一、细胞外基质的代谢（论文文献综述）
廖建钊,夏天[1]（2022）在《细胞外基质在骨关节炎发生、发展中的作用及临床研究价值》文中研究表明背景:细胞外基质代谢失衡影响结构支持作用、细胞间信号转导和细胞增殖、分化及迁移等细胞行为,在骨关节炎发生、发展中发挥着重要作用。目的:阐释细胞外基质在骨关节炎发生、发展中的作用,并分析其在骨关节炎诊断、治疗等方面的应用前景。方法:检索MEDLINE、PubMed、万方和中国知网数据库收录的2014-2021年发表的与细胞外基质在骨关节炎发生、发展中的作用相关文献。中文检索词:"骨关节炎、软骨、软骨细胞、细胞外基质、治疗、信号通路、生物标记物、组织工程",英文检索词:"Osteoarthritis,Cartilage,Cartilage cells,Extracellular matrix,Treatment,Signaling pathway,Biomarkers,Tissue engineering"。结果与结论:（1）细胞外基质作为关节软骨的重要组成部分,除为软骨细胞提供营养外,还形成了具有一定保护作用且适合软骨细胞生长的复杂三维结构。（2）细胞外基质是软骨细胞与外界环境进行信息交换的场所,感受外界刺激并作出响应,进而调节软骨细胞增殖及凋亡等行为。（3）细胞外基质中还含有大量生物标记物因子,如Ⅱ型胶原降解的标记物Ⅱ型胶原羧基端端肽、Ⅱ型胶原α1和基质金属蛋白酶等,可作为包括骨关节炎在内的多种疾病的辅助诊断及鉴别诊断。（4）基于细胞外基质的组织工程策略目前已被广泛应用于多种组织再生的研究中,如单纯的脱细胞细胞外基质支架、负载干细胞或特定药物诱导细胞行为的细胞外基质支架、仿生天然细胞外基质结构和生物学功能的复合支架等,在软骨组织工程中占据着重要地位。（5）软骨细胞外基质在骨关节炎发生、发展、诊断及治疗等方面均有着广阔的研究和应用前景,但目前软骨细胞外基质的变化与骨关节炎发生、发展相关的研究较少,而临床应用研究更少。（6）如何在骨关节炎的诊断、预防和治疗中充分利用细胞外基质的理化性质并充分发挥各组分的功能,从而实现更准确的骨关节炎分期诊断,以提供更优的治疗手段,未来还需更深入的研究验证。
孙宇宁[2]（2021）在《机械拉伸下IL-8调控角膜细胞基质重塑蛋白表达的机制研究》文中研究指明圆锥角膜（Keratoconus）是一种角膜扩张性疾病,其主要表现为角膜中央进行性变薄,向前突出呈圆锥形。作为典型的承载组织,角膜所受力学环境的改变是圆锥角膜发生的影响因素之一。角膜细胞外基质的组成及结构的改变与角膜的生物力学性能密切相关。病理条件下,角膜基质层胶原数量减少,蛋白聚糖含量改变,胶原纤维排列紊乱,角膜厚度及其抗变形能力降低,进而引发圆锥角膜。圆锥角膜通常被认为是一种非炎症性眼科疾病,但越来越多的研究发现圆锥角膜患者泪液中促炎因子表达量显着高于正常人群,表明圆锥角膜中炎症信号被激活,圆锥角膜可能是一种慢性炎症性角膜疾病。白细胞介素8（IL-8）又称为趋化因子CXCL8,能够促进中性粒细胞的趋化性和粘附分子的表达,调节细胞迁移、细胞黏附、血管生成等生理过程,参与角膜炎、角膜溃疡、角膜瘢痕等多种眼部疾病的发生。研究表明,IL-8在圆锥角膜患者泪液中表达较高,且与圆锥角膜Pentacam参数角膜扩张综合偏差分析指数BAD-D呈强正相关,推测IL-8在促进圆锥角膜病变中发挥重要作用,但其作用机制尚不清楚。本研究通过对体外培养的角膜成纤维细胞进行机械拉伸、药物处理,分析力刺激对角膜成纤维细胞中IL-8表达的影响及调节机制;通过si RNA技术和过表达技术调节角膜成纤维细胞中IL-8的表达,分析IL-8对角膜细胞外基质代谢及相关信号途径的影响。研究结果为进一步阐明促炎因子IL-8在角膜细胞响应力刺激过程中的作用机制奠定基础,为揭示圆锥角膜的发病机理及该病的临床诊疗提供参考。本研究的主要工作及结论如下:（1）采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术从基因水平比较圆锥角膜和正常角膜成纤维细胞中IL-8的表达,结果显示,圆锥角膜成纤维细胞中IL-8的表达显着高于正常角膜成纤维细胞,表明IL-8介导的炎性反应参与了圆锥角膜的发生发展。（2）对正常角膜成纤维细胞和圆锥角膜成纤维细胞进行机械拉伸,分析IL-8及氧化应激信号途径相关基因的表达变化,结果显示,机械拉伸处理早期即可诱发角膜成纤维细胞中IL-8基因的表达,此外,机械拉伸能够诱导正常角膜成纤维细胞及圆锥角膜成纤维细胞中过氧化氢（H2O2）生成及转运相关基因NOX4、AQP1的表达,表明机械拉伸能够诱导角膜成纤维细胞中AQP1介导的氧化应激反应。（3）对角膜成纤维细胞中进行H2O2及乙酰唑胺处理,检测IL-8表达的变化,结果发现,H2O2能够诱导角膜成纤维细胞中IL-8和AQP1基因的表达,通过AQP1抑制剂乙酰唑胺处理降低胞内的活性氧水平后,正常角膜成纤维细胞和圆锥角膜成纤维细胞中IL-8的表达显着降低,表明AQP1介导的氧化应激参与角膜成纤维细胞中IL-8基因的表达调控。（4）通过siRNA干扰和过表达技术调节角膜成纤维细胞中的IL-8的表达,采用qPCR、ELISA、明胶酶谱等方法分析IL-8的表达对角膜成纤维细胞中细胞外基质合成和降解的影响。结果发现,在正常角膜成纤维细胞中过表达IL-8后角膜成纤维细胞中胶原合成基因表达降低;沉默IL-8的表达后正常和圆锥角膜成纤维细胞总胶原含量、胶原合成基因（COL1A2、COL3A1、COL5A3、COL6A1）及胶原交联基因LOX-4的表达显着升高,胶原降解酶MMP-2的表达和活性下降,圆锥角膜成纤维细胞中蛋白聚糖基因LUM、DCN、BGN的表达均显着升高。研究结果表明,IL-8负调控角膜成纤维细胞中胶原及蛋白聚糖的合成,参与MMP-2介导的胶原降解过程。（5）通过生物信息学预测IL-8参与的信号途径,采用qPCR、Western blotting分析IL-8的表达对角膜成纤维细胞中相关信号途径的影响。结果发现,过表达IL-8后角膜成纤维细胞中IL-6、IL-1β等其他促炎因子的表达增加,沉默IL-8后IL-6、IL-1β的表达降低;沉默IL-8的表达能够降低VEGF-α/VEGFR2和下游Akt、β-Catenin、Erk1/2蛋白的表达。结果表明,IL-8调节角膜成纤维细胞中IL-6、IL-1β等促炎因子及VEGF的表达,并通过PI3K/Akt、Erk信号通路参与角膜细胞外基质代谢的调控。
柳鑫[3]（2021）在《miR-146b巨球蛋白α2M信号轴在骨关炎病理过程的作用及机制研究》文中研究指明研究目的骨关节炎（Osteoarthritis,OA）是老龄化人群中最常见的关节退行性疾病,因为软骨组织内无神经及血管所以病变初期极难被诊断发现,出现临床症状时通常病变已进入中晚期,由于缺乏有效的疾病干预手段,最终导致关节畸形活动受限而丧失劳动能力,是致残率很高的几种疾病之一。软骨组织的不可逆性损坏降解是OA的最主要病理特征,如何防止或者延缓软骨组织的损伤一直是领域研究重点。正常的软骨组织由关节软骨和软骨细胞外基质组成,其中细胞外基质占干重的绝大部分,它的代谢正常对维持关节软骨的生理功能至关重要。OA时基质金属蛋白酶广泛分泌参与细胞外基质的降解,而广谱蛋白酶抑制剂巨球蛋白α2M是否能对这一病理过程起到调控作用不得而知。本研究将通过临床标本、实验动物模型以及软骨细胞模型,深入探讨巨球蛋白α2M在OA病理过程中的具体作用及其潜在机制。研究方法通过对临床OA患者及正常关节软骨标本进行病理评估后检测巨球蛋白α2M的表达情况;通过收集6M、12M、18M、24M年龄阶段小鼠关节软骨标本,检测巨球蛋白α2M在年龄相关性软骨损伤中的表达情况;通过构建小鼠膝关节不稳DMM-OA模型检测巨球蛋白α2M在创伤性关节炎中的表达情况;通过构建巨球蛋白α2M慢病毒并进行OA小鼠膝关节腔注射,观察外源性补充巨球蛋白α2M对OA病理进程的影响;通过靶基因预测,筛选上游microRNA并检测OA中其相互作用关系。研究结果人源性标本OA患者中巨球蛋白α2M的表达下调,DMM-OA模型小鼠标本中检测结果显示巨球蛋白α2M表达量呈波动性变化,疾病发展初始阶段表达量上调,然而随着疾病的进一步发展表达量逐渐降低,不同年龄阶段小鼠的软骨组织中也得到类似结果,巨球蛋白α2M的基础表达量较低,软骨损伤初期表达量增加,到后期时表达量显着下降。外源性巨球蛋白α2M慢病毒补充能有效改善DMM-OA小鼠关节软骨磨损,预防蛋白聚糖丢失及细胞外基质降解,有助于维持软骨细胞外基质代谢平衡,并降低小鼠骨关节炎OARSI评分,能够延缓OA小鼠病理进程。研究证明巨球蛋白α2M是miR-146b直接作用靶点,miR-146b可以负向调控巨球蛋白α2M参与软骨细胞增殖凋亡以及细胞外基质的代谢平衡,且这一作用是通过PBK/AKT通路实现。体内实验显示miR-146b表达抑制能有效改善OA小鼠病理变化。研究结论巨球蛋白α2M在骨关节炎中的表达呈波动性变化先上升后下降,外源性补充巨球蛋白α2M能有效延缓小鼠骨关节炎进程,miR-146b能够负向调控巨球蛋白α2M生物学功能,miR-146b表达抑制有助于维持软骨细胞活性及细胞外基质的代谢平衡。
