7.2 研究目的和意义 |
1.7.3 主要研究内容 |
第2章 果蔬提取物体外抗氧化相互作用的研究 |
2.1 引言 |
2.2 实验材料与设备 |
2.2.1 原料 |
2.2.2 实验材料 |
2.2.3 设备与仪器 |
2.2.4 细胞培养 |
2.3 实验方法 |
2.3.1 不同极性果蔬提取物的制备 |
2.3.2 果蔬提取物的体外抗氧化能力测定 |
2.3.2.1 总酚的测定 |
2.3.2.2 总黄酮的测定 |
2.3.2.3 总花色苷的测定 |
2.3.2.4 总类胡萝卜素的测定 |
2.3.3 体外化学抗氧化相互作用的测定 |
2.3.4 对H9c2 细胞氧化应激的保护作用 |
2.3.4.1 DMSO对 H9c2 细胞的毒性实验 |
2.3.4.2 H_2O_2对H9c2 细胞的毒性实验 |
2.3.4.3 果蔬提取物对H9c2 细胞的毒性实验 |
2.3.4.4 单一/复配的果蔬提取物对H_2O_2诱导的H9c2 细胞保护作用 |
2.3.5 果蔬提取物组合抗氧化相互作用的评价 |
2.4 数据分析 |
2.5 结果与分析 |
2.5.1 单一/复配果蔬提取物在体外化学模型中的抗氧化活性及抗氧化相互作用 |
2.5.2 果蔬提取物组合对H_2O_2诱导的H9c2 细胞的保护作用 |
2.5.3 果蔬提取物组合的比例与抗氧化相互作用的关系 |
2.5.4 果蔬提取物组合筛选 |
2.6 讨论 |
2.7 本章小结 |
第3章 果蔬提取物组合对H_2O_2诱导的H9c2 细胞氧化应激的影响 |
3.1 引言 |
3.2 实验材料与设备 |
3.2.1 原料 |
3.2.2 实验材料 |
3.2.3 设备与仪器 |
3.3 实验方法 |
3.3.1 不同极性果蔬提取物的制备 |
3.3.2 DCFH-DA染色检测细胞内活性氧水平 |
3.3.3 细胞内总抗氧化能力的测定 |
3.3.4 试剂盒检测细胞内抗氧化酶以及脂质过氧化物表达水平 |
3.3.5 Western blot检测细胞内炎症因子表达水平 |
3.4 数据分析 |
3.5 结果与分析 |
3.5.1 果蔬提取物组合对H_2O_2诱导的H9c2 细胞内ROS水平的影响(流式细胞仪法) |
3.5.2 果蔬提取物组合对H_2O_2诱导的H9c2 细胞内总抗氧化能力的影响 |
3.5.3 果蔬提取物组合对H_2O_2诱导的H9c2 细胞内SOD、CAT、GPx、MDA表达的影响 |
3.5.4 果蔬提取物组合对H_2O_2诱导的H9c2 细胞内炎症因子表达的影响 |
3.6 讨论 |
3.7 本章小结 |
第4章 果蔬提取物主要活性成分与抗氧化相互作用的关系 |
4.1 引言 |
4.2 实验材料与设备 |
4.2.1 原料 |
4.2.2 实验材料 |
4.2.3 设备与仪器 |
4.3 实验方法 |
4.3.1 不同极性果蔬提取物的制备 |
4.3.2 果蔬提取物总酚、总黄酮、总花青素、总类胡萝卜素含量的测定 |
4.3.3 果蔬提取物的HPLC-ESI-Qq Q-MS2 定性分析 |
4.3.3.1 果蔬提取物中酚酸类和花青素类物质的定性分析 |
4.3.4 果蔬提取物的UPLC定量分析 |
4.3.4.1 果蔬提取物中类胡萝卜素物质的定量分析 |
4.3.4.2 果蔬提取物中酚类物质的定量分析 |
4.3.4.3 果蔬提取物中花青素的定量分析 |
4.3.5 果蔬提取物组合的主成分分析 |
4.3.5.1 提取物组合的分组 |
4.3.5.2 主成分分析 |
4.4 数据分析 |
4.5 结果与分析 |
4.5.1 水果提取物主要活性成分表征与定量 |
4.5.2 蔬菜提取物中主要活性成分的定性与定量分析 |
4.5.3 果蔬提取物组合抗氧化相互作用与其主要成分的关系 |
4.6 讨论 |
4.7 本章小结 |
第5章 不同浓度/比例果蔬提取物中四种植物化学物对抗氧化相互作用的影响 |
5.1 引言 |
5.2 实验材料与设备 |
5.2.1 实验材料 |
5.2.2 设备与仪器 |
5.3 实验方法 |
5.3.1 细胞毒性试验(MTT检测) |
5.3.2 DCFH-DA染色检测细胞内活性氧水平 |
5.3.3 细胞内总抗氧化能力的测定 |
5.3.4 试剂盒检测细胞内抗氧化酶、MDA、LDH表达水平 |
5.4 数据分析 |
5.5 结果与分析 |
5.5.1 四种植物化学物对H9c2 细胞的毒性实验 |
5.5.1.2 不同浓度的四种植物化学物对H_2O_2诱导的H9c2 细胞内ROS水平的影响 |
5.5.2 植物化学物组合对H_2O_2诱导的H9c2 细胞生长的影响(MTT法) |
5.5.3 植物化学物组合对H_2O_2诱导的H9c2 细胞内ROS水平的影响(流式细胞仪法) |
5.5.4 植物化学物组合对H_2O_2诱导的H9c2 细胞内总抗氧化能力的影响 |
5.5.5 植物化学物组合对H_2O_2诱导的H9c2 细胞内抗氧化酶、MDA、LDH表达的影响 |
5.6 讨论 |
5.7 本章小结 |
第6章 果蔬提取物中四种植物化学物抗氧化相互作用的可能机制 |
6.1 引言 |
6.2 实验材料与设备 |
6.2.1 实验材料 |
6.2.2 设备与仪器 |
6.3 实验方法 |
6.3.1 HPLC测定水溶性活性成分对脂溶性活性成分细胞吸收率的影响 |