钟华建[4]（2021）在《碳水化合物磺基转移酶3在椎间盘退变中的作用及调控机制研究》文中研究说明研究背景与目的颈腰痛是临床常见症状,严重影响患者日常工作状态,部分患者甚至因颈腰痛丧失生活自理能力。全球有8亿颈腰痛患者,高昂的治疗费用给多个国家的医疗系统带来沉重负担,甚至引发社会矛盾,因此,颈腰痛是亟待解决的健康问题。多项研究表明椎间盘退变和颈腰痛密切相关,椎间盘是相邻椎体之间的结缔组织,内含充足水分,对维持脊柱稳定性及活动度至关重要。椎间盘发生退变时,组织内水分大量丢失,导致椎间盘失去弹性,易在急性应力作用下发生突出、塌陷等,引发临床症状。硫酸软骨素是椎间盘内最为重要的保水成分,而其保水功能的发挥依赖于硫酸化反应引入携带负电荷的硫酸基团,因此,硫酸软骨素硫酸化对于维持椎间盘内水分以及椎间盘正常结构和功能至关重要。碳水化合物磺基转移酶3（CHST3）是催化硫酸软骨素硫酸化的关键酶,大样本、多中心临床研究表明CHST3基因上的单核苷酸突变与椎间盘退变密切相关,而内在调控机制尚不明确。本课题拟研究CHST3与椎间盘退变的相互作用及调控机制。第一部分:椎间盘退变时CHST3表达差异及调控机制研究方法:（1）从临床收集不同退变等级的人椎间盘组织,采用Real-time RT-PCR及Western Blot检测CHST3在各级组织中的表达变化;（2）收集小鼠退变与非退变椎间盘组织,通过免疫组化检测CHST3表达水平,进一步明确椎间盘退变对CHST3的表达影响;（3）采用外源性促炎因子IL-1β及TNFα模拟椎间盘退变时的炎症反应,诱导髓核细胞退变,检测炎症反应对髓核细胞内CHST3表达水平的影响,并采用Luciferase实验探究炎症反应对CHST3的表达调控机制;结果:CHST3在人及小鼠退变椎间盘组织中表达显着下降,促炎因子刺激髓核细胞后,CHST3 m RNA及蛋白水平均显着减少,Luciferase结果显示促炎因子抑制CHST3启动子活性;炎症反应相关通路NF-ΚB及JAK/STAT通路在促炎因子刺激的髓核细胞内显着激活,其下游转录因子NF-ΚB1及STAT3可结合到CHST3启动子序列,抑制启动子活性,说明NF-ΚB及JAK/STAT通路可通过靶向调控抑制炎性环境下CHST3的表达。结论:椎间盘退变时,炎症反应通过NF-ΚB及JAK/STAT通路靶向抑制CHST3表达。第二部分:CHST3影响椎间盘退变的作用研究方法:（1）CHST3干扰质粒si CHST3及过表达质粒oe CHST3分别转染正常及促炎因子诱导退变的髓核细胞,通过流式细胞术检测髓核细胞凋亡比例,通过Western Blot检测凋亡相关蛋白（Cleaved Caspase 3及BAX）表达水平,通过Real-time RT-PCR检测细胞外基质代谢相关基因（包括降解相关基因MMP-1,-3,-9,ADAMTS-4,-5及合成相关基因Aggrecan,COL2A1）表达水平,从而明确CHST3对正常及退变髓核细胞的作用。（2）采用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建CHST3基因敲除(CHST3-/-)小鼠并进行鉴定;（3）收集CHST3-/-小鼠身长及体重数据分析发育情况,并通过核磁共振（MRI）及组织病理染色检测小鼠椎间盘退变情况,通过免疫组化检测椎间盘内细胞外基质代谢相关基因（Aggrecan、MMP-3和ADAMTS-4）表达情况;（4）采用针刺法构建大鼠椎间盘退变模型,往退变大鼠椎间盘内注射CHST3过表达腺相关病毒进一步明确CHST3对椎间盘退变的作用。结果:CHST3表达抑制后,正常髓核细胞凋亡显着增多,细胞外基质降解相关基因表达增加,合成相关基因减少,CHST3过表达在退变髓核细胞中呈现相反结果,说明CHST3对维持正常髓核细胞活性及功能,缓解退变髓核细胞表型具有重要作用;为进一步探究CHST3对椎间盘退变的影响,根据CHST3基因结构设计并合成sg RNA,通过显微注射方法将Cas9 m RNA及CHST3 sg RNA转入野生型小鼠受精卵中,体外培养至2细胞胚胎后移植到ICR品系假孕母鼠体内,获得F0代小鼠并进一步扩大繁殖获得F2代Wild-type（WT）、CHST3+/-以及CHST3-/-小鼠,组织蛋白Western Blot结果显示CHST3-/-小鼠体内CHST3敲除效果可靠,脱靶位点分析结果显示CHST3 sg RNA前20个潜在脱靶位点均未出现脱靶事件;生长发育结果显示CHST3-/-小鼠出生后4周即表现出身长显着短于WT和CHST3+/-小鼠,影像学及组织病理学发现4周龄CHST3-/-小鼠出现椎间盘退变表型,免疫组化结果显示CHST3-/-小鼠椎间盘组织中细胞外基质合成相关基因Aggrecan表达减少,而降解相关基因MMP-3,ADAMTS-4表达增多,说明CHST3敲除可诱发小鼠椎间盘退变;大鼠退变椎间盘内注射CHST3过表达腺相关病毒后,核磁共振及组织病理染色呈现的退变征象显着缓解,组织内细胞外基质降解相关基因表达显着减少,合成相关基因显着增加,说明CHST3过表达可显着缓解甚至逆转椎间盘退变进程。结论:CHST3是维持正常椎间盘结构和功能,延缓椎间盘退变进程的保护性基因,具有作为椎间盘退变生物治疗靶点的潜在意义第三部分:CHST3通过自噬调控椎间盘退变的机制研究方法:（1）通过免疫组化检测CHST3-/-及WT小鼠椎间盘组织中自噬标志性基因LC3及ATG7的表达差异,初步明确CHST3对自噬的调控作用;（2）采用不同硫酸化模式的硫酸软骨素（包括CS-A、CS-C、CS）刺激髓核细胞,通过透射电镜检测细胞内自噬活性,通过免疫荧光及Western Blot检测细胞内LC3及ATG7表达变化;（3）采用自噬抑制剂氯喹处理CHST3过表达的退变髓核细胞,通过流式细胞术检测细胞凋亡,通过Real-time RT-PCR检测细胞外基质代谢相关基因表达变化。结果:CHST3-/-小鼠椎间盘组织中LC3表达水平显着低于WT小鼠,说明CHST3对自噬具有正向调控作用;细胞实验结果表明,CS-C（CHST3催化完成硫酸化的硫酸软骨素）显着促进髓核细胞内自噬体及自噬溶酶体的合成,并上调LC3及ATG7表达水平,而CS-A（CHST11、12、13催化完成硫酸化的硫酸软骨素）不具备该作用,说明不同硫酸化模式的硫酸软骨素对髓核细胞自噬影响各异,而CHST3可能通过催化硫酸软骨素硫酸化调控自噬;此外,髓核细胞自噬被抑制后,CHST3过表达对退变髓核细胞的保护作用被显着削弱,表现为细胞凋亡增加,细胞外基质降解相关基因表达增加,合成相关基因表达减少,说明自噬是CHST3延缓髓核细胞退变乃至椎间盘退变的重要中间环节。结论:CHST3可能通过调控硫酸软骨素硫酸化影响髓核细胞内自噬活性,从而发挥保护椎间盘,延缓退变进程的重要作用。小结本研究基于人体及小鼠椎间盘组织发现CHST3在椎间盘退变时表达显着减少,并通过细胞及分子实验阐明退变椎间盘内,CHST3受炎症反应及其下游NF-ΚB、JAK/STAT通路调控表达的上游机制;此外,基于细胞实验发现CHST3对髓核细胞活性及功能的维持具有重要作用,并利用CHST3-/-小鼠及针刺诱导退变的大鼠椎间盘退变模型进一步证实CHST3对椎间盘具有保护作用,并可延缓甚至逆转退变进程;最后,基于细胞实验及CHST3-/-小鼠组织发现CHST3可能通过调控硫酸软骨素硫酸化影响髓核细胞自噬,从而缓解椎间盘退变的下游机制。通过本研究,初步阐明CHST3与椎间盘退变的相互作用及内在调控机制。
庞文翼[5]（2021）在《PKM2调节糖酵解和细胞外基质沉积促进CTEPH血管重构的实验研究》文中研究指明第一部分PKM2调节糖酵解和细胞外基质沉积促进CTEPH血管重构背景和目的肺血管重构是慢性血栓栓塞性肺动脉高压（CTEPH）的重要病理生理机制,表现为内膜增厚和细胞外基质异常沉积。丙酮酸激酶M2（PKM2）是细胞糖酵解途径最后一步的限速酶,通常在增殖细胞和肿瘤细胞中过表达,调节糖酵解进程和Warburg效应。有研究显示糖代谢异常在动脉性肺动脉高压中有重要作用,但在CTEPH中尚缺少相关研究,CTEPH患者肺动脉细胞糖代谢的方式尚不明确。本研究拟探讨PKM2在CTEPH患者肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）糖酵解和细胞外基质沉积中的作用。方法1.收集CTEPH患者肺动脉血栓内膜剥脱术（PEA）组织标本,Masson染色观察胶原是否异常分布;采用实时荧光定量PCR的方法检测CTEPH患者PEA组织中细胞外基质代谢标志物基质金属蛋白酶组织抑制物1（TIMP1）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、MMP9的表达;采用免疫组织化学方法对PEA组织中的TIMP1、MMP2、MMP9进行半定量检测。2.采用实时荧光定量PCR的方法检测CTEPH患者PEA组织中糖酵解途径相关基因的表达;采用免疫组织化学方法对PEA组织中PKM1、PKM2的蛋白表达进行半定量。3.分离、培养并鉴定CTEPH患者PASMCs。4.