6.3.1.1 细胞培养 |
6.3.1.2 毒性试验 |
6.3.1.3 实验分组 |
6.3.1.4 类胡萝卜素吸收率测定方法 |
6.3.2 Western blot法测定水溶性活性成分对脂溶性活性成分膜受体表达的影响 |
6.3.3 Western blot法测定H_2O_2诱导的H9c2 细胞Nrf2 信号通路的表达 |
6.3.4 Western blot法测定H_2O_2诱导的H9c2 细胞HO-1,GCLC,NQO1的表达 |
6.4 数据分析 |
6.5 结果与分析 |
6.5.1 酚酸、类胡萝卜素对H9c2 细胞的毒性与促氧化作用 |
6.5.2 EZT对H9c2 细胞的毒性试验及对细胞膜受体表达的影响 |
6.5.3 酚酸对类胡萝卜素在H9c2 细胞内吸收的影响 |
6.5.4 酚酸对类胡萝卜素膜受体表达的影响 |
6.6 不同比例的酚酸与类胡萝卜素复配后在抑制剂作用与否时对细胞内ROS水平的影响 |
6.7 不同比例复配后的植物化学物在抑制剂作用与否时对H9c2 细胞内Nrf2表达的影响 |
6.8 不同比例复配后的植物化学物在抑制剂作用与否时对H9c2 细胞内Nrf2下游抗氧化蛋白HO-1、GCLC、NQO1 表达的影响 |
6.9 讨论 |
6.10 本章小结 |
第7章 果蔬提取物中四种植物化学物及其细胞内可能氧化产物与Keap1-Nrf2 作用的分子机制 |
7.1 引言 |
7.2 实验材料与分析软件 |
7.2.1 实验材料 |
7.2.2 分析软件 |
7.3 实验方法 |
7.3.1 准备配体与受体 |
7.3.2 Auto dock分子对接 |
7.3.3 Auto dock计算结合能 |
7.3.4 Py Mo L对两种植物化学物与Keap1 蛋白的相互作用方式进行分析 |
7.4 结果与分析 |
7.4.1 BTB和 Kelch结构域与咖啡酸、对香豆酸、β-胡萝卜素、番茄红素对接结合能 |
7.4.2 咖啡酸与BTB-OPC相互作用方式 |
7.4.3 β-胡萝卜素、番茄红素的氧化产物与Kelch-咖啡酸/对香豆酸的复合物可能的作用方式 |
7.5 讨论 |
7.6 本章小结 |
第8章 结论与展望 |
8.1 结论 |
8.1.1 不同极性的果蔬提取物抗氧化相互作用与其比例相关 |
8.1.2 果蔬提取物中主要的植物化学物鉴定 |
8.1.3 果蔬提取物中主要的植物化学物与抗氧化相互作用的关系 |
8.1.4 果蔬提取物中四种植物化学物的抗氧化相互作用与剂量/浓度-效应关系 |
8.1.5 果蔬提取物中四种植物化学物的抗氧化相互作用可能的机制 |
8.1.6 果蔬提取物中四种植物化学物在Keap1-Nrf2 信号通路上可能的作用靶点 |
8.2 进一步工作方向 |
致谢 |
参考文献 |
攻读学位期间的研究成果 |
(2)艾蒿醇提物对脂多糖刺激的肉仔鸡生长、免疫和抗氧化功能的影响及其机理研究(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
缩略语表 |
1 前言 |
1.1 植物醇提物的生物学功能 |
1.1.1 植物醇提物的抗氧化作用 |
1.1.2 植物醇提物的免疫调节作用 |
1.1.3 植物醇提物的其它作用 |
1.1.4 植物醇提物在畜禽生产中的应用 |
1.2 艾蒿及其生物学功能 |
1.2.1 艾蒿概述 |
1.2.2 艾蒿的化学成分 |
1.2.3 艾蒿的生物学功能 |
1.3 本论文研究的目的意义 |
1.4 本论文研究的总体思路 |
1.4.1 技术路线 |
1.4.2 主要研究内容 |
2 试验研究 |
2.1 艾蒿醇提物对肉仔鸡血清免疫和抗氧化指标的影响 |
2.1.1 引言 |
2.1.2 材料与方法 |
2.1.3 结果与分析 |
2.1.4 讨论 |
2.1.5 小结 |
2.2 艾蒿醇提物对LPS刺激的肉仔鸡生长、营养代谢率、血液相关指标及肠道形态的影响 |
2.2.1 引言 |
2.2.2 材料与方法 |
2.2.3 结果与分析 |
2.2.4 讨论 |
2.2.5 小结 |
2.3 艾蒿醇提物对LPS刺激的肉仔鸡免疫和抗氧化功能的影响及其调控机理的研究 |
2.3.1 引言 |
2.3.2 材料与方法 |
2.3.3 结果与分析 |
2.3.4 讨论 |
2.3.5 小结 |
2.4 艾蒿黄酮的分离、纯化及其对肉仔鸡外周血淋巴细胞免疫和抗氧化功能的影响 |
2.4.1 引言 |
2.4.2 材料与方法 |
2.4.3 结果与分析 |
2.4.4 讨论 |
2.4.5 小结 |
2.5 艾蒿黄酮通过TLR4/NF-κB信号通路调节肉仔鸡外周血淋巴细胞免疫功能的机理研究 |
2.5.1 引言 |
2.5.2 材料与方法 |
2.5.3 结果与分析 |
2.5.4 讨论 |
2.5.5 小结 |
2.6 艾蒿黄酮通过Keap1/Nrf2 信号通路调节肉仔鸡外周血淋巴细胞抗氧化功能的机理研究 |
2.6.1 引言 |
2.6.2 材料与方法 |
2.6.3 结果与分析 |
2.6.4 讨论 |
2.6.5 小结 |
3 总体讨论与结论 |
3.1 总体讨论 |
3.1.1 艾蒿醇提物对肉仔鸡免疫功能的影响及其作用机理 |
3.1.2 艾蒿醇提物对肉仔鸡抗氧化功能的影响及作用机理 |
3.2 总体结论 |
3.3 创新点 |
3.4 有待进一步解决的问题 |
致谢 |
参考文献 |
作者简介 |
(3)定心藤提取物减轻H2O2诱导的H9c2心肌细胞损伤作用及机制研究(论文提纲范文)
致谢 |
中文摘要 |
abstract |
中英文对照表 |
引言 |
第一章 定心藤提取物对H_2O_2诱导H9c2 心肌细胞氧化损伤及凋亡的影响 |
1 实验材料 |
1.1 实验细胞 |
1.2 实验仪器 |
1.3 实验耗材 |
1.4 药品与试剂 |
2 实验方法 |
2.1 主要溶液的配制 |
2.2 定心藤提取物的配制 |
2.3 H9c2 心肌细胞的培养 |
2.4 氧化应激损伤模型的建立 |
2.5 实验分组与给药 |
2.6 细胞存活率的测定 |
2.7 细胞凋亡指标的测定 |
2.8 H9c2 细胞LDH漏出量的测定 |
2.9 统计处理 |
3 结果 |
3.1 氧化应激模型的建立 |
3.2 定心藤提取物对H9c2 细胞的毒性作用 |
3.3 定心藤提取物对H_2O_2诱导的H9c2 细胞存活率的影响 |
3.4 定心藤提取物对H_2O_2诱导的H9c2 心肌细胞LDH活性的影响 |
3.5 定心藤提取物对H_2O_2诱导的H9c2 细胞凋亡的影响 |
4 小结 |
第二章 定心藤提取物对H_2O_2诱导不同时间的H9c2 细胞氧化损伤及MAPK信号通路的影响 |
1 实验材料 |
1.1 实验细胞 |
1.2 实验仪器 |
1.3 药品与试剂 |
2 实验方法 |
2.1 试剂的配制 |
2.2 实验分组与给药 |
2.3 细胞氧化损伤指标的测定 |
2.4 Western blot检测 |
2.5 统计处理 |
3 结果 |
3.1 定心藤提取物对H_2O_2诱导不同时间的H9c2 细胞SOD、LDH活性的影响 |
3.2 定心藤提取物对H_2O_2诱导不同时间的H9c2 细胞损伤p-ERK1/2蛋白表达的影响 |
3.3 定心藤提取物对H2O2诱导不同时间的H9c2细胞p-JNK和p-p38 蛋白表达的影响 |
4 小结 |
第三章 定心藤提取物基于ERK抑制剂对H_2O_2诱导的H9c2 心肌细胞MAPK信号通路的影响 |
1 实验材料 |
1.1 实验细胞 |
1.2 实验仪器 |
1.3 药品与试剂 |
2 实验方法 |
2.1 主要溶液的配制 |
2.2 实验分组与给药 |
2.3 Western blot检测 |
2.4 流式细胞术检测 |
2.5 细胞存活率检测 |
2.6 统计处理 |
3 结果 |
3.1 定心藤提取物基于ERK抑制剂对H_2O_2诱导的H9c2 细胞损伤p-ERK1/2 蛋白表达的影响 |
3.2 定心藤提取物基于ERK抑制剂对H_2O_2诱导的H9c2 细胞凋亡的影响 |
3.3 定心藤提取物基于ERK抑制剂对H_2O_2诱导的H9c2 细胞存活率的影响 |
4 小结 |
讨论 |
结论 |
文献综述 定心藤提取物抗心肌缺血再灌注的研究进展 |
参考文献 |
个人简介 |
(4)蓝刺头黄酮对C2C12骨骼肌细胞和Ⅱ型糖尿病模型小鼠胰岛素抵抗作用及机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
1 引言 |
1.1 黄酮 |
1.1.1 调节糖代谢 |
1.1.2 调节脂代谢 |
1.1.3 抗氧化作用 |
1.1.4 其他作用 |
1.1.5 蓝刺头(黄酮)研究现状 |
1.2 糖尿病 |
1.2.1 糖尿病 |
1.2.2 糖尿病治疗现状 |
1.2.2.1 西医临床应用 |
1.2.2.2 中医临床应用 |
1.2.3 糖尿病胰岛素抵抗研究概况 |
1.3 胰岛素转导相关信号通路 |
1.3.1 胰岛素转导相关信号通路mRNA |
1.3.2 胰岛素转导相关信号通路蛋白 |
1.4 研究意义及目的 |
1.4.1 研究意义 |
1.4.2 研究目的 |
2 蓝刺头黄酮提取与纯化的研究 |
2.1 材料与方法 |
2.1.1 材料 |
2.1.1.1 药品 |
2.1.1.2 仪器 |
2.1.1.3 试剂 |
2.1.2 方法 |
2.1.2.1 蓝刺头黄酮的鉴定 |
2.1.2.2 蓝刺头黄酮的提取与含量测定 |
2.1.2.3 总黄酮得率 |
2.1.2.4 单因素试验 |
2.1.2.5 响应面优化试验设计 |
2.1.2.6 蓝刺头黄酮的纯化 |
2.1.2.7 数据统计与分析 |
2.2 结果及分析 |
2.2.1 蓝刺头黄酮的提取 |
2.2.1.1 单因素试验结果 |
2.2.1.2 响应面优化试验 |
2.2.1.3 最佳工艺条件的预测和检验 |
2.2.2 蓝刺头黄酮的鉴定 |
2.2.3 蓝刺头黄酮的纯化 |
2.2.3.1 标准曲线绘制 |
2.2.3.2 样品测试 |
2.3 讨论 |
3 C2C12小鼠成肌细胞的培养、分化及细胞胰岛抵抗模型的构建 |
3.1 材料与方法 |
3.1.1 材料 |
3.1.1.1 试验细胞 |
3.1.1.2 主要试剂 |
3.1.1.3 主要仪器 |
3.1.2 方法 |
3.1.2.1 C2C12骨骼肌细胞培养 |
3.1.2.2 细胞毒性试验 |
3.1.2.3 PA对C2C12骨骼肌细胞安全浓度筛选 |
3.1.2.4 葡萄糖消耗实验 |