应用海马能量代谢仪检测PASMCs的能量代谢情况和糖酵解水平。5.采用实时荧光定量PCR方法和Western blot方法检测PASMCs中PKM2、TIMP1、MMP2、I型胶原的表达水平。6.采用siRNA干扰的方法敲减PASMCs的PKM2表达,检测敲减PKM2后PASMCs糖酵解水平。7.采用siRNA干扰和PKM2激活剂TEPP46刺激患者PASMCs,细胞的增殖能力采用CCK8法检测,细胞的迁移能力采用划痕愈合实验检测。8.采用siRNA干扰患者PASMCs,采用实时荧光定量PCR法和蛋白印迹方法检测siRNA干预后细胞外基质标志物的表达。结果1.CTEPH患者PEA组织存在胶原异常沉积,TIMP1的表达较肺移植供体肺动脉组织表达增高,MMP2、MMP9变化无显着差异。CTEPH患者PEA组织中糖酵解相关基因PKM2、乳酸脱氢酶A（lactatedehydrogenaseA,LDHA）、己糖激酶2（hexokinase2,HK2）的表达增高,PKM1无显着差异。2.CTEPH患者PASMCs糖酵解水平较正常PASMCs增高。CTEPH患者PASMCs糖酵解相关基因PKM2、LDHA、单羧酸转运蛋白4（monocarboxylate transporter 4,MCT4）、低氧诱导因子 1α（hypoxiainducible factor 1α,HIF1α）较正常 PASMCs表达增高。患者PASMCs在PKM2敲减后观察到糖酵解水平下降,线粒体氧化磷酸化水平增加,糖酵解相关指标LDHA、HK2表达下降;正常PASMCs的PKM2敲减后能量代谢方式未见变化。3.PKM2敲减可抑制患者PASMCs的增殖和迁移能力;PKM2激活剂TEPP46刺激可增强患者PASMCs的增殖和迁移能力。4.CTEPH患者PASMCs细胞外基质代谢异常,TIMP1、Ⅰ型胶原表达增高,MMP2无显着差异。PKM2敲减可抑制患者PASMCs细胞外基质代谢标志物TIMP1的表达,细胞外基质Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达也下调。结论研究表明CTEPH患者肺动脉中存在糖酵解水平增加和细胞外基质代谢异常。CTEPH患者肺动脉中PKM2、TIMP1表达增加。PKM2可调节CTEPH患者PASMCs中糖酵解水平和细胞外基质的沉积,敲减PKM2可抑制患者PASMCs糖酵解水平和细胞外基质生成。研究可能为CTEPH的治疗提供一个潜在靶点。第二部分慢性血栓栓塞性肺动脉高压大鼠模型构建的初步研究背景及目的迄今为止,慢性血栓栓塞性肺动脉高压（CTEPH）的病理生理机制尚未完全阐明,CTEPH的治疗仍面临很多挑战。但由于缺乏成熟的动物模型,转化医学研究进展缓慢。因此,需要构建操作简便、实用、并能客观模拟临床CTEPH发生发展的动物模型。本研究旨在初步探索血管内皮生长因子受体抑制剂Sugen5416联合多次自体血栓注入的大鼠模型构建,为CTEPH小动物模型构建提供思路。方法1.6-8周龄雄性SD大鼠,随机分成5组,每组3只:对照组（Ctrl组,注入等体积生理盐水）、注栓6h组、注栓12h组、注栓24h组、注栓48h组。经大鼠内眦取血制备自体血栓,经左侧颈静脉注栓后分别于相应时间点处死取材。取肺组织进行HE染色,观察不同时间点自体血栓溶解情况。2.6-8周龄雄性SD大鼠,随机分为4组,每组8-12只:对照组（Ctrl组,注入等体积生理盐水）、自体血栓注入组（PE组）、Sugen5416给药组（SU组）、Sugen5416联合自体血栓注入组（PE+SU组）。SU组和PE+SU组于首次注栓前1天予Sugen5416 20mg/kg单剂量腹腔注射。PE组和PE+SU组于实验第1天、第3天、第5天经左侧颈静脉进行三次自体血栓注入,同时在造模初始2周每天进行抗纤溶剂氨甲环酸（315mg/kg/d）腹腔注射。第5周末测量各组大鼠肺动脉压力（mPAP）、肺小动脉中膜厚度百分比（MT%）、右心室肥厚指数（RVHI）评估造模情况。用免疫组织化学的方法检测各组大鼠肺小动脉中α-SMA、PKM1、PKM2的表达水平。结果1.首次注栓后12h大鼠肺动脉干及叶肺动脉血栓有溶解;24h血栓逐渐溶解至初始注入血栓体积的50%,48h后注入的自体血栓几乎完全溶解。2.与对照组、PE组、SU组相比,PE+SU组mPAP明显升高[（27.96±4.53）mmHg vs（14.59±2.51）mmHg,（17.67±2.99）mmHg,（19.78±1.68）mmHg,P<0.0001或P<0.001]。3.与对照组、PE组、SU组相比,PE+SU组MT%明显升高[（49.04±10.37）%vs（27.12±5.13）%,（33.52±6.16）%,（37.17±6.90）%,P值均<0.0001],PE+SU组肺小动脉有明显形态学改变,以远端细小动脉改变最为突出,主要表现为血管中膜平滑肌层增厚,平滑肌细胞增生,管腔有缩小。4.与对照组、PE组、SU组相比,PE+SU组RVHI明显增加[（0.42±0.06）vs（0.26±0.03）,（0.29±0.03）,（0.34±0.02）,P<0.0001 或 P<0.001 或 P<0.01]。5.各组间PKM1、PKM2的表达水平均无统计学差异（P>0.05）。结论本研究采用Sugen5416损伤内皮联合多次自体血栓栓塞肺动脉联合构建了轻中度CTEPH大鼠模型,虽存在一定局限性,但这个新模型也提示了 CTEPH发生发展与内皮损伤和血栓栓塞多重因素的潜在联系。为构建成熟稳定的CTEPH动物模型提供思路和为深入理解CTEPH病理生理机制提供思路。
孙琪[6]（2021）在《狄诺塞麦对卵巢切除合并腰椎融合大鼠邻近节段椎间盘退变的作用及其机制》文中研究说明第一部分大鼠卵巢切除合并腰椎融合诱发邻近节段椎间盘退变模型的研究目的:本研究拟对卵巢切除（Ovariectomy,OVX）大鼠进行腰椎融合手术（Posterolateral lumbar fusion,PLF）,建立邻近椎间盘退变（Adjacent segmental intervertebral disc degeneration,ASDD）的动物模型。观察腰椎融合后相邻椎体和椎间盘的退变情况,进一步讨论腰椎融合术后ASDD病理情况以及去除卵巢引起雌激素减少对ASDD的影响。方法:将雌性3月龄Sprague-Dawley（SD）大鼠40只随机分为以下4组:Sham组（假手术组）、OVX组（双侧卵巢切除组）、PLF组（腰椎融合组）以及OVX+PLF组（卵巢切除合并腰椎融合组）。大鼠3月龄时进行OVX术,术后4周再行PLF术。PLF术是对L4-5节段双侧融合同时将自体髂骨研磨呈颗粒状进行自体骨移植并使用钢丝穿过棘突缠绕,使之得以固定。在PLF术4周后,对行PLF术的动物进行X-ray扫描检查,观察腰椎融合情况并进行影像学评分,随之安乐死动物并取材,保留L3-6节段及其椎间盘。采用手法评估去检测腰椎融合情况,对标本进行微计算机断层扫描技术（Micro-computed tomography,Micro-CT）检测,分离提取L5-6椎间盘及相邻椎体,进行脱钙、包埋、切片,并采用HE染色评估ASDD情况。结果:1融合评估1.1X线检测结果:与OVX+PLF组相比,PLF组L4-5节段新骨形成和影像学密度增加。同时影像学评分结果证实PLF组显着高于OVX+PLF组（P<0.05）。由于Sham与OVX组未行PLF术,故未参与融合评分。1.2手法检测结果:作为检测融合情况的金标准,对PLF和OVX+PLF组行手法检查,发现L4-5节段固定良好,并且缠绕棘突的钢丝完整,未检测到融合节段的活动情况。2 Micro-CT检测结果与Sham组相比,OVX组和OVX+PLF组合大鼠的BMD、BV/TV、Tb.N和Tb.Th均显着降低（P<0.01）,而Tb.Sp显着增加（P<0.05,P<0.01）。然而Sham组与PLF组之间没有显着差异（P>0.05）。DHI评分在Sham组中显着高于OVX组,PLF组和OVX+PLF组（P<0.01）,OVX+PLF组的DHI评分显着低于OVX组和PLF组（P<0.05,P<0.01）,DHI评分在OVX组和PLF组之间未见显着差异（P>0.05）。3组织学检测及评分结果HE染色显示:与Sham组相比,OVX组、PLF组和OVX+PLF组髓核细胞减少且部分发生黏液样退变,纤维环排列紊乱,终板钙化增加,这种变化在OVX+PLF组中表现的尤为明显。组织学评分结果显示:与Sham组相比,OVX组、PLF组和OVX+PLF组评分显着增高（P<0.05）,与OVX组和PLF组相比,OVX+PLF组评分显着增高（P<0.05,P<0.05）,然而OVX组与OVX+PLF组之间无显着差异（P>0.05）。第二部分狄诺塞麦对卵巢切除大鼠合并腰椎融合诱发邻近节段椎间盘退变的作用目的:本研究拟对卵巢切除合并腰椎融合术诱导邻近节段椎间盘退变模型给予狄诺塞麦（Denosumab,Dmab）进行干预,从而观察Dmab对ASDD的作用。