3.1.2.5 数据分析 |
3.2 结果及分析 |
3.2.1 C2C12成肌细胞培养与分化的结果 |
3.2.2 PA对C2C12骨骼肌细胞安全浓度筛选的结果 |
3.2.3 葡萄糖消耗试验的结果 |
3.3 讨论 |
4 蓝刺头黄酮对胰岛素抵抗骨骼肌细胞葡萄糖代谢的影响 |
4.1 材料与方法 |
4.1.1 材料 |
4.1.1.1 试验细胞 |
4.1.1.2 试验仪器 |
4.1.1.3 主要试剂 |
4.1.1.4 主要试剂配制 |
4.1.2 方法 |
4.1.2.1 ELTF对胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞安全浓度的筛选 |
4.1.2.2 ELTF对胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞葡萄糖消耗的影响 |
4.1.2.3 统计学处理 |
4.2. 结果及分析 |
4.2.1 ELTF对胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞安全浓度筛选的结果 |
4.2.2 ELTF对胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞葡萄糖消耗影响的结果 |
4.3 讨论 |
4.3.1 ELTF对胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞安全浓度筛选 |
4.3.2 ELTF对胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞葡萄糖消耗 |
5 蓝刺头黄酮对胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞胰岛素相关信号通路的研究 |
5.1 材料与方法 |
5.1.1 材料 |
5.1.1.1 实验用细胞 |
5.1.1.2 试验仪器及设备 |
5.1.1.3 主要试剂 |
5.1.1.4 主要试剂配制 |
5.1.2 方法 |
5.1.2.1 RT-qPCR检测ELTF对胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞基因mRNA表达的影响 |
5.1.2.1.1 细胞处理 |
5.1.2.1.2 细胞总RNA的提取 |
5.1.2.1.3 细胞总RNA质量检测 |
5.1.2.1.4 细胞总RNA反转录为cDNA |
5.1.2.1.5 引物设计 |
5.1.2.1.6 RT-qPCR扩增反应 |
5.1.2.1.7 RT-qPCR数据处理及分析 |
5.1.2.2 Western Blot检测ELTF对胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞信号转导通路相关蛋白表达的影响 |
5.1.2.2.1 细胞处理 |
5.1.2.2.2 蛋白提取 |
5.1.2.2.3 蛋白浓度测定 |
5.1.2.2.4 蛋白变性 |
5.1.2.2.5 实验前准备工作 |
5.1.2.2.6 Western blot实验步骤 |
5.1.2.2.7 数据处理及分析 |
5.2 结果及分析 |
5.2.1 RT-qPCR检测相关基因mRNA表达的结果 |
5.2.1.1 胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞中AMPK mRNA表达的结果 |
5.2.1.2 胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞中GLUT4 mRNA表达的结果 |
5.2.1.3 胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞中IRS-1 mRNA表达的结果 |
5.2.1.4 胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞中Pparaγ mRNA表达的结果 |
5.2.1.5 胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞中PI3 Knase p85 mRNA表达的结果 |
5.2.2 Western Blot检测相关蛋白表达的结果 |
5.2.2.1 BCA的标准曲线 |
5.2.2.2 胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞中AMPK蛋白表达量的结果 |
5.2.2.3 胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞中GLUT4蛋白表达量的结果 |
5.2.2.4 胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞中IRS-1蛋白表达量的结果 |
5.2.2.5 胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞中Pparaγ蛋白表达量的结果 |