方法:将雌性3月龄Sprague-Dawley（SD）大鼠60只随机分为以下5组:Sham组、OVX组、PLF组以及OVX+PLF组和OVX+PLF+Dmab组,对大鼠分别行假手术（Sham组）,双侧卵巢切除（OVX组）,腰椎融合（PLF组）,卵巢切除合并腰椎融合（OVX+PLF组）和卵巢切除合并腰椎融合Dmab干预（OVX+PLF+Dmab组）。腰椎融合术72小时后,OVX+PLF+Dmab组大鼠经皮下注射给予Dmab治疗干预,剂量为0.25mg/kg/day,一周五天,其余各组大鼠经皮下注射给予等体积的生理盐水。在Dmab干预4周后对大鼠行安乐死并取材,保留L3-6节段及其椎间盘,同时采用手法评估去检测腰椎融合情况,随之行Micro-CT检测,提取L3-4椎间盘的m RNA行RT-PCR检测基质金属蛋白酶-13（Matrix metalloproteinase-3,MMP-13）、聚集蛋白聚糖（Aggrecan,Agg）和血小板型金属蛋白酶4（A sidintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 4,ADAMTS-4）m RNA的表达水平,将L5-6椎间盘及相邻椎体分离提取,并进行脱钙、包埋、切片。对L5-6椎间盘分别进行免疫组织化学染色检测MMP-13、Agg和ADAMTS-4的蛋白表达水平。结果:1手法检测:对PLF组、OVX+PLF组和OVX+PLF+Dmab组行手法检查,发现L4-5节段固定良好并且缠绕棘突的钢丝牢固完整,未检测到融合节段的活动情况。2 Micro-CT检测结果与Sham组相比,OVX组和OVX+PLF组合大鼠的BMD、BV/TV、和Tb.N均显着降低（P<0.01）,而Tb.Sp均显着增加（P<0.05,P<0.01）。与OVX+PLF组相比,OVX+PLF+Dmab组BMD、BV/TV和Tb.N均显着增加（P<0.01）,而Tb.Sp显着降低（P<0.01）。然而Sham组与PLF组之间没有显着差异（P>0.05）。3免疫组织化学染色与Sham组相比,OVX组、PLF组与OVX+PLF组中MMP-13（P<0.01）和ADAMTS-4（P<0.05,P<0.05,P<0.01）蛋白表达水平均增高而Agg（P<0.01）蛋白表达均降低。与OVX+PLF组相比,OVX+PLF+Dmab组中MMP-13（P<0.01）和ADAMTS-4（P<0.01）蛋白表达水平均显着降低而Agg（P<0.01）蛋白表达均显着增高。4 RT-PCR检测与Sham组相比,OVX组、PLF组与OVX+PLF组中MMP-13（P<0.01）和ADAMTS-4 m RNA（P<0.01）表达水平显着增高而Agg m RNA表达显着降低（P<0.01）。与OVX+PLF组相比,OVX+PLF+Dmab组中MMP-13（P<0.01）和ADAMTS-4 m RNA（P<0.01）表达水平显着降低而Agg（P<0.01）蛋白表达显着增高。第三部分狄诺塞麦对卵巢切除合并腰椎融合诱发相邻节段椎间盘退变作用机制的研究目的:本研究基于Dmab可以延缓卵巢切除大鼠合并腰椎融合后邻近节段椎间盘退变,然而其作用机制尚未研究,拟应用卵巢切除合并腰椎融合诱导邻近节段椎间盘退变模型,早期经皮下注射给予Dmab干预,进一步探讨Dmab对卵巢切除合并腰椎融合后大鼠邻近节段椎间盘退变的作用机制。方法:将雌性3月龄Sprague-Dawley（SD）大鼠60只随机分为以下5组:Sham组、OVX组、PLF组以及OVX+PLF组和OVX+PLF+Dmab组,对大鼠分别行假手术（Sham组）,双侧卵巢切除（OVX组）,腰椎融合（PLF组）,卵巢切除合并腰椎融合（OVX+PLF组）和卵巢切除合并腰椎融合Dmab干预（OVX+PLF+Dmab组）。腰椎融合术72小时后,OVX+PLF+Dmab组大鼠经皮下注射给予Dmab治疗干预,剂量为0.25mg/kg/day,一周五天,其余各组大鼠经皮下注射给予等体积的生理盐水。在Dmab干预4周后,安乐死动物并取材,保留L3-6节段及其椎间盘,Micro-CT分析L6椎体终板结构的变化,同时采用手法评估去检测腰椎融合情况。置于10%福尔马林溶液中固定保存,然后对标本进行脱钙、包埋、切片。对L5-6椎间盘进行免疫组织化学染色检测SOX-9（Sry related HMG box-9,SOX-9）和CD24（Cluster of differentiation 24,CD24）,番红O固绿染色染色评估ASDD情况。对L6椎体进行压缩试验检测椎体生物力学参数的变化。结果:1融合评估手法检测结果:对行腰椎融合的所有动物（PLF组、OVX+PLF组和OVX+PLF+Dmab组）进行手法检查,结果证实大鼠L4-5节段固定良好并且缠绕棘突的钢丝完整。均未检测到融合节段存在活动情况。2 L5-6终板检测在Sham组中可以观察到完整的终板结构,骨质结构相对紧密,在OVX组、PLF组和OVX+PLF组中发现终板存在不同程度骨质丢失的情况,同时发现终板上存不同程度的空隙,然而在OVX+PLF+Dmab中上述情况得以显着改善。分析结果证实,与Sham组相比,OVX组和OVX+PLF组中大鼠终板的Po.N均降低（P<0.05,P<0.01）,而Po（op）（P<0.05,P<0.01）和Po.V（tot）（P<0.01）显着增高。然而再给予Dmab治疗后,与OVX+PLF组相比,OVX+PLF+Dmab组中大鼠终板的Po.N均显着增高（P<0.01）,而Po（op）和Po.V（tot）均显着降低（P<0.01）。3组织学检测及评分结果番红O固绿染色显示,Sham组髓核内充大量的脊索细胞和细胞外基质,终板结构完整有大量的软骨细胞,纤维环排列整齐有序,然而与之相反,OVX组、PLF组和OVX+PLF组髓核内脊索细胞及围绕脊索细胞的细胞外基质显着减少并且部分发生黏液样退变,终板钙化严重伴有新骨形成,纤维环稀疏紊乱。上述退变情况在OVX+PLF组中表现的更加突出。然而,在给予Dmab干预后上述变化被显着抑制。组织学评分结果显示,与Sham组相比,OVX组、PLF组和OVX+PLF组评分显着增高（P<0.05）,与PLF组相比,OVX+PLF组评分显着增高（P<0.05）,然而OVX组与OVX+PLF组之间无显着差异（P>0.05）。与OVX+PLF组相比,OVX+PLF+Dmab组评分显着降低（P<0.05）。4生物力学检测椎体压缩实验证实,与Sham组相比,在OVX组、PLF组和OVX+PLF组椎体极限应力（Maximum stress）、弹性模量（Elastic modulus）、极限负荷（Maximum load）及屈服应力（Yield stress）均显着降低（P<0.01）。这些变化在OVX+PLF组中表现的更为明显,然而与OVX+PLF组相比,OVX+PLF+Dmab组极限应力、弹性模量、极限负荷及屈服应力均显着增加（P<0.01）。5免疫组织化学染色与Sham组相比,OVX组、PLF组与OVX+PLF组大鼠髓核中SOX-9的表达水平均显着增高（P<0.01）。与OVX组和PLF组相比,OVX+PLF组中SOX-9的表达水平均显着增高（P<0.01）。然而,与OVX+PLF组相比,OVX+PLF+Dmab组中SOX-9表达水平显着降低（P<0.01）。与Sham组相比,OVX组、PLF组与OVX+PLF组大鼠髓核中CD24的表达水平均显着降低（P<0.01）。与OVX组和PLF组相比,OVX+PLF组中CD24的表达水平均降低（P<0.05）。然而,与OVX+PLF组相比,OVX+PLF+Dmab组中CD24表达水平显着增高（P<0.01）。结论:1.切除卵巢大鼠行自体髂骨移植横突间合并棘突钢丝固定的腰椎融合术可以导致ASDD的发生。该模型对阐述ASDD病理改变以及后续治疗干预提供较好的动物模型基础。2.雌激素减少诱发的骨质疏松加重ASDD,提示在腰椎融合术后邻近节段椎间盘退变的病理进展中骨质疏松是一种重要的危险因素。在卵巢切除合并腰椎融合后相邻节段椎间盘退变动物模型中,早期给予Dmab药物干预可以改善椎体骨质疏松,延缓终板软骨的骨化,维持椎体骨密度和保持骨小梁结构的完整性,提示Dmab是防治ASDD的一种潜在性药物。3.Dmab不仅可以有效维持椎体的骨密度,还能通过促进成骨形成来改善椎体和终板骨小梁微结构维持椎体生物力学的性能,同时保护椎间盘结构功能的完整性,进而延缓ASDD的病理改变。