5.2.2.6 胰岛素抵抗C2C12骨骼肌细胞中PI3 Knase p85蛋白表达量的结果 |
5.3 讨论 |
6 蓝刺头黄酮对实验性Ⅱ型糖尿病小鼠降糖作用的研究 |
6.1 材料与方法 |
6.1.1 材料 |
6.1.1.1 动物 |
6.1.1.2 主要试剂 |
6.1.1.3 主要仪器设备 |
6.1.2 方法 |
6.1.2.1 Ⅱ型糖尿病小鼠模型的构建 |
6.1.2.2 药物干预对实验Ⅱ型糖尿病模型小鼠体重的测定 |
6.1.2.3 药物干预对实验Ⅱ型糖尿病模型小鼠空腹血糖的测定 |
6.1.2.4 药物干预对实验Ⅱ型糖尿病模型小鼠TC、TG、HDL、LDL的测定 |
6.1.3 数据分析 |
6.2 结果及分析 |
6.2.1 药物干预对实验性Ⅱ型糖尿病模型小鼠行为学观察 |
6.2.2 成模率与死亡率 |
6.2.3 药物干预对实验性Ⅱ型糖尿病模型小鼠体重的影响 |
6.2.4 药物干预对实验性Ⅱ型糖尿病模型小鼠血糖的影响 |
6.2.5 药物干预对实验性Ⅱ型糖尿病模型小鼠TC、TG、HDL、LDL的影响 |
6.3 讨论 |
7 蓝刺头黄酮对实验性Ⅱ型糖尿病小鼠骨骼肌胰岛素相关信号通路的研究 |
7.1 材料与方法 |
7.1.1 材料 |
7.1.1.1 骨骼肌 |
7.1.1.2 试验仪器及设备 |
7.1.1.3 主要试剂 |
7.1.1.4 主要试剂配制 |
7.1.2 方法 |
7.1.2.1 RT-qPCR检测ELTF对实验性Ⅱ型糖尿病小鼠骨骼肌基因mRNA表达的影响 |
7.1.2.1.1 肌肉组织总RNA的提取 |
7.1.2.1.2 肌肉组织总RNA质量检测 |
7.1.2.1.3 肌肉组织总RNA反转录为cDNA |
7.1.2.1.4 引物设计 |
7.1.2.1.5 RT-qPCR扩增反应 |
7.1.2.2 Western Blot检测ELTF对信号转导通路相关蛋白表达的影响 |
7.1.2.2.1 组织处理 |
7.1.2.2.2 蛋白提取 |
7.1.2.2.3 蛋白浓度测定 |
7.1.2.2.4 蛋白变性 |
7.1.2.2.5 实验前准备工作 |
7.1.2.2.6 Western blot实验步骤 |
7.1.2.2.7 数据处理及分析 |
7.2 结果及分析 |
7.2.1 RT-qPCR检测相关基因mRNA表达的结果 |
7.2.1.1 实验性Ⅱ型糖尿病小鼠骨骼肌中AMPK mRNA表达的结果 |
7.2.1.2 实验性Ⅱ型糖尿病小鼠骨骼肌中GLUT4 mRNA表达的结果 |
7.2.1.3 实验性Ⅱ型糖尿病小鼠骨骼肌中IRS-1 mRNA表达的结果 |
7.2.1.4 实验性Ⅱ型糖尿病小鼠骨骼肌中Pparaγ mRNA表达的结果 |
7.2.1.5 实验性Ⅱ型糖尿病小鼠骨骼肌中PI3 Knase p85 mRNA表达的结果 |
7.2.2 Western Blot检测相关蛋白表达的结果 |
7.2.2.1 BCA标准曲线 |
7.2.2.2 实验性Ⅱ型糖尿病小鼠骨骼肌中AMPK蛋白表达量的结果 |
7.2.2.3 实验性Ⅱ型糖尿病小鼠骨骼肌中GLUT4蛋白表达量的结果 |
7.2.2.4 实验性Ⅱ型糖尿病小鼠骨骼肌中IRS-1蛋白表达量的结果 |
7.2.2.5 实验性Ⅱ型糖尿病小鼠骨骼肌中Pparaγ蛋白表达量的结果 |
7.2.2.6 实验性Ⅱ型糖尿病小鼠骨骼肌中PI3 Knase p85蛋白表达量的结果 |
7.3 讨论 |
8 结论 |
9 论文的创新点 |
致谢 |
作者简介 |
参考文献 |
(5)中国蜂胶及其黄酮类单体抗黑素瘤作用及其机制(论文提纲范文)
缩略词Abbreviations |
摘要 |
Abstract |
文献综述部分 |
第一章 黑素瘤治疗研究进展 |
1 黑素瘤发生诱发因素及其分子机制 |
2 黑素瘤治疗方法 |
2.1 化学药物治疗 |
2.2 免疫治疗 |
2.3 靶向治疗 |
2.4 黑素瘤的耐药机制 |
3 小结 |
参考文献 |
第二章 蜂胶及其单体抗肿瘤活性及其机制研究进展 |
1 蜂胶的抗肿瘤活性 |
2 蜂胶中活性单体成分的抗肿瘤活性 |
2.1 黄酮类化合物 |
2.2 萜烯类化合物 |
2.3 酚酸类化合物 |
3 蜂胶及其有效活性成分的抗肿瘤机制 |
3.1 诱导细胞凋亡 |
3.2 抑制肿瘤细胞增殖 |
3.3 抗血管增生 |
3.4 抗肿瘤转移 |
3.5 对致癌因素的防治 |
4 小结 |
参考文献 |
第三章 研究目的及主要内容 |
1 研究目的与意义 |
2 研究思路和主要内容 |
2.1 中国蜂胶的抗黑素瘤活性研究 |
2.2 中国蜂胶中抗黑素瘤活性单体筛选研究 |
2.3 松属素对黑素瘤的促凋亡作用及其机制研究 |
2.4 柯因对黑素瘤的抗转移作用及其机制研究 |
3 技术路线 |
实验研究部分 |
第四章 中国蜂胶对黑素瘤的促凋亡影响研究 |
1.引言 |
2.实验材料与方法 |
2.1 试剂 |
2.2 细胞培养 |
2.3 蜂胶样品收集和提取 |
2.4 细胞活力检测 |
2.5 细胞凋亡检测 |
2.6 细胞周期检测 |
2.7 总蛋白提取 |
2.8 蛋白印迹分析 |
2.9 基因表达丰度检测 |
2.10 细胞划痕实验 |
2.11 数据分析 |
3.结果与分析 |
3.1 中国蜂胶诱导线粒体主导的人黑素瘤细胞A375内源性死亡 |
3.2 中国蜂胶诱导人黑素瘤细胞A375 S-G2/M期细胞周期阻滞 |
3.3 中国蜂胶通过抑制NLRP-1相关炎性通路诱导A375细胞凋亡发生 |
3.4 中国蜂胶引发自噬从而增强其对人黑素瘤的细胞活性 |
4.讨论 |
5.小结 |
参考文献 |
第五章 中国蜂胶抗黑素瘤单体活性成分筛选 |
1 引言 |
2 实验材料与方法 |
2.1 液相色谱法-质谱联用(LC-MS)分析 |
2.2 实验试剂与成分 |
2.3 细胞活力检测 |
3 结果 |
3.1 中国蜂胶成分分析 |
3.2 中国蜂胶抗黑素瘤单体成分筛选 |
4 讨论 |
5 小结 |
参考文献 |
第六章 中国蜂胶活性成分松属素抗黑素瘤作用研究 |
1 引言 |
2 实验材料与方法 |
2.1 试剂 |
2.2 细胞培养 |
2.3 细胞活性试验 |
2.4 细胞凋亡率检测 |
2.5 TUNEL试验 |
2.6 蛋白免疫印迹 |
2.7 细胞自噬检测 |
2.8 动物实验 |
2.9 数据处理 |
3 实验结果 |
3.1 松属素诱导黑素瘤细胞凋亡 |
3.2 松属素诱导凋亡caspase级联反应与线粒体无关 |
3.3 松属素通过IRE1/Xbp1/CHOP通路诱导内质网应激介导的凋亡 |
3.4 松属素通过激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制黑素瘤细胞中自噬发生 |
3.5 松属素在动物模型中抑制黑素瘤的生长 |
4 讨论 |
5 小结 |
参考文献 |
第七章 柯因抑制黑素瘤转移效果研究 |
1 引言 |
2 试剂与方法 |
2.1 细胞培养 |
2.2 蛋白质印迹实验 |
2.3 实时荧光定量PCR |
2.4 免疫荧光染色 |
2.5 C57BL/6小鼠肺转移模型 |
2.6 FOXM1过表达实验 |
2.7 细胞划痕实验 |
2.8 Transwell迁移实验 |
2.9 体外血管生成实验 |
2.10 体外细胞失巢死亡实验 |
2.11 数据处理 |
3 实验结果 |
3.1 柯因在体内外抑制黑素瘤细胞转移 |
3.2 柯因调控黑素瘤细胞上皮间充质转化过程和细胞基质降解 |
3.3 柯因减弱黑素瘤失巢凋亡抵抗和血管生成能力 |
3.4 柯因通过针对FOXM1调节黑素瘤细胞中β-catenin通路 |
3.5 过表达FOXM1减弱柯因对A375细胞转移的抑制作用 |
3.6 柯因通过干扰Pin1-FOXM1信号转导促进FOXM1降解 |
4 讨论 |
5 小结 |
参考文献 |
第八章 总结与展望 |
1.研究总结 |
2.创新点 |
3.研究展望 |
攻读博士学位期间发表的论文 |
致谢 |
(6)蜂胶黄酮类化合物的提取分离及其生物活性研究(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
第一章 引言 |
1.1 蜂胶概述 |
1.2 黄酮类化合物的分类 |
1.3 黄酮类化合物的提取 |
1.4 黄酮类化合物的分离纯化 |
1.5 黄酮类化合物的生物活性 |
1.5.1 抗氧化作用 |
1.5.2 抗细菌作用 |
1.5.3 抗肿瘤作用 |
1.5.4 抗炎作用 |
1.5.5 其他作用 |
1.6 本论文的研究意义和研究内容 |
1.6.1 选题背景及研究意义 |
1.6.2 研究内容 |
1.6.3 主要创新点和特色 |
第二章 蜂胶黄酮的提取工艺研究 |
2.1 引言 |
2.2 仪器与材料 |
2.2.1 实验材料 |
2.2.2 实验仪器 |
2.3 实验方法 |
2.3.1 蜂胶预处理 |
2.3.2 样品溶液的制备 |
2.3.3 芦丁标准溶液的制备 |
2.3.4 检测波长的选择 |
2.3.5 方法学考察 |
2.3.6 蜂胶黄酮提取得率的测定 |
2.3.7 实验设计 |
2.4 结果与讨论 |
2.4.1 检测波长的确定 |
2.4.2 方法学考察 |
2.4.3 单因素试验结果 |
2.4.4 响应面法优化蜂胶黄酮的提取因素 |
2.4.5 超声提取方法的比较分析 |
2.5 本章小结 |
第三章 蜂胶黄酮的成分分析 |
3.1 引言 |
3.2 仪器与材料 |
3.2.1 实验材料 |
3.2.2 实验仪器 |
3.3 实验方法 |
3.3.1 样品溶液的制备 |
3.3.2 色谱检测条件 |
3.3.3 质谱检测条件 |
3.4 结果与讨论 |
3.4.1 UPLC-ESI-MS/MS分析 |
3.4.2 结构鉴定 |
3.5 本章小结 |
第四章 蜂胶黄酮的分离纯化 |
4.1 引言 |
4.2 仪器与材料 |
4.2.1 实验材料 |
4.2.2 实验仪器 |
4.3 实验方法 |
4.3.1 蜂胶醇提物的制备 |
4.3.2 蜂胶黄酮类物质的分离纯化 |
4.3.3 结构鉴定 |
4.4 结果与讨论 |
4.4.1 结构鉴定 |
4.5 本章小结 |
第五章 蜂胶黄酮的抗氧化活性研究 |
5.1 引言 |
5.2 仪器与材料 |
5.2.1 实验材料 |
5.3 实验方法 |
5.3.1 样品溶液的制备 |
5.3.2 DPPH自由基清除实验 |
5.3.3 O2-自由基清除实验 |
5.3.4 ABTS自由基清除实验 |
5.4 结果与讨论 |