武作龙[7]（2021）在《SKI通过Wnt/β-catenin信号通路介导IL-1β诱导的髓核细胞凋亡和细胞外基质代谢》文中进行了进一步梳理目的:检测SKI在不同程度椎间盘退变（intervertebral disc degeneration,IDD）髓核组织中的表达及意义,并进一步研究SKI与髓核细胞凋亡和细胞外基质（extracellular matrix,ECM）代谢的关系。方法:基于MRI的Pfirrmann分级系统,收集不同分级IDD的髓核组织样本,采用反转录酶-聚合酶链锁反应（reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）、Western blot技术以及免疫组织化学染色法（immunohistochemistry,IHC）比较不同分级IDD髓核组织中SKI的m RNA和蛋白表达情况。采用酶消化法获得人的原代髓核细胞。使用白介素1-β（Interleukin 1β,IL-1β）刺激髓核细胞模拟IDD的细胞模型。使用慢病毒包被的si RNA下调髓核细胞中SKI的表达,氯化锂（lithium chloride,Li Cl）激活Wnt/β-catenin信号通路。综合运用Western blot、免疫荧光、TUNEL染色法检测细胞凋亡、ECM代谢以及Wnt/β-catenin信号通路中的相关蛋白表达变化。结果:通过IHC分析发现,相比于早期退变（Grade II）髓核组织,晚期退变Grade IV)髓核组织中SKI的阳性表达率更高。RT-PCR和Western blot实验发现,SKI的表达与IDD分级呈正相关。在体外,IL-1β诱导的髓核细胞退变模型中,细胞凋亡率明显增加,凋亡相关蛋白和ECM降解酶也显着增加,而抗凋亡相关分子和ECM相关蛋白却明显减少,另外,SKI的表达也出现显着的升高,并且在24h时达到峰值。当用慢病毒包被的si RNA敲减SKI后,发现IL-1β介导的髓核细胞凋亡和ECM降解明显好转。用Li Cl处理后,反转了SKI敲减对IL-1β介导的髓核细胞凋亡和ECM降解的保护作用。结论:本研究证实,SKI的表达与IDD程度呈现正相关。在IL-1β诱导的髓核细胞退变模型中,SKI下调通过抑制Wnt/β-catenin信号通路减少了髓核细胞的凋亡和ECM的代谢。因此,SKI可能是治疗IDD的有效靶点。
张树文[8]（2021）在《基于氧化应激探讨槲皮素防治椎间盘退变的实验研究》文中进行了进一步梳理目的:（1）以D-半乳糖构建髓核细胞衰老模型,并探讨其诱导髓核细胞衰老的氧化应激机制;（2）分析槲皮素对D-半乳糖诱导髓核细胞衰老、衰老相关分泌表型以及细胞外基质合成、分解代谢的影响;探讨槲皮素通过p38 MAPK信号通路调控自噬减轻D-半乳糖诱导髓核细胞衰老退变的分子机制;（3）经皮细针纤维环穿刺建立SD大鼠尾椎椎间盘退变模型,探究槲皮素在椎间盘退变防治中的作用。方法:（1）通过CCK-8细胞活性实验、细胞周期实验评估D-半乳糖对髓核细胞增殖活性的影响;应用衰老相关标记物检测D-半乳糖对髓核细胞衰老及衰老相关分泌表型的影响;通过RT-q PCR、免疫荧光以及翻红O染色分析D-半乳糖诱导髓核细胞衰老对细胞外基质代谢的影响;通过检测细胞内活性氧ROS、超氧化物歧化酶SOD和脂质过氧化产物MDA明确D-半乳糖诱导髓核细胞衰老的氧化应激机制。（2）通过CCK-8细胞活性实验、细胞周期实验评估槲皮素对D-半乳糖抑制髓核细胞增殖活性的影响;通过β-半乳糖甘酶染色、β-半乳糖甘酶活性、RT-q PCR等分析槲皮素对D-半乳糖诱导髓核细胞衰老及衰老相关分泌表型的影响;使用条件培养基共培养模式分析槲皮素抑制髓核细胞衰老及衰老相关分泌表型对单核巨噬细胞迁移和极化作用的影响;通过Western blot分析槲皮素对MAPK（JNK、ERK、p38）信号通路的影响。（3）通过Western blot、免疫荧光以及电镜扫描明确槲皮素对髓核细胞自噬的激活作用;使用3-MA抑制剂抑制自噬明确槲皮素通过激活自噬减轻D-半乳糖诱导的髓核细胞衰老和细胞外基质降解的保护作用;使用p38MAPK抑制剂SB203580明确槲皮素通过调节p38MAPK介导的自噬保护椎间盘退变。（4）通过X线透视和MRI扫描在影像学上评估槲皮素防治椎间盘退变的作用;使用HE染色评估椎间盘的病理变化,阿利新蓝和翻红O-固绿染色、免疫组织化学分析椎间盘组织中细胞外基质蛋白聚糖的含量和分布;应用免疫组织化学评估槲皮素对细针穿刺诱导椎间盘细胞凋亡和自噬指标的影响。结果:（1）CCK-8细胞增殖活性和细胞周期结果表明50g/L的D-半乳糖明显降低髓核细胞的增殖活性并出现细胞周期G1期阻滞;β-半乳糖甘酶染色、β-半乳糖甘酶活性以及衰老相关蛋白p53、p21、p16均明显增加;RT-q PCR结果提示衰老相关分泌表型在衰老髓核细胞中明显增加,以CCL2和MMP13最为显着;RT-q PCR、免疫荧光、翻红O染色结果表明衰老髓核细胞中II型胶原和蛋白聚糖明显降低;D-半乳糖诱导氧化应激反应,包括ROS和MDA含量的升高以及超氧化物歧化酶SOD活性的降低。（2）CCK-8结果表明25u M槲皮素对髓核细胞活性无影响,且逆转D-半乳糖对髓核细胞活性的抑制作用;细胞周期结果表明槲皮素减轻D-半乳糖引起的G1周期阻滞;条件培养基对单核巨噬细胞的迁移和极化实验表明槲皮素抑制髓核细胞衰老的条件培养基减少了单核巨噬细胞的迁移和向M1型巨噬细胞的极化作用;Western blot结果表明槲皮素通过调节JNK、ERK、p38 MAPK信号通路保护髓核细胞免受氧化应激损伤。（3）Western Blot、免疫荧光以及电镜结果表明槲皮素可以激活自噬并通畅自噬流,自噬相关蛋白Beclin-1和LC3II/I的表达升高,p62表达降低,给予3-MA预处理髓核细胞明显降低了槲皮素对髓核细胞自噬激活的作用;抑制自噬减少了槲皮素对髓核细胞外基质的保护作用,促进衰老相关蛋白和衰老相关分泌的表达;槲皮素降低了由D-半乳糖引起的p38MAPK、m TOR的磷酸化水平,抑制p38MAPK的磷酸化可以激活髓核细胞自噬并促进自噬流通畅。（4）细针穿刺成功构建椎间盘退变模型,椎间盘高度指数明显降低、Pfirrmann分级明显升高;槲皮素延缓细针穿刺诱导的椎间盘退变,增加椎间盘高度指数,降低Pfirrmann分级。HE染色结果表明模型组髓核面积减小,细胞数量减少,髓核与纤维环结构紊乱,槲皮素延缓椎间盘退变的进展,改善病理改良评分。阿利新蓝、翻红O-固绿以及蛋白聚糖免疫组织化学染色结果提示穿刺模型组损伤区髓核组织蛋白聚糖大量丢失且异常分布,槲皮素有效减少了蛋白聚糖的丢失和异常分布。免疫组织化学分析凋亡相关蛋白Bax和自噬相关蛋白Beclin-1,研究结果表明槲皮素处理减轻髓核细胞凋亡并促进髓核细胞的自噬水平。结论:（1）50g/L的D-半乳糖通过氧化应激途径诱导髓核细胞衰老和衰老相关分泌表型,降低髓核细胞活性,阻滞细胞周期,且加速细胞外基质分解代谢。（2）槲皮素预处理通过调控MAPK信号通路改善D-半乳糖诱导的髓核细胞衰老和衰老相关分泌表型的表达。（3）槲皮素通过p38MAPK介导的自噬抑制氧化应激诱导髓核细胞衰老退变。（4）槲皮素减轻细针穿刺诱导的椎间盘退变,影像学和组织病理学结果证实了其对椎间盘退变潜在的防治效果。
周海康[9]（2021）在《基于mTOR信号通路探究肠道菌群代谢产物丁酸钠对骨关节炎的作用及机制》文中研究表明目的:1)通过网络药理学分析肠道菌群代谢产物丁酸钠的药理作用靶点与骨关节炎病理过程中的共有作用基因与相互作用的机制。在体外构建骨关节炎软骨细胞模型并给予最佳剂量的丁酸钠干预探究丁酸钠对软骨细胞自噬的影响及对自噬调节关键蛋白m TOR信号通路的影响;2)进一步探究由丁酸钠诱导的软骨细胞自噬在软骨细胞及OA小鼠的关节软骨分解代谢、炎症反应、凋亡、活性氧、细胞周期及m TOR信号通路的影响;3)通过体内构建骨关节炎小鼠模型并给予不同剂量丁酸钠干预探究丁酸钠对骨关节炎软骨及软骨下骨中细胞自噬和m TOR信号通路的影响。方法:1)分离培养及鉴定C57BL/6J原代软骨细胞。通过CCK-8评估丁酸钠对正常的和IL-1β干预的软骨细胞活性影响。通过免疫印迹、免疫荧光和透射电镜观察丁酸钠对体外OA模型中软骨细胞自噬的影响。通过Western Blot和免疫组织化学染色评估丁酸钠对m TOR信号通路的影响;2)通过蛋白印迹、细胞流式、免疫荧光、免疫组织化学染色探索丁酸钠对IL-1β诱导的软骨细胞基质代谢、炎症、凋亡、活性氧损伤和细胞周期阻滞的影响;3)预实验设立6组,即假手术组,ACLT+安慰剂组,ACLT+浓度梯度的口服丁酸钠治疗组。术后60天评估软骨退变情况以确定最佳的用药剂量。后续的正式试验中设立3组,即假手术组,造模组和丁酸钠口服灌胃治疗组。通过HE和番红固绿染色评估关节软骨钙化和蛋白聚糖的情况,采用小鼠骨关节炎软骨组织评分评估软骨的退变程度。通过免疫组化分析小鼠关节软骨细胞外基质代谢和凋亡的特征性指标。通过免疫组织化学分析测定关节软骨自噬特征性指标LC3、Beclin1和p62的表达;4)通过Micro-CT分析丁酸钠对软骨下骨微观结构的改变;5)通过Micro-CT血管造影分析丁酸钠对软骨下骨血管增生的影响。免疫组织化学染色测定血管生成相关因子的表达水平。结果:1)形态学观察软骨细胞呈现出长梭形,阿力新蓝染色和免疫荧光都显示出特征性表达Collagen II,选取分离培养第二代后的软骨细胞进行实验。CCK-8结果显示,500μM以上浓度的丁酸钠对软骨细胞有毒性作用,250μM浓度的丁酸钠对IL-1β干预的软骨细胞的活性提升作用最显着。网络药理学结合生信分析结果显示丁酸钠靶向基因主要与生长因子、细胞存活以及免疫或炎症反应有关。丁酸钠靶向作用基因分别是AKT1、TP53、PTEN、GSK3B、MDM2、CDKN1A、CDKN1B、FOXO1、FOXO3、m TOR和CDK4。