5.4.1 DPPH和O_2~-自由基清除能力的测定结果 |
5.4.2 ABTS自由基清除能力的测定结果 |
5.5 本章小结 |
第六章 蜂胶黄酮短叶松素-3-乙酸酯的抗肿瘤活性研究 |
6.1 引言 |
6.2 仪器与材料 |
6.2.1 实验材料 |
6.2.2 实验仪器 |
6.3 实验方法 |
6.3.1 细胞培养 |
6.3.2 细胞毒性检测实验(MTT法) |
6.3.3 细胞划痕实验 |
6.3.4 吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染实验 |
6.3.5 Hoechst33258 染色实验 |
6.3.6 Caspase-3 活性检测实验 |
6.4 结果与讨论 |
6.4.1 细胞毒性检测结果 |
6.4.2 细胞划痕愈合结果 |
6.4.3 AO/EB双染结果 |
6.4.4 Hoechst33258 染色结果 |
6.4.5 caspase-3 活性检测结果 |
6.5 本章小结 |
第七章 结论与展望 |
7.1 结论 |
7.2 展望 |
参考文献 |
致谢 |
攻读硕士学位期间发表的论文 |
攻读硕士学位期间参与的科研项目 |
(7)蜂胶黄酮对小鼠铅中毒的保护作用及其机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
缩略语对照表 |
第一章 绪论 |
1.1 铅的来源 |
1.2 铅的吸收及分布 |
1.3 铅的毒性 |
1.3.1 神经系统 |
1.3.2 肾脏组织 |
1.3.3 肝脏组织 |
1.3.4 造血系统 |
1.3.5 肠道微生物系统 |
1.3.6 生殖系统 |
1.3.7 其他组织/系统 |
1.4 铅暴露对机体的毒性机制 |
1.4.1 氧化应激机制 |
1.4.2 炎症机制 |
1.5 铅中毒机体的治疗及研究现状 |
1.6 黄酮类化合物 |
1.6.1 黄酮类化合物的概述 |
1.6.2 黄酮类化合物的生物活性 |
1.7 蜂胶——富含黄酮类化合物 |
1.7.1 蜂胶的来源和组成 |
1.7.2 蜂胶的生物活性 |
1.8 选题依据及主要研究内容 |
1.8.1 选题依据 |
1.8.2 研究目标与内容 |
第二章 蜂胶黄酮抗氧化和配位能力的理论研究 |
2.1 实验方法 |
2.1.1 理论背景 |
2.1.2 计算方法 |
2.2 结果 |
2.2.1 蜂胶黄酮抗氧化能力的研究 |
2.2.2 蜂胶黄酮配位能力的研究 |
2.3 讨论 |
2.4 小结 |
第三章 杨梅素、槲皮素和木犀草素抗氧化能力及其铅配合物光谱特性的研究 |
3.1 实验材料及方法 |
3.1.1 实验试剂及仪器 |
3.1.2 实验方法 |
3.2 结果 |
3.2.1 杨梅素、槲皮素和木犀草素对溶液中Pb(Ⅱ)的清除能力 |
3.2.2 杨梅素、槲皮素和木犀草素及其铅配合物的光谱特性 |
3.2.3 杨梅素、槲皮素和木犀草素的理论分析 |
3.2.4 杨梅素、槲皮素和木犀草素的抗氧化能力 |
3.3 讨论 |
3.4 小结 |
第四章 杨梅素对铅诱导小鼠肾脏组织损伤的预防性保护作用 |
4.1 实验材料及方法 |
4.1.1 实验试剂及仪器 |
4.1.2 实验方法 |
4.2 结果 |
4.2.1 杨梅素对铅暴露小鼠金属离子的影响 |
4.2.2 杨梅素对铅诱导的小鼠肾毒性血清生物标志物的作用 |
4.2.3 杨梅素对铅诱导小鼠肾脏组织中MTs水平的作用 |
4.2.4 杨梅素对铅诱导小鼠肾脏组织中内源抗氧化剂和脂质过氧化产物的影响 |
4.2.5 杨梅素对铅诱导小鼠肾脏组织中炎症的影响 |
4.2.6 杨梅素对铅诱导小鼠肾脏组织病理学的影响 |
4.3 讨论 |
4.4 小结 |
第五章 杨梅素对铅诱导小鼠肝脏组织损伤的预防性保护作用 |
5.1 实验材料及方法 |
5.1.1 实验试剂及仪器 |
5.1.2 实验方法 |
5.2 结果 |
5.2.1 杨梅素对铅暴露小鼠金属离子的影响 |
5.2.2 杨梅素对铅诱导小鼠肝毒性血清生物标志物的影响 |
5.2.3 杨梅素对铅诱导小鼠肝脏组织中金属硫蛋白(MTs)水平的作用 |
5.2.4 杨梅素对铅诱导小鼠肝脏组织中内源抗氧化剂和脂质过氧化产物的影响 |
5.2.5 杨梅素对铅诱导小鼠肝脏组织中炎症的影响 |
5.2.6 杨梅素对铅诱导小鼠肝脏组织病理学的影响 |
5.3 讨论 |
5.4 小结 |
第六章 杨梅素对铅暴露小鼠肠道菌群紊乱的调节作用 |
6.1 实验方法 |
6.1.1 动物实验设计 |
6.1.2 16s rRNA测序分析 |
6.2 结果 |
6.2.1 OUT分析 |
6.2.2 Alpha多样性分析 |
6.2.3 分类学组成分析 |
6.2.4 Beta多样性分析 |
6.3 讨论 |
6.4 小结 |
第七章 蜂胶乙醇提取物对铅暴露小鼠氧化损伤的预防性保护作用 |
7.1 实验材料及方法 |
7.1.1 实验试剂及仪器 |
7.1.2 实验方法 |
7.2 结果 |
7.2.1 蜂胶乙醇提取物中的黄酮类化合物 |
7.2.2 小鼠行为学分析 |
7.2.3 小鼠组织脏器系数的分析 |
7.2.4 血液及组织中Pb含量 |
7.2.5 血液及组织中金属离子水平 |
7.2.6 血液及组织的氧化应激水平 |
7.3 讨论 |
7.4 小结 |
第八章 结论与展望 |
8.1 结论 |
8.2 创新点 |
8.3 展望 |
参考文献 |
致谢 |
攻读博士期间取得的科研成果 |
作者简介 |
(8)不同品种竹叶主要化学成分分析及竹叶牙膏的制备(论文提纲范文)
中文摘要 |
ABSTRACT |
引言 |
1 研究背景 |
2 立题依据 |
3 研究目的与意义 |
4 主要技术路线图 |
第一章 不同品种竹叶化学成分分析 |
1 仪器与试药 |
1.1 主要仪器 |
1.2 材料与试剂 |
2 指标成分 |
3 色谱条件 |
4 方法学考察 |
4.1 线性关系考察 |
4.2 重复性试验 |
4.3 检测限、定量限考察 |
4.4 精密度试验 |
4.5 稳定性试验 |
4.6 加样回收率试验 |
5 竹叶含量测定 |
6 小结与讨论 |
第二章 不同品种竹叶抗氧化成分分析 |
1 仪器与试药 |
1.1 主要仪器 |
1.2 材料与试剂 |
2 竹叶的抗氧化活性 |
3 竹叶抗氧化活性评价方法的筛选 |
4 竹叶成分及提取物抗氧化活性测定 |
4.1 指标成分抗氧化活性的测定 |
4.2 提取物抗氧化活性的测定 |
5 抗氧化活性成分分析 |
5.1 双变量相关性分析 |
5.2 逐步回归分析 |
6 小结与讨论 |
第三章 竹叶蜂胶牙膏的制备 |
1 仪器与试药 |
1.1 主要仪器 |
1.2 材料与试剂 |
2 竹叶提取工艺研究 |
2.1 竹叶总黄酮含量测定(国标法) |
2.2 提取溶剂种类考察 |
2.3 提取溶剂浓度考察 |
2.4 提取次数考察 |
2.5 正交试验设计 |
2.6 验证试验 |
2.7 小结与讨论 |
3 蜂胶前处理方法研究 |
3.1 蜂胶的化学成分及药理作用 |
3.2 蜂胶的质量研究 |
3.3 蜂胶前处理方法考察 |
3.4 小结与讨论 |
4 竹叶蜂胶牙膏成型工艺研究 |
4.1 辅料种类考察 |
4.2 辅料用量考察 |
4.3 湿法溶胶制膏工艺研究 |
4.4 小结与讨论 |
5 竹叶蜂胶牙膏质量标准研究 |
5.1 竹叶蜂胶牙膏的常规检查 |
5.2 竹叶蜂胶牙膏的总黄酮含量测定 |
5.3 竹叶蜂胶牙膏质量标准(草案) |
5.4 小结与讨论 |
全文总结 |
致谢 |
参考文献 |
附录 |
附录一 攻读硕士研究生期间文献综述 3种竹叶化学成分研究进展 |
参考文献 |
附录二 在校期间发表学术论文 |
(9)蜂胶的化学成分、质量控制及生物学活性研究进展(论文提纲范文)
1 蜂胶的化学成分 |
1.1 不同地理来源的蜂胶化学成分 |
1.2 蜂胶中新发现的化合物 |
2 蜂胶的质量控制 |
2.1 蜂胶类型及溯源研究 |
2.2 蜂胶真实性研究 |
3 蜂胶的生物学活性 |
3.1 抗氧化 |
3.2 抗菌、抗寄生虫 |
3.3 抗炎 |
3.4 血糖调节及抗糖尿病 |
3.5 抗病毒 |
3.6 抗肿瘤 |
3.7 保护心血管 |
3.8 保肝护肝 |
3.9 其他活性 |
4 结语 |
(10)蜂产品中黄酮类化合物的提取工艺及功能活性的研究进展(论文提纲范文)
1 蜂产品中黄酮类化合物的提取分离纯化工艺研究进展 |
1.1 蜂产品中总黄酮的提取工艺研究进展 |
1.1.1 蜂产品中总黄酮的提取方法 |
1.1.1. 1 传统醇提取法 |
1.1.1. 2 超声波、微波辅助提取法 |
1.1.1. 3 超临界流体萃取法 |
1.1.1. 4 超高压萃取法 |
1.1.2 不同提取方法比较 |
1.2 蜂产品中黄酮单体的分离纯化工艺研究进展 |
2 蜂产品中黄酮类化合物的功能活性研究进展 |
2.1 抗氧化功能 |
2.2 抑菌功能 |
2.3 抗炎功能 |
2.4 增强免疫的功能 |
2.5 降血糖功能 |
2.6 抗癌功能 |
3 总结 |
四、蜂胶黄酮类提取物对培养心肌细胞氧化损伤的保护作用(论文参考文献)
- [1]日常膳食中四种水果/蔬菜提取物及其中四种主要的植物化学物相互作用规律及机制的探讨[D]. 潘瑶. 南昌大学, 2021
- [2]艾蒿醇提物对脂多糖刺激的肉仔鸡生长、免疫和抗氧化功能的影响及其机理研究[D]. 杨硕. 内蒙古农业大学, 2021(01)
- [3]定心藤提取物减轻H2O2诱导的H9c2心肌细胞损伤作用及机制研究[D]. 朱穆峰. 江西中医药大学, 2021(01)
- [4]蓝刺头黄酮对C2C12骨骼肌细胞和Ⅱ型糖尿病模型小鼠胰岛素抵抗作用及机制研究[D]. 郝光. 内蒙古农业大学, 2020(06)
- [5]中国蜂胶及其黄酮类单体抗黑素瘤作用及其机制[D]. 郑宇斐. 浙江大学, 2020
- [6]蜂胶黄酮类化合物的提取分离及其生物活性研究[D]. 卢燕珊. 广东药科大学, 2020(01)
- [7]蜂胶黄酮对小鼠铅中毒的保护作用及其机制研究[D]. 王倩. 西北大学, 2020(01)
- [8]不同品种竹叶主要化学成分分析及竹叶牙膏的制备[D]. 郭静. 上海中医药大学, 2019(03)
- [9]蜂胶的化学成分、质量控制及生物学活性研究进展[J]. 胡福良. 经济动物学报, 2017(04)
- [10]蜂产品中黄酮类化合物的提取工艺及功能活性的研究进展[J]. 李强强,王凯,梁馨文,吴黎明. 食品工业科技, 2017(13)