Western blotting、免疫荧光和透射电镜显示丁酸钠可有效激活并促进软骨细胞自噬并恢复受阻的自噬流;丁酸钠对软骨细胞自噬的增强作用主要是通过靶向调控PI3K/AKT/m TOR和MAPK/m TOR信号通路对m TOR抑制而产生的;2)丁酸钠通过促进软骨细胞的自噬而发挥抑制分解代谢与炎症因子（IL-6、TNF-α、IL-10、COX-2、Collagen II、aggrecan、MMP3、ADAMTS-5）和促凋亡因子（Bax、cleaved-caspase-3、Bcl-2）的表达。细胞流式分析显示丁酸钠可通过激活软骨细胞自噬而抑制由IL-1β诱导的软骨细胞异常活性氧生成和DNA损伤与细胞周期阻滞;3)体内构建OA模型探究丁酸钠的最佳剂量为150mg/kg。正式实验结果显示丁酸钠可抑制实验性OA关节软骨的退变。丁酸钠可促进软骨保护指标的表达（Collagen II）,抑制分解代谢指标（MMP3）。同时可抑制炎症因子的产生和软骨细胞凋亡指标的异常表达。实验性OA模型中,丁酸钠治疗同样可激活并促进软骨细胞自噬恢复通畅的自噬流;4)Micro-CT检测提示丁酸钠可有效抑制骨关节炎软骨下异常的骨吸收及骨囊肿的形成;5)Micro-CT显微血管造影成像技术显示丁酸钠可有效抑制软骨下骨异常增生的血管数量与机体。结论:1)丁酸钠通过抑制m TOR信号通路在病理状态下的磷酸化而激活并促进软骨细胞自噬;2)丁酸钠可通过增强软骨细胞的自噬作用而抑制骨关节炎软骨细胞的分解代谢、炎症反应和凋亡;3)丁酸钠可通过增强软骨细胞自噬减少ROS和缓解DNA损伤而引起的软骨细胞周期阻滞;4)丁酸钠在OA小鼠模型中可保护软骨的完整性并促进蛋白多糖的合成。抑制软骨下骨的破骨细胞的异常激活,维持软骨下骨成骨与破骨细胞正常的耦联机制;5)丁酸钠通过抑制血管生成因子的表达抑制软骨下骨血管的异常增生,从延缓骨关节炎进展。
陈国昆[10]（2020）在《节律基因Bmal1通过调控MAPK/ERK信号通路介导颞下颌骨关节炎的机制研究》文中提出目的:颞下颌骨关节炎（Temporomandibular joint osteoarthritis,TMJ-OA）是最常见的关节退行性疾病。TMJ-OA在存在精神和心理等方面的诱发因素作用下,当发生咬合创伤时更为好发。本课题目的是探讨慢性睡眠节律紊乱（circadian rhythm disturbance,CRD）与TMJ-OA的关系,在睡眠节律紊乱状态下,节律基因Bmal1和MAPK/ERK信号通路及其下游相关转录因子的表达变化,及其导致细胞外基质降解及关节炎症进行发展的机制,明确时钟节律基因Bmal1通过调控MAPK/ERK信号通路介导的颞下颌骨关节炎的机制。方法:检测大鼠时钟节律基因Bmal1的昼夜表达节律后,选择合适时间段采用实验用改良多平台模型（Modified multiple platform method,MMPM）干扰大鼠的正常睡眠节律。测定Wistar大鼠血清中的皮质醇（Cortisol,CORT）和促肾上腺皮质激素（Adrenocorticotropic Hormone,ACTH）的激素水平,评估大鼠慢性睡眠节律紊乱模型建立的效果。HE染色法观察大鼠TMJ髁突软骨的破坏程度。采用免疫组织化学、Western blot和RT-qPCR观察时钟节律基因Bmal1,MAPK/ERK信号通路及关节炎症性因子IL-6在睡眠节律紊乱状态的大鼠髁突软骨中的表达变化。体外分离培养大鼠髁突软骨细胞（Mandibular condylar chondrocytes,MCCs）,使用炎症因子白细胞介素6（Interleukin 6,IL-6）诱导MCCs的炎性状态后,分别使用ERK特异性抑制U0126、Bmal1-siRNA和Bmal1-plasmid分组加入到体外TMJ-OA模型的软骨细胞培养基中。通过阿利新蓝染色法观察软骨细胞的形态特征,通过CCK-8检测软骨细胞的生长增殖状态,并通过Western blot观察时钟节律基因Bmal1,MAPK/ERK信号通路及下游的基质金属蛋白酶和细胞外基质的表达变化。明确时钟节律基因Bmal1通过调控MAPK/ERK信号通路介导的颞下颌骨关节炎的机制。再次通过给睡眠节律紊乱状态下的大鼠关节腔内注射含Bmal1过表达质粒的腺病毒,使用Western blot和RT-qPCR观察时钟节律基因Bmal1,MAPK/ERK信号通路及下游的基质金属蛋白酶和细胞外基质的表达变化,在体内进一步验证时钟节律基因Bmal1对于睡眠节律紊乱状态下的颞下颌骨关节的影响。结果:我们采用MMPM干扰大鼠正常睡眠节律后,成功的导致大鼠进入睡眠节律紊乱的应激状态。血清学结果显示:随着睡眠节律紊乱时间的延长,睡眠节律紊乱组（Circadian rhythm disturbance,CRD）和恢复组（Circadian rhythm recovery,REC）与对照组（Control,CON）的各亚组进行比较,大鼠的血清中CORT和ACTH的含量显着上升（p<0.05）。HE染色结果显示:保持正常昼夜节律CON组的大鼠髁突软骨结构正常,而CRD组和REC组的大鼠髁突软骨出现损害并表现出病理学改变。且随着睡眠节律紊乱时间的延长破坏加重。免疫组化、Western blot和RT-qPCR结果显示:与CON组对比,CRD和REC组的IL-6和p-ERK均表达均增高。且随着睡眠节律紊乱的时间延长升高。当停止睡眠节律干扰并调整至正常的昼夜节律后,IL-6和p-ERK的表达降低。而时钟节律基因Bmll经过睡眠节律干扰后,在CRD和REC组中的表达较CON组均降低。当停止进行睡眠节律干扰并调整至正常的昼夜节律后,Bmal1的表达上调。体外成功分离并培养大鼠MCCs,并用IL-6诱导MCCs的炎性状态。使用U0126抑制ERK的磷酸化后,Western结果显示下游的MMP3、MMP13和ADAMTS5表达下调,Col2α1表达上调,而时钟节律基因Bmal1的表达差异无统计学意义（p>0.05）。阿利新蓝染色的结果显示,在炎症状态下使用U0126后硫酸软骨素分泌增多。CCK-8结果显示炎症状态下细胞增殖速率下降,使用U0126后增殖速率提高。使用Bmal1-siRNA后,Western结果显示p-ERK、MMP3,MMP13和ADAMTS5表达上调,Col2α1表达下调,而使用Bmal1-plasmid后结果相反。同时阿利新蓝染色结果显示在炎症状态下,使用Bmal1-siRNA后硫酸软骨素分泌减少,使用Bmal1-plasmid后分泌增多。CCK-8结果显示炎症状态下加入Bmal1-siRNA后细胞增殖速率进一步降低,而加入Bmal1-plasmid后细胞增殖速率提高。给睡眠节律紊乱状态下的大鼠关节腔内注射含Bmal1过表达质粒的腺病毒,Western blot和RT-qPCR结果显示,注射组和对照组组相比p-ERK、MMP3、MMP13和ADAMTS5表达下调,而COL2α1的表达上调。结论:当睡眠节律紊乱状态下,时钟节律基因Bmal1表达失调,导致MAPK/ERK信号通路被激活,ERK的磷酸化水平逐渐升高,同时与关节炎症的发展密切相关的炎症性因子IL-6和软骨细胞外基质降解相关的酶类MMP3、MMP13和ADAMTS5表达水平升高。而与细胞外间质结构的完整性相关的COL2α1表达下调,继而髁突产生炎症病理性改变。本研究通过探索睡眠节律紊乱状态对OA软骨退变的调控作用机理,解释了时钟节律基因Bmall在睡眠节律紊乱状态下骨关节炎发病过程中的重要作用。为今后“脑-关节轴”（brain-joint axis）相关的OA病理生理学研究奠定了基础。
二、细胞外基质的代谢（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、细胞外基质的代谢（论文提纲范文）
（1）细胞外基质在骨关节炎发生、发展中的作用及临床研究价值（论文提纲范文）
| 文章快速阅读： |
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1 资料来源 |
| 1.1.1 检索人及检索时间 |
| 1.1.2 检索时限 |
| 1.1.3 检索数据库 |
| 1.1.4检索词 |
| 1.1.5 检索文献类型 |
| 1.1.6 手工检索 |
| 1.1.7 检索策略 |
| 1.1.8 检索文献量 |
| 1.2 入组标准 |
| 1.2.1 纳入标准 |
| 1.2.2 排除标准 |
| 1.3 数据提取及质量评估 |
| 2 结果Results |
| 2.1 细胞外基质相关研究概述 |
| 2.2 细胞外基质在机体中的作用 |
| 2.3 细胞外基质在骨关节炎发生、发展中的作用及其辅助诊断价值 |
| 2.3.1 细胞外基质在骨关节炎发生、发展过程中的作用 |
| 2.3.2 细胞外基质是骨关节炎生物标记物的来源 |
| 2.4 细胞外基质在治疗骨关节炎方面的前景 |
| 2.4.1 相关通路的研究 |
| 2.4.2 细胞外基质组织工程支架的应用 |
| 3 总结与展望Summary and prospects |
| 3.1 既往他人在该领域研究的贡献和存在的问题 |
| 3.2 区别于他人他篇的特点 |
| 3.3 文章的局限性 |
| 3.4 文章的意义 |
（2）机械拉伸下IL-8调控角膜细胞基质重塑蛋白表达的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 圆锥角膜的发病机制简介 |
| 1.1.1 圆锥角膜的概况 |
| 1.1.2 圆锥角膜的发病机制 |
| 1.2 圆锥角膜与细胞外基质代谢 |
| 1.2.1 角膜细胞外基质的组成 |
| 1.2.2 圆锥角膜与胶原代谢 |
| 1.2.3 圆锥角膜与蛋白聚糖 |
| 1.3 力刺激在角膜相关病变中的作用 |
| 1.4 力刺激对细胞外基质代谢的影响 |
| 1.5 促炎因子在细胞外基质代谢中的作用 |
| 1.5.1 圆锥角膜中促炎因子的表达 |
| 1.5.2 力刺激对促炎因子表达的调控作用及机制 |
| 1.5.3 促炎因子对细胞外基质代谢的影响 |
| 1.6 本研究的目的及意义 |
| 第2章 机械拉伸对角膜细胞IL-8表达的作用及机制 |
| 2.1 实验试剂及仪器 |
| 2.1.1 实验试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 角膜成纤维细胞的提取及培养 |
| 2.2.2 细胞处理 |
| 2.2.3 活性氧含量检测 |
| 2.2.4 基因表达分析 |
| 2.2.5 数据分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 角膜成纤维细胞中IL-8基因的表达 |
| 2.3.2 机械拉伸诱导角膜成纤维细胞中IL-8基因的表达 |
| 2.3.3 机械拉伸诱导角膜成纤维细胞中氧化应激相关基因的表达 |
| 2.3.4 AQP1介导的氧化应激参与角膜成纤维细胞中IL-8基因的表达调控 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 IL-8对角膜细胞外基质代谢的影响 |
| 3.1 实验试剂及仪器 |
| 3.1.1 实验试剂 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 角膜成纤维细胞的提取及培养 |
| 3.2.2 载体构建 |
| 3.2.3 细胞转染 |
| 3.2.4 IL-8相互作用蛋白预测 |
| 3.2.5 实时荧光定量PCR检测 |
| 3.2.6 蛋白表达分析 |
| 3.2.7 数据分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 IL-8基因siRNA干扰体系和过表达体系的构建 |
| 3.3.2 IL-8对人角膜成纤维细胞胶原代谢相关蛋白表达的影响 |
| 3.3.3 IL-8对人角膜成纤维细胞胶原含量的影响 |
| 3.3.4 IL-8对人角膜成纤维细胞蛋白聚糖基因表达的影响 |
| 3.3.5 IL-8基因相互作用蛋白预测 |
| 3.3.6 IL-8对角膜成纤维细胞其他促炎因子表达的影响 |
| 3.3.7 干扰IL-8后角膜成纤维细胞中VEGF的表达 |
| 3.3.8 IL-8对下游信号途径关键蛋白表达的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 全文总结与展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（3）miR-146b巨球蛋白α2M信号轴在骨关炎病理过程的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 骨关节炎 |
| 1.2 关节结构和功能 |
| 1.2.1 关节软骨 |
| 1.2.2 滑膜 |
| 1.2.3 滑膜液 |
| 1.2.4 软骨下骨 |
| 1.3 骨关节炎的病理改变 |
| 1.3.1 关节软骨退化 |
| 1.3.2 细胞凋亡 |
| 1.3.3 自噬 |
| 1.3.4 滑膜炎症 |
| 1.4 MicroRNA的作用机制 |
| 1.4.1 MicroRNA与骨关节炎 |
| 1.4.2 MicroRNA在疾病诊断中的应用 |
| 1.4.3 MicroRNA在疾病治疗中的应用 |
| 1.5 研究的目的和意义 |
| 第二章 巨球蛋白α2M在OA病理过程中的表达变化及作用研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 miR146b靶向巨球蛋白α2M调控软骨细胞增殖及分解代谢 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 博士研究生期间研究成果 |
| 致谢 |
（4）碳水化合物磺基转移酶3在椎间盘退变中的作用及调控机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 椎间盘退变时CHST3 的表达差异及调控机制研究 |
| 一、实验对象和材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 第二部分 CHST3 影响椎间盘退变的作用研究 |
| 一、实验对象和材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 第三部分 CHST3 通过自噬调控椎间盘退变的机制研究 |
| 一、实验对象和材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 基因多态性对椎间盘退变的影响 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表的文章 |
| 致谢 |
（5）PKM2调节糖酵解和细胞外基质沉积促进CTEPH血管重构的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 PKM2调节糖酵解和细胞外基质沉积促进CTEPH血管重构 |
| 一 前言 |
| 二 材料与方法 |
| 1 病例收集 |
| 1.1 病例纳入 |
| 1.2 临床信息收集 |
| 1.3 标本采集及保存 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 实验细胞 |
| 2.2 试剂 |
| 2.3 耗材和设备 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 临床组织实验方法 |
| 3.2 细胞实验方法 |
| 3.3 统计学方法 |
| 三 研究结果 |
| 1 纳入病例基本特征 |
| 2 CTEPH患者PEA组织病理表现 |
| 3 CTEPH患者细胞外基质代谢异常 |
| 3.1 CTEPH患者PEA组织胶原异常沉积 |
| 3.2 CTEPH患者PEA组织中TIMP1表达增加 |
| 4 CTEPH患者PEA组织存在糖酵解水平增加 |
| 4.1 CTEPH患者PEA组织中糖酵解相关基因表达增加 |
| 4.2 CTEPH患者PEA组织中PKM2表达增加 |
| 5 PEA组织原代细胞培养及平滑肌细胞表型鉴定 |
| 6 CTEPH肺动脉平滑肌细胞存在糖酵解水平增加和细胞外基质代谢异常 |
| 6.1 CTEPH患者肺动脉平滑肌细胞糖酵解水平增加 |
| 6.2 CTEPH患者肺动脉平滑肌细胞糖酵解相关基因表达增加 |
| 6.3 CTEPH患者肺动脉平滑肌细胞细胞外基质代谢异常 |
| 7 PKM2敲减可抑制CTEPH肺动脉平滑肌细胞糖酵解水平 |
| 7.1 siRNA敲减肺动脉平滑肌细胞PKM2表达 |
| 7.2 PKM2敲减后肺动脉平滑肌细胞糖酵解水平下降 |
| 7.3 PKM2敲减后肺动脉平滑肌细胞糖酵解相关基因表达下降 |
| 8 PKM2调节CTEPH肺动脉平滑肌细胞的增殖、迁移、细胞外基质表达 |
| 8.1 PKM2调节CTEPH患者肺动脉平滑肌细胞增殖 |
| 8.2 PKM2调节CTEPH患者肺动脉平滑肌细胞迁移 |
| 8.3 敲减PKM2抑制CTEPH患者PASMCs细胞外基质表达 |
| 四 讨论 |
| 1 CTEPH患者存在糖酵解水平增加 |
| 2 PKM2敲减后患者PASMCs和正常PASMCs的糖酵解水平不一致 |
| 3 PKM2调节患者PASMCs的增殖和迁移 |
| 4 CTEPH患者细胞外基质表达异常 |
| 5 敲减PKM2可抑制CTEPH患者PASMCs细胞外基质表达 |
| 6 局限性 |
| 五 结论与展望 |
| 六 参考文献 |
| 第二部分 慢性血栓栓塞性肺动脉高压大鼠模型构建的初步研究 |
| 一 前言 |
| 二 材料与方法 |
| 1 实验动物 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 试剂 |
| 2.2 耗材和设备 |
| 2.3 溶液配制 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 急性肺栓塞大鼠的建立 |
| 3.2 联合打击构建CTEPH大鼠模型 |
| 三 研究结果 |
| 1 首次注栓后自体血栓溶解情况观察 |
| 2 联合打击后大鼠的体重变化 |
| 3 联合打击后大鼠的肺动脉压力水平 |
| 4 联合打击后大鼠的肺血管重构程度 |
| 5 联合打击后大鼠的右心室肥厚指数 |
| 6 PKM2在各组大鼠肺小动脉的表达 |
| 四 讨论 |
| 五 结论与展望 |
| 六 参考文献 |
| 文献综述一 糖代谢异常在肺动脉高压中的研究进展 |
| 1 概述 |
| 2 葡萄糖代谢重编程 |
| 3 糖代谢异常与肺动脉高压 |
| 4 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 慢性血栓栓塞性肺动脉高压动物模型构建研究现状 |
| 1 CTEPH定义与病理生理 |
| 2 动物的选择 |
| 3 常用造模方法 |
| 4 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）狄诺塞麦对卵巢切除合并腰椎融合大鼠邻近节段椎间盘退变的作用及其机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 大鼠卵巢切除合并腰椎融合诱发邻近节段椎间盘退变模型的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 狄诺塞麦对卵巢切除大鼠合并腰椎融合诱发邻近节段椎间盘退变的作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 狄诺塞麦对卵巢切除合并腰椎融合诱发相邻节段椎间盘退变作用机制的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 椎间盘退变的病因和再生治疗相关研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）SKI通过Wnt/β-catenin信号通路介导IL-1β诱导的髓核细胞凋亡和细胞外基质代谢（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 组织标本来源 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.1.4 主要实验试剂的配置方法 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 人IVD标本的收集与储存 |
| 2.2.2 髓核组织中SKI m RNA的检测 |
| 2.2.3 髓核组织中SKI蛋白的检测 |
| 2.2.4 髓核组织的石蜡切片制作 |
| 2.2.5 髓核标本的免疫组织化学染色 |
| 2.2.6 原代人髓核细胞的提取与培养 |
| 2.2.7 髓核细胞的传代 |
| 2.2.8 髓核细胞的甲苯胺蓝染色 |
| 2.2.9 髓核细胞的H&E染色 |
| 2.2.10 髓核细胞的番红O染色 |
| 2.2.11 髓核细胞的转染 |
| 2.2.12 免疫荧光染色 |
| 2.2.13 TUNEL染色 |
| 2.3 统计分析 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 SKI在退变的IVD髓核组织中高表达 |
| 3.2 原代髓核细胞的形态观察和纯度鉴定 |
| 3.3 IL-1β增加了髓核细胞中SKI的表达 |
| 3.4 敲减SKI逆转了IL-1β对髓核细胞凋亡不利影响 |
| 3.5 敲减SKI保护了IL-1β对髓核ECM的不利影响 |
| 3.6 SKI在髓核细胞中对Wnt/β-catenin信号通路的影响 |
| 3.7 SKI敲减通过抑制Wnt/β-catenin信号通路保护了髓核细胞凋亡 |
| 3.8 SKI敲减通过抑制Wnt/β-catenin信号通路保护了髓核ECM的代谢 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 Wnt 通路在椎间盘形成、发育及退变中的作用 |
| 参考文献 |
| 附录 中英文缩略词表 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（8）基于氧化应激探讨槲皮素防治椎间盘退变的实验研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 髓核细胞衰老退变模型的构建与评估 |
| 1 内容与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 (一)槲皮素抑制氧化应激诱导髓核细胞衰老及衰老相关分泌表型 |
| 1 内容与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 (二)槲皮素通过p38MAPK介导的自噬抑制髓核细胞衰老和衰老相关分泌表型 |
| 1 内容与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 槲皮素减轻大鼠椎间盘退变的实验研究 |
| 1 内容与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 细胞衰老及衰老相关分泌表型在椎间盘退变中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 新疆医科大学博士研究生学位论文 导师评阅表 |
（9）基于mTOR信号通路探究肠道菌群代谢产物丁酸钠对骨关节炎的作用及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 丁酸钠对小鼠软骨细胞自噬的影响及作用机制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 丁酸钠通过激活软骨细胞自噬缓解IL-1β诱导的软骨细胞损伤 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 丁酸钠缓解骨关节炎软骨及软骨下骨异常病理改变的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 研究结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 mTOR信号通路在骨关节炎病理机制中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（10）节律基因Bmal1通过调控MAPK/ERK信号通路介导颞下颌骨关节炎的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 前言 |
| 实验一 睡眠节律紊乱对髁突软骨节律基因Bmall和MAPK/ERK信号通路的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 实验二 Bmall与MAPK/ERK信号通路的相关性和其调控髁突软骨细胞及基质代谢的作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验三 Bmall对TMJ-OA大鼠MAPK/ERK信号通路的影响及其调控软骨细胞及基质代谢的作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 英文论文1 |
| 英文论文2 |
四、细胞外基质的代谢（论文参考文献）
- [1]细胞外基质在骨关节炎发生、发展中的作用及临床研究价值[J]. 廖建钊,夏天. 中国组织工程研究, 2022(12)
- [2]机械拉伸下IL-8调控角膜细胞基质重塑蛋白表达的机制研究[D]. 孙宇宁. 太原理工大学, 2021(01)
- [3]miR-146b巨球蛋白α2M信号轴在骨关炎病理过程的作用及机制研究[D]. 柳鑫. 南方医科大学, 2021(02)
- [4]碳水化合物磺基转移酶3在椎间盘退变中的作用及调控机制研究[D]. 钟华建. 中国人民解放军海军军医大学, 2021(01)
- [5]PKM2调节糖酵解和细胞外基质沉积促进CTEPH血管重构的实验研究[D]. 庞文翼. 北京协和医学院, 2021(02)
- [6]狄诺塞麦对卵巢切除合并腰椎融合大鼠邻近节段椎间盘退变的作用及其机制[D]. 孙琪. 河北医科大学, 2021(02)
- [7]SKI通过Wnt/β-catenin信号通路介导IL-1β诱导的髓核细胞凋亡和细胞外基质代谢[D]. 武作龙. 兰州大学, 2021(11)
- [8]基于氧化应激探讨槲皮素防治椎间盘退变的实验研究[D]. 张树文. 新疆医科大学, 2021(01)
- [9]基于mTOR信号通路探究肠道菌群代谢产物丁酸钠对骨关节炎的作用及机制[D]. 周海康. 新疆医科大学, 2021(08)
- [10]节律基因Bmal1通过调控MAPK/ERK信号通路介导颞下颌骨关节炎的机制研究[D]. 陈国昆. 山东大学, 2